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Author: Welten, S.M.J.
Title: The role of 14q32 microRNAs in vascular remodelling
Issue Date: 2017-03-09
'ĞŶĞƌĂůŝŶƚƌŽĚƵĐƟŽŶĂŶĚŽƵƚůŝŶĞŽĨƚŚĞƐŝƐ
Chapter 1
1
'ĞŶĞƌĂů/ŶƚƌŽĚƵĐƟŽŶ
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Vascular remodelling
dŚĞǀĂƐĐƵůĂƚƵƌĞŝƐĂŶĂĐƟǀĞŽƌŐĂŶǁŚŝĐŚŝƐĐĂƉĂďůĞŽĨƐĞŶƐŝŶŐĂŶĚĂĚĂƉƟŶŐƚŽĞŶǀŝƌŽŶŵĞŶƚĂůƐƟŵƵůŝ
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Angiogenesis and arteriogenesis
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ůĂLJŝŶŐĚŽǁŶĂďĂƐĞŵĞŶƚŵĞŵďƌĂŶĞ͘ŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐŝƐŶŽƚĂůǁĂLJƐďĞŶĞĮĐŝĂů͕ĂƐŝƚĐĂŶĨĂĐŝůŝƚĂƚĞƚƵŵŽƵƌ
ŐƌŽǁƚŚĂŶĚŵĞƚĂƐƚĂƐŝƐϱĂƐǁĞůůĂƐĂĐĐĞůĞƌĂƚĞĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐϲ.
12
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/ŶĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ƉƌĞͲĞdžŝƐƟŶŐĂƌƚĞƌŝŽůĂƌĂŶĂƐƚŽŵŽƐĞƐĞŶůĂƌŐĞƚŽĨŽƌŵĐŽůůĂƚĞƌĂůĂƌƚĞƌŝĞƐ͘ŽůůĂƚĞƌĂů
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ďĞĞŶĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚƚŽƉůĂLJĂƌŽůĞŝŶĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͖ŵŽŶŽĐLJƚĞƐĂŶĚE<ĐĞůůƐĂƌĞƚŚŽƵŐŚƚƚŽƉůĂLJĂƌŽůĞ
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ŐƌŽǁƚŚĨĂĐƚŽƌƐĂŶĚĐLJƚŽŬŝŶĞƐ͕ĐŽŶƚƌŝďƵƟŶŐƚŽƚŚĞŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJĞŶǀŝƌŽŶŵĞŶƚŽĨƚŚĞĂƌƚĞƌŝŽůĞƐ͘DĂƚƌŝdž
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ĞŶůĂƌŐĞŵĞŶƚŽĨƚŚĞĐŽůůĂƚĞƌĂůĂƌƚĞƌLJĚŝĂŵĞƚĞƌŝƐĞƐƚĂďůŝƐŚĞĚĂŶĚďůŽŽĚŇŽǁƚŽĚŝƐƚĂůƟƐƐƵĞƐŝƐ;ƉĂƌƟĂůůLJͿ
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Flow
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LJƚŽŬŝŶĞƐƌĞůĞĂƐĞĚďLJƚŚĞĞŶĚŽƚŚĞůŝƵŵǁŝůůĂƩƌĂĐƚĂŶĚƌĞĐƌƵŝƚŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJĐĞůůƐ͕ƐƵĐŚĂƐŵŽŶŽĐLJƚĞƐ͕ƚŽƚŚĞǀĞƐƐĞůǁĂůů͘KŶĐĞ
ŝŶǀĂĚĞĚŝŶƚŽƚŚĞǀĞƐƐĞůǁĂůů͕ŵŽŶŽĐLJƚĞƐǁŝůůĚŝīĞƌĞŶƟĂƚĞŝŶƚŽŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐĂŶĚƌĞůĞĂƐĞŐƌŽǁƚŚĨĂĐƚŽƌƐ͕ŵĂƚƌŝdžŵĞƚĂůůŽƉƌŽƚĞŝŶĂƐĞƐ
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ƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĂŶĚƉŽƐƚͲŝŶƚĞƌǀĞŶƟŽŶĂůƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐ
dŚĞ ŵŽƐƚ ĐŽŵŵŽŶ ĐĂƵƐĞ ƵŶĚĞƌůLJŝŶŐ ĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌ ĚŝƐĞĂƐĞƐ ŝƐ ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͕ ƚŚĞ ďƵŝůĚͲƵƉ ŽĨ
ƉůĂƋƵĞƐŝŶƚŚĞŝŶŶĞƌǁĂůůƐŽĨƚŚĞĂƌƚĞƌŝĞƐ͘ƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐŝƐĂĐŚƌŽŶŝĐ͕ŵƵůƟĨĂĐƚŽƌŝĂůĚŝƐĞĂƐĞŝŶǁŚŝĐŚ
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ŽĨ ĞĂƌůLJ ĨĂƩLJ ƐƚƌĞĂŬƐ ƐƚĂƌƚƐ Ăƚ ƐŝƚĞƐ ŽĨ ĚĂŵĂŐĞĚ Žƌ ĂĐƟǀĂƚĞĚ ĞŶĚŽƚŚĞůŝƵŵ ĐĂƵƐĞĚ ďLJ ĨŽƌ ĞdžĂŵƉůĞ
ĚLJƐůŝƉŝĚĞŵŝĂ͕ ĚŝƐƚƵƌďĞĚ ŇŽǁ Žƌ ŚLJƉĞƌƚĞŶƐŝŽŶ͘ dŚĞ ĂĐƟǀĂƚĞĚ ĞŶĚŽƚŚĞůŝƵŵ ŝŶĐƌĞĂƐĞƐ ĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶ ŽĨ
ĂĚŚĞƐŝŽŶŵŽůĞĐƵůĞƐƐƵĐŚĂƐsDͲϭĂŶĚƐĞůĞĐƟŶƐ͘ŝƌĐƵůĂƟŶŐŵŽŶŽĐLJƚĞƐƐƵďƐĞƋƵĞŶƚůLJĂĚŚĞƌĞĂŶĚ
ŝŶĮůƚƌĂƚĞŝŶƚŽƚŚĞĂƌƚĞƌŝĂůǁĂůů͘DŽŶŽĐLJƚĞƐǁŝůůƚŚĞŶĚŝīĞƌĞŶƟĂƚĞŝŶƚŽŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ͕ǁŚŝĐŚĂƌĞĂďůĞ
ƚŽƚĂŬĞƵƉůŝƉŝĚƐǀŝĂƚŚĞŝƌƐĐĂǀĞŶŐĞƌƌĞĐĞƉƚŽƌƐ͕ĐŽŶƚƌŝďƵƟŶŐƚŽƚŚĞĨŽƌŵĂƟŽŶŽĨĨŽĂŵĐĞůůƐĂŶĚĞĂƌůLJ
ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐůĞƐŝŽŶƐ12͘dŚĞĐŽŶƟŶƵĞĚŝŶŇƵdžĂŶĚĂĐƟǀĂƟŽŶŽĨŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJĐĞůůƐƐƵĐŚĂƐŵŽŶŽĐLJƚĞƐ͕
dĐĞůůƐĂŶĚŵĂƐƚĐĞůůƐƌĞƐƵůƚƐŝŶƚŚĞƉƌŽŐƌĞƐƐŝŽŶŽĨĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐϭϯ͕ϭϰ͘dŚĞƌĞĐŽŐŶŝƟŽŶŽĨŵŽĚŝĮĞĚ
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ďLJƉĂƩĞƌŶƌĞĐŽŐŶŝƟŽŶƌĞĐĞƉƚŽƌƐƐƵĐŚĂƐdŽůůͲůŝŬĞƌĞĐĞƉƚŽƌƐ;d>ZƐͿƌĞƐƵůƚƐŝŶĂĐŚƌŽŶŝĐŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJ
ƐƚĂƚĞŽĨƚŚĞĂīĞĐƚĞĚǀĞƐƐĞůĂƌĞĂ͘ĚĚŝƟŽŶĂůůLJ͕ƚŚĞƌĞůĞĂƐĞŽĨĐLJƚŽŬŝŶĞƐĂŶĚŐƌŽǁƚŚĨĂĐƚŽƌƐƐƟŵƵůĂƚĞƐ
ƐŵŽŽƚŚŵƵƐĐůĞĐĞůůƐ͕ǁŚŝĐŚƐƚĂƌƚƚŽƉƌŽůŝĨĞƌĂƚĞĂŶĚŵŝŐƌĂƚĞŝŶƚŽƚŚĞŝŶƟŵĂ͘
Shear stress
Extracellular Matrix Adhesion Molecules bFGF
MCP-1 VEGF MMPs
džƚƌĂĐĞůůƵůĂƌDĂƚƌŝdžĞŐƌĂĚĂƟŽŶ
WƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ
Endothelial cells Smooth muscle cells Monocyte/
Macrophage
Monocyte recruitment
ŽůůĂƚĞƌĂůĂƌƚĞƌLJĨŽƌŵĂƟŽŶ T cells
NK cells Fibroblasts
ϭϰ
,ĞƌĞ͕ƐŵŽŽƚŚŵƵƐĐůĞĐĞůůƐǁŝůůƉƌŽĚƵĐĞĐŽůůĂŐĞŶĂŶĚŽƚŚĞƌĞdžƚƌĂĐĞůůƵůĂƌŵĂƚƌŝdžĐŽŵƉŽŶĞŶƚƐ͕ĨŽƌŵŝŶŐ
ĂĮďƌŽƵƐĐĂƉϭϱ͘KǀĞƌƟŵĞ͕ĐĞůůƵůĂƌĂƉŽƉƚŽƐŝƐĐĂŶůĞĂĚƚŽƚŚĞĨŽƌŵĂƟŽŶŽĨĂŶĞĐƌŽƟĐĐŽƌĞĐŽŶƚĂŝŶŝŶŐ
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ĨŽƌLJĞĂƌƐĂƐůŽŶŐĂƐƚŚĞůĞƐŝŽŶƐĐŽŶƚĂŝŶĂƚŚŝĐŬĮďƌŽƵƐĐĂƉĂŶĚůƵŵĞŶĂƌĞĂŝƐƉƌĞƐĞƌǀĞĚϭϲ͘,ŽǁĞǀĞƌ͕
ƉƌŽŐƌĞƐƐŝŽŶŝŶŐƌŽǁƚŚŽĨƚŚĞĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐƉůĂƋƵĞǁŝůůĞǀĞŶƚƵĂůůLJůĞĂĚƚŽŶĂƌƌŽǁŝŶŐŽĨƚŚĞůƵŵĞŶ͕
ůŝŵŝƟŶŐďůŽŽĚŇŽǁĂŶĚŽdžLJŐĞŶƐƵƉƉůLJƚŽǁĂƌĚƐĚŝƐƚĂůƟƐƐƵĞƐ͘DŽƌĞŽǀĞƌ͕ƵŶƐƚĂďůĞůĞƐŝŽŶƐĐŽŶƚĂŝŶŝŶŐ
ĂůĂƌŐĞŶĞĐƌŽƟĐĐŽƌĞĂŶĚƚŚŝŶĮďƌŽƵƐĐĂƉĂƌĞƉƌŽŶĞƚŽƌƵƉƚƵƌĞ͘WůĂƋƵĞƌƵƉƚƵƌĞǁŝůůĞdžƉŽƐĞƚŚĞƉƌŽͲ ƚŚƌŽŵďŽƟĐŶĞĐƌŽƟĐĐŽƌĞƚŽƚŚĞďůŽŽĚ͕ĐĂƵƐŝŶŐƉůĂƚĞůĞƚĂŐŐƌĞŐĂƟŽŶ͕ƚŚĞĨŽƌŵĂƟŽŶŽĨďůŽŽĚĐůŽƚƐĂŶĚ
ƌĞƐƵůƚŝŶŽĐĐůƵƐŝǀĞƚŚƌŽŵďƵƐĨŽƌŵĂƟŽŶ17͘dŚĞƐĞƚŚƌŽŵďŝĐĂŶĐĂƵƐĞĂŶŝƐĐŚĞŵŝĐƐƚƌŽŬĞŽƌŵLJŽĐĂƌĚŝĂů
ŝŶĨĂƌĐƟŽŶ ĂŶĚ ƚŚƵƐ ƌĞƋƵŝƌĞ ƐƵƌŐŝĐĂů ŝŶƚĞƌǀĞŶƟŽŶ ƚŽ ƌĞͲŽƉĞŶ ƚŚĞ ǀĞƐƐĞů Žƌ ƚŚƌŽŵďŽůLJƟĐ ƚŚĞƌĂƉLJ ƚŽ
ĚŝƐƐŽůǀĞƚŚĞďůŽŽĚĐůŽƚĂŶĚƌĞƐƚŽƌĞďůŽŽĚŇŽǁ;&ŝŐƵƌĞϯͿ͘
Figure 3.&ŽƌŵĂƟŽŶŽĨĂŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐƉůĂƋƵĞĨƌŽŵůĞŌƚŽƌŝŐŚƚ͘/ŶŇƵdžŽĨ>>ĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůŝŶƚŽƚŚĞǀĞƐƐĞůǁĂůůůĞĂĚƐƚŽĂĐƟǀĂƟŽŶ
ŽĨƚŚĞĞŶĚŽƚŚĞůŝƵŵĂŶĚƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨĂĚŚĞƐŝŽŶŵŽůĞĐƵůĞƐ͘^ƵďƐĞƋƵĞŶƚůLJ͕ŵŽŶŽĐLJƚĞƐĂŶĚŽƚŚĞƌŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJĐĞůůƐĂƌĞƌĞĐƌƵŝƚĞĚ
ƚŽƚŚĞǀĞƐƐĞůǁĂůůĂŶĚŵŝŐƌĂƚĞŝŶƚŽƚŚĞŝŶƟŵĂ͘tŝƚŚŝŶƚŚĞŝŶƟŵĂ͕ŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐǁŝůůƚĂŬĞƵƉůŝƉŝĚƐǀŝĂƚŚĞŝƌƐĐĂǀĞŶŐĞƌƌĞĐĞƉƚŽƌƐĂŶĚ
ĐŽŶƚƌŝďƵƚĞƚŽƚŚĞĨŽƌŵĂƟŽŶŽĨĨĂƩLJƐƚƌĞĂŬƐ͘WůĂƋƵĞƉƌŽŐƌĞƐƐŝŽŶĐŽŶƟŶƵĞƐǁŝƚŚƚŚĞŵŝŐƌĂƟŽŶĂŶĚƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶŽĨƐŵŽŽƚŚŵƵƐĐůĞ
ĐĞůůƐǁŚŝĐŚƐƚĂƌƚƚŽƉƌŽĚƵĐĞĐŽůůĂŐĞŶĂŶĚĞdžƚƌĂĐĞůůƵůĂƌŵĂƚƌŝdž͘ƐƚĂďůĞƉůĂƋƵĞĐŽŶƚĂŝŶƐĂƚŚŝĐŬĮďƌŽƵƐĐĂƉĂŶĚŝƐƌŝĐŚŝŶƐŵŽŽƚŚ
ŵƵƐĐůĞĐĞůůƐ͕ǁŚĞƌĞĂƐƵŶƐƚĂďůĞƉůĂƋƵĞƐĂƌĞƌŝĐŚŝŶĨŽĂŵĐĞůůƐĂŶĚŚĂǀĞĂǁĞĂŬĮďƌŽƵƐĐĂƉ͕ŵĂŬŝŶŐŝƚƉƌŽŶĞƚŽƌƵƉƚƵƌĞ͘hƉŽŶ
ƌƵƉƚƵƌĞ͕ƚŚƌŽŵďƵƐĨŽƌŵĂƟŽŶŽĐĐƵƌƐ͕ǁŚŝĐŚĐĂŶůĞĂĚƚŽĐŽŵƉůŝĐĂƟŽŶƐ͘
ŶĚŽǀĂƐĐƵůĂƌŝŶƚĞƌǀĞŶƟŽŶƐ͕ƐƵĐŚĂƐďĂůůŽŽŶĂŶŐŝŽƉůĂƐƚLJǁŝƚŚŽƌǁŝƚŚŽƵƚƐƚĞŶƟŶŐ͕ĐĂŶďĞƉĞƌĨŽƌŵĞĚƚŽ
ƌĞƐƚŽƌĞďůŽŽĚŇŽǁĂƌƚĞƌŝĞƐŽĐĐůƵĚĞĚďLJĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐůĞƐŝŽŶƐ͘hŶĨŽƌƚƵŶĂƚĞůLJ͕ƐƵĐĐĞƐƐŽĨƚŚŝƐƐƚƌĂƚĞŐLJ
ŝƐůŝŵŝƚĞĚďLJƚŚĞĨĂĐƚƚŚĂƚĂƐŝŐŶŝĮĐĂŶƚŶƵŵďĞƌŽĨƉĂƟĞŶƚƐĞdžƉĞƌŝĞŶĐĞƐƌĞŶĞǁĞĚŽďƐƚƌƵĐƟŽŶŽĨƚŚĞ
ƌĞͲŽƉĞŶĞĚǀĞƐƐĞůƐ͘sĂƐĐƵůĂƌĚĂŵĂŐĞŝŶŇŝĐƚĞĚďLJďĂůůŽŽŶĂŶŐŝŽƉůĂƐƚLJŐĞŶĞƌĂƚĞƐĂůŽĐĂůŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJ
ƌĞĂĐƟŽŶ͕ ƌĞƐƵůƟŶŐ ŝŶ ƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐ ŽĨ ƚŚĞ ĂƌƚĞƌLJ͘ ZĞƐƚĞŶŽƐŝƐ ĐŽŶƐŝƐƚƐ ŽĨ ďŽƚŚ ŝŶƟŵĂů ŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂ
Extracellular Matrix Adhesion Molecules Endothelial cells
Smooth muscle cells Monocyte/
Macrophage Lymfocytes
Foam cells Cholesterol crystals
Cholesterol Thrombus
EĞĐƌŽƟĐĐŽƌĞ
1
ĂŶĚ ĂĐĐĞůĞƌĂƚĞĚ ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐϭϴ͘ /ŶƟŵĂů ŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂ ŝƐ ĐŚĂƌĂĐƚĞƌŝnjĞĚ ďLJ ƌĞĂƌƌĂŶŐĞŵĞŶƚƐ ŽĨ ƚŚĞ
ĞdžƚƌĂĐĞůůƵůĂƌŵĂƚƌŝdž͕ƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶĂŶĚŵŝŐƌĂƟŽŶŽĨƐŵŽŽƚŚŵƵƐĐůĞĐĞůůƐĂŶĚŝŶŇĂŵŵĂƟŽŶ͘KŶƚŽƉŽĨ
ƚŚĂƚ͕ĂĐĐĞůĞƌĂƚĞĚĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐŝƐŽďƐĞƌǀĞĚƵŶĚĞƌŚLJƉĞƌĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĞŵŝĐĐŽŶĚŝƟŽŶƐ͕ǁŚŝĐŚƌĞƐƵůƚƐŝŶ
ƚŚĞƵƉƚĂŬĞŽĨůŝƉŝĚƐďLJŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐŝŶƚŚĞǀĞƐƐĞůǁĂůůĂŶĚƚŚĞƐƵďƐĞƋƵĞŶƚĨŽƌŵĂƟŽŶŽĨĨŽĂŵĐĞůůƐ͘
In vivo mouse models for vascular remodelling
dŚĞĐŽŶƚƌŝďƵƟŽŶŽĨĚŝīĞƌĞŶƚŵŽůĞĐƵůĞƐ͕ŐƌŽǁƚŚĨĂĐƚŽƌƐŽƌĐĞůůƐƚŽǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐĐĂŶďĞƐƚƵĚŝĞĚ
ƵƐŝŶŐĞdžƉĞƌŝŵĞŶƚĂůŵŽƵƐĞŵŽĚĞůƐ͘,ĞƌĞ͕/ĚŝƐĐƵƐƐƚŚŽƐĞŵŽƵƐĞŵŽĚĞůƐƚŚĂƚǁĞƌĞƵƐĞĚŝŶƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐ͘
ŽƚŚ ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĂŶĚ ĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĐĂŶ ďĞ ƐƚƵĚŝĞĚ ƵƐŝŶŐ ŵŽĚĞůƐ ŝŶ ǁŚŝĐŚ ŚŝŶĚ ůŝŵď ŝƐĐŚĞŵŝĂ ŝƐ
ŝŶĚƵĐĞĚ͘^ŝŶŐůĞůŝŐĂƟŽŶŽĨƚŚĞůĞŌĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌLJŝŶϱϳ>ͬϲŵŝĐĞŝƐŽŌĞŶƵƐĞĚƚŽƐƚƵĚLJĨĂĐƚŽƌƐƚŚĂƚĂƌĞ
ƌĞŐƵůĂƚĞĚĚƵƌŝŶŐŶĞŽǀĂƐĐƵůĂƌŝnjĂƟŽŶ͘'ĞŶĞƌĂůůLJ͕ϱϳ>ͬϲŵŝĐĞŚĂǀĞĂŐŽŽĚĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐĂŶĚĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶŝĐ
ƌĞƐƉŽŶƐĞĂŶĚďůŽŽĚŇŽǁŝƐƌĞƐƚŽƌĞĚǁŝƚŚŝŶϳĚĂLJƐĂŌĞƌƐŝŶŐůĞůŝŐĂƟŽŶŽĨƚŚĞĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌLJ͘dŚĞƌĞĨŽƌĞ͕
ŝŶƚĞƌǀĞŶƟŽŶƐƚƵĚŝĞƐĂƌĞĚŽŶĞŝŶĂŵŽĚĞůĨŽƌŚŝŶĚ ůŝŵď ŝƐĐŚĞŵŝĂǁŚĞƌĞĚŽƵďůĞ ůŝŐĂƟŽŶŽĨƚŚĞůĞŌ
ĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌLJŝƐƉĞƌĨŽƌŵĞĚ͕ĂƐƚŚŝƐŵŽĚĞůƉƌŽǀŝĚĞƐĂƐƵďƐƚĂŶƟĂůƚŚĞƌĂƉĞƵƟĐǁŝŶĚŽǁǁŚŝĐŚŝƐŽƉƟŵĂů
ĨŽƌ ƚĞƐƟŶŐ ŶĞǁ ƚŚĞƌĂƉĞƵƟĐ ĂƉƉƌŽĂĐŚĞƐ͘ /Ŷ ƚŚĞ ĂĚĚƵĐƚŽƌ ŵƵƐĐůĞ͕ ŝŶĐƌĞĂƐĞĚ ƐŚĞĂƌ ƐƚƌĞƐƐ ŽǀĞƌ ƉƌĞͲ ĞdžŝƐƚĞŶƚĂƌƚĞƌŝŽůĞƐůĞĂĚƐƚŽĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ǁŚĞƌĞĂƐŝŶƚŚĞĚŝƐƚĂůŐĂƐƚƌŽĐŶĞŵŝƵƐĂŶĚƐŽůĞƵƐŵƵƐĐůĞƐ͕
ůŽĐĂůŝƐĐŚĞŵŝĂŝŶĚƵĐĞƐĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘
ŝīĞƌĞŶƚŵŽĚĞůƐĂƌĞƵƐĞĚƚŽƐƚƵĚLJĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĨŽƌŵĂƟŽŶŝŶŵŝĐĞ͘KŶĞƐƵĐŚŵŽĚĞůŝƐƚŚĞĐĂƌŽƟĚ
ĐŽůůĂƌ ŵŽĚĞů͘ /Ŷ ƚŚŝƐ ŵŽĚĞů͕ Ă ƐĞŵŝͲĐŽŶƐƚƌŝĐƟǀĞ ĐŽůůĂƌ ŝƐ ƉůĂĐĞĚ ĂƌŽƵŶĚ ƚŚĞ ĐĂƌŽƟĚ ĂƌƚĞƌŝĞƐ ŽĨ
ŚLJƉĞƌĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĞŵŝĐƉŽͲͬͲŵŝĐĞ͘>ŽǁƐŚĞĂƌƐƚƌĞƐƐĂŶĚĚŝƐƚƵƌďĞĚŇŽǁƉƌŽdžŝŵĂůƚŽƚŚĞƐŝƚĞŽĨĐŽůůĂƌ
ƉůĂĐĞŵĞŶƚƌĞƐƵůƚƐŝŶĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĂĐƟǀĂƟŽŶĂŶĚƚŽĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐůĞƐŝŽŶĨŽƌŵĂƟŽŶ͘ůƌĞĂĚLJĨŽƵƌǁĞĞŬƐ
ĂŌĞƌĐŽůůĂƌƉůĂĐĞŵĞŶƚ͕ƚŚĞƐĞůĞƐŝŽŶƐĐĂŶďĞĞǀĂůƵĂƚĞĚĨŽƌŶƵŵĞƌŽƵƐƉĂƌĂŵĞƚĞƌƐ͕ƐƵĐŚĂƐŶĞĐƌŽƟĐĐŽƌĞ͕
ĐŽůůĂŐĞŶĐŽŶƚĞŶƚ͕ƐŵŽŽƚŚŵƵƐĐůĞĐĞůůƐ͕ŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJĐĞůůƐ͕ĞƚĐ͘
dŚĞĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌLJĐƵīŵŽĚĞůŝƐĂƐƵŝƚĂďůĞŵŽĚĞůƚŽƐƚƵĚLJƉŽƐƚͲŝŶƚĞƌǀĞŶƟŽŶĂůŶĞŽŝŶƟŵĂůŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂ͘
/ŶƚŚŝƐŵŽĚĞůĂŶŽŶͲĐŽŶƐƚƌŝĐƟǀĞĐŽůůĂƌŝƐƉůĂĐĞĚĂƌŽƵŶĚƚŚĞĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌLJŽĨŵŝĐĞ͘dŚĞƵƐĞŽĨƚŚŝƐ
ŵŽĚĞůŝŶĞŝƚŚĞƌŶŽƌŵŽĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĞŵŝĐϱϳ>ͬϲŵŝĐĞŽƌŚLJƉĞƌĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĞŵŝĐŵŝĐĞĂůůŽǁƵƐƚŽƐƚƵĚLJ
ƚŚĞĐŽŶƚƌŝďƵƟŽŶŽĨƐŵŽŽƚŚŵƵƐĐůĞĐĞůůƐ͕ŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐĂŶĚŽƚŚĞƌŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJĐĞůůƐƚŽƚŚŝƐƉƌŽĐĞƐƐ͘
Non-coding RNAs
EŽŶĐŽĚŝŶŐZEƐŝŶĐůƵĚĞĂůůĨƵŶĐƟŽŶĂůZEŵŽůĞĐƵůĞƐƚŚĂƚĂƌĞŶŽƚƚƌĂŶƐĐƌŝďĞĚĂŶĚƚƌĂŶƐůĂƚĞĚŝŶƚŽ
ĨƵŶĐƟŽŶĂů ƉƌŽƚĞŝŶƐ͘ dŚŝƐ ĐůĂƐƐ ŽĨ ZE ŵŽůĞĐƵůĞƐ ŝŶĐůƵĚĞƐ͕ ĂŵŽŶŐƐƚ ŽƚŚĞƌƐ͕ ƚƌĂŶƐĨĞƌ ZEƐ ;ƚZEƐͿ͕
ƌŝďŽƐŽŵĂů ZEƐ ;ƌZEƐͿ͕ ƐŵĂůů ŶƵĐůĞĂƌ ZEƐ ;ƐŶZEƐͿ͕ ƐŵĂůů ŶƵĐůĞŽůĂƌ ZEƐ ;ƐŶŽZEƐͿ͕ ƐŵĂůů
ŝŶƚĞƌĨĞƌŝŶŐZEƐ;ƐŝZEƐͿ͕ŵŝĐƌŽZEƐ͕ĂŶĚůŽŶŐŶŽŶͲĐŽĚŝŶŐZEƐ;ůŶĐZEƐͿ͘DŽƐƚŽĨƚŚĞƐĞZEƐĂƌĞ
ŝŶǀŽůǀĞĚŝŶƚŚĞƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨŽƚŚĞƌZEƐ͕ƐƵĐŚĂƐƐŶZEƐ͕ǁŚŝĐŚƌĞŐƵůĂƚĞƐƉůŝĐŝŶŐĂŶĚƐŶŽZEƐ͕ǁŚŝĐŚ
ŵŽĚŝĨLJ ƌZEƐ͘ KƚŚĞƌ ZEƐ ĂƌĞ ŝŶǀŽůǀĞĚ ŝŶ ŐĞŶĞ ƌĞŐƵůĂƟŽŶ͕ ĐĂůůĞĚ ZE ŝŶƚĞƌĨĞƌĞŶĐĞ ;ZEŝͿ͘ dŚĞƐĞ
ZEƐŝŶĐůƵĚĞŵŝĐƌŽZEƐ͕ƐŝZEƐĂŶĚůŶĐZEƐϭϵ.
ϭϲ
Figure 4. ŝŽŐĞŶĞƐŝƐŽĨŵŝĐƌŽZEƐ͘WƌŝŵĂƌLJŵŝĐƌŽZEƐĂƌĞƚƌĂŶƐĐƌŝďĞĚĨƌŽŵŝŶĚŝǀŝĚƵĂůŵŝĐƌŽZEŐĞŶĞƐ͕ĨƌŽŵŝŶƚƌŽŶƐŽĨƉƌŽƚĞŝŶ
ĐŽĚŝŶŐŐĞŶĞƐŽƌĨƌŽŵƉŽůLJĐŝƐƚƌŽŶŝĐƚƌĂŶƐĐƌŝƉƚƐďLJZEƉŽůLJŵĞƌĂƐĞ//͘dŚĞƐĞƉƌŝͲŵŝĐƌŽZEƐĂƌĞƉƌŽĐĞƐƐĞĚďLJƌŽƐŚĂƚŽĨŽƌŵƉƌĞͲ ŵŝĐƌŽZEƐŽĨĂƉƉƌŽdžŝŵĂƚĞůLJϳϬͲϭϬϬŶƵĐůĞŽƟĚĞƐůŽŶŐ͘ŌĞƌƚƌĂŶƐƉŽƌƚĂƟŽŶďLJdžƉŽƌƟŶͲϱƚŽƚŚĞĐLJƚŽƉůĂƐŵ͕ƉƌĞͲŵŝĐƌŽZEƐĂƌĞ
ĐůĞĂǀĞĚďLJŝĐĞƌŝŶƚŽŵŝĐƌŽZEĚƵƉůĞdžĞƐ͘KŶĞŽĨƚŚĞŵĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEƐƚƌĂŶĚƐŝƐƚŚĞŶŝŶĐŽƌƉŽƌĂƚĞĚŝŶƚŽƚŚĞZ/^ĐŽŵƉůĞdž͕ǁŚĞƌĞĂƐ
ƚŚĞŽƚŚĞƌƐƚƌĂŶĚŝƐĚĞŐƌĂĚĞĚŽƌůŽĂĚĞĚŝŶƚŽŝƚƐŽǁŶZ/^ĐŽŵƉůĞdž͘DĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEƐƌĞŐƵůĂƚĞŐĞŶĞĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶǀŝĂƚƌĂŶƐůĂƟŽŶĂů
ƌĞƉƌĞƐƐŝŽŶŽƌŵZEĚĞŐƌĂĚĂƟŽŶŽĨƚŚĞŝƌƚĂƌŐĞƚŵZE͘
MicroRNAs and their role in vascular remodelling
DŝĐƌŽZEƐ ĂƌĞ ƐŚŽƌƚ ĞŶĚŽŐĞŶŽƵƐ ZE ŵŽůĞĐƵůĞƐ ŽĨ ΕϮϮ ŶƵĐůĞŽƟĚĞƐ ůŽŶŐ ƚŚĂƚ ƌĞŐƵůĂƚĞ ŐĞŶĞ
ĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶ͘DŝĐƌŽZEŐĞŶĞƐĂƌĞůŽĐĂƚĞĚĞŝƚŚĞƌŝŶƚĞƌŐĞŶŝĐŽƌŝŶƚƌĂŐĞŶŝĐ;ǁŝƚŚŝŶŝŶƚƌŽŶƐŽĨĐŽĚŝŶŐŽƌ
ŶŽŶĐŽĚŝŶŐ ŐĞŶĞƐͿ͘ ^ŽŵĞ ŵŝĐƌŽZEƐ ŚĂǀĞ ƚŚĞŝƌ ŽǁŶ ƉƌŽŵŽƚĞƌƐ ĂŶĚ ĂƌĞ ĞdžƉƌĞƐƐĞĚ ŝŶĚĞƉĞŶĚĞŶƚůLJ͕
ǁŚŝůĞ ŽƚŚĞƌ ŵŝĐƌŽZEƐ ĂƌĞ ŽƌŐĂŶŝnjĞĚ ŝŶ ĐůƵƐƚĞƌƐ ĂŶĚ ƐŚĂƌĞ ƚŚĞ ƐĂŵĞ ƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂů ƌĞŐƵůĂƟŽŶ20. DŝĐƌŽZEŐĞŶĞƐĂƌĞƚƌĂŶƐĐƌŝďĞĚĂƐƉƌŝŵĂƌLJŵŝĐƌŽZEƐ;ƉƌŝͲŵŝĐƌŽZEƐͿďLJZEƉŽůLJŵĞƌĂƐĞ//ĂŶĚ
ĨŽƌŵƐƚĞŵͲůŽŽƉƐƚƌƵĐƚƵƌĞƐ;&ŝŐƵƌĞϰͿ21͘dŚĞƐĞƉƌŝͲŵŝĐƌŽZEƐĞŶƚĞƌĂŶƵĐůĞĂƌĐŽŵƉůĞdžĐŽŶƐŝƐƟŶŐŽĨ
ƌŽƐŚĂ;ZEƐĞ///ĞŶnjLJŵĞͿĂŶĚĐŽĨĂĐƚŽƌ'Zϴ͕ǁŚĞƌĞƚŚĞLJĂƌĞĐůĞĂǀĞĚƚŽĨŽƌŵƉƌĞͲŵŝĐƌŽZEƐŽĨ
ĂďŽƵƚϳϬŶƵĐůĞŽƟĚĞƐůŽŶŐ22͘WƌĞͲŵŝĐƌŽZEƐĂƌĞƚƌĂŶƐƉŽƌƚĞĚƚŽƚŚĞĐLJƚŽƉůĂƐŵďLJdžƉŽƌƟŶͲϱ͕ǁŚĞƌĞ
5’
3’
ZEƉŽů//ƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶ
MicroRNA gene
Drosha
DGCR8
Pri-microRNA Polycistronic pri-microRNAs
Pre-microRNA
džƉŽƌƟŶͲϱ
Nucleus
Cytoplasm
Ran GTP
Dicer
TRBP
mature microRNA microRNA duplex
ŵZEƚĂƌŐĞƫŶŐ
ĞŐƌĂĚĂƟŽŶ RISC
ŵZEĚĞŐƌĂĚĂƟŽŶ dƌĂŶƐůĂƟŽŶĂůƌĞƉƌĞƐƐŝŽŶ AGO
1
ƚŚĞLJĂƌĞƉƌŽĐĞƐƐĞĚďLJƚŚĞĞŶnjLJŵĞŝĐĞƌŝŶƚŽŵĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEĚƵƉůĞdžĞƐ͘&ƌŽŵƚŚŝƐŵŝĐƌŽZEĚƵƉůĞdž͕
ŽŶĞƐƚƌĂŶĚ;ƚŚĞŐƵŝĚĞƐƚƌĂŶĚͿŝƐŐĞŶĞƌĂůůLJƉƌĞĨĞƌƌĞĚĨŽƌĂƐƐŽĐŝĂƟŽŶǁŝƚŚĂŶƌŐŽŶĂƵƚĞ;'KͿƉƌŽƚĞŝŶ
ĂŶĚ ŝŶĐŽƌƉŽƌĂƟŽŶ ŝŶƚŽ ƚŚĞ ZE ŝŶĚƵĐĞĚ ƐŝůĞŶĐŝŶŐ ĐŽŵƉůĞdž ;Z/^Ϳ͕ ǁŚĞƌĞĂƐ ƚŚĞ ŽƚŚĞƌ ƐƚƌĂŶĚ ;ƚŚĞ
ƉĂƐƐĞŶŐĞƌƐƚƌĂŶĚͿŝƐƌĂƉŝĚůLJƌĞŵŽǀĞĚĂŶĚĚĞŐƌĂĚĞĚϮϯ͘,ŽǁĞǀĞƌ͕ĂĐĐƵŵƵůĂƟŶŐĞǀŝĚĞŶĐĞƐƵŐŐĞƐƚƐƚŚĂƚ
ƚŚĞƉĂƐƐĞŶŐĞƌƐƚƌĂŶĚĐĂŶĂůƐŽďĞůŽĂĚĞĚŝŶƚŽƚŚĞZ/^Ϯϰ͕Ϯϱ͘DĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEƐŐƵŝĚĞƚŚĞZ/^ĐŽŵƉůĞdž
ƚŽƚĂƌŐĞƚƐŝƚĞƐŝŶƚŚĞϯ͛ƵŶƚƌĂŶƐůĂƚĞĚƌĞŐŝŽŶŽĨƚŚĞŝƌƚĂƌŐĞƚŵZEƐ͘ŝŶĚŝŶŐŽĨĂŵŝĐƌŽZEƚŽƚŚĞϯ͛
hdZŽĨĂƚĂƌŐĞƚŵZEĐĂŶĞŝƚŚĞƌůĞĂĚƚŽĚĞŐƌĂĚĂƟŽŶŽĨƚŚĞŵZEŽƌůĞĂĚƚŽƚƌĂŶƐůĂƟŽŶĂůƌĞƉƌĞƐƐŝŽŶ
ŽĨƚŚĞŵZEƚĂƌŐĞƚϮϲ͘DĞƐƐĞŶŐĞƌZEĚĞŐƌĂĚĂƟŽŶŝƐƵƐƵĂůůLJƐĞĞŶŝŶƉůĂŶƚĐĞůůƐĂŶĚƚĂŬĞƐƉůĂĐĞǁŚĞŶ
ŵŝĐƌŽZEďŝŶĚŝŶŐŽĐĐƵƌƐǁŝƚŚƉĞƌĨĞĐƚĐŽŵƉůĞŵĞŶƚĂƌŝƚLJƚŽƚŚĞŵZEƚĂƌŐĞƚ͘ŝƚŚĞƌǁĂLJ͕ďŝŶĚŝŶŐŽĨĂ
ŵŝĐƌŽZEƚŽƚŚĞϯ͛hdZŽĨĂƚĂƌŐĞƚŵZEůĞĂĚƐƚŽĚŽǁŶƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨƚŚĞĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨƚŚĂƚŐĞŶĞ͘dŚĞ
ĮƌƐƚϮƚŽϴŶƵĐůĞŽƟĚĞƐĨƌŽŵƚŚĞϱ͛ƉŽƌƟŽŶŽĨĂŵŝĐƌŽZE͕ŝƐŝŵƉŽƌƚĂŶƚĨŽƌƚĂƌŐĞƚƌĞĐŽŐŶŝƟŽŶĂŶĚŝƐ
ƌĞĨĞƌƌĞĚƚŽĂƐƚŚĞƐĞĞĚƐĞƋƵĞŶĐĞŽĨƚŚĞŵŝĐƌŽZEϮϲ.
ƵƌŝŶŐ ĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚ͕ ŵĂŶLJ ŵŝĐƌŽZEƐ ĂƌĞ ĞdžƉƌĞƐƐĞĚ ŝŶ Ă ƟƐƐƵĞ ƐƉĞĐŝĮĐ ŵĂŶŶĞƌ͕ ƐƵŐŐĞƐƟŶŐ ƚŚĞ
ŝŶǀŽůǀĞŵĞŶƚŽĨŵŝĐƌŽZEƐŝŶĚĞƚĞƌŵŝŶŝŶŐĂŶĚŵĂŝŶƚĂŝŶŝŶŐƟƐƐƵĞŝĚĞŶƟƚLJ27͘ĂĐŚŵŝĐƌŽZEŚĂƐƚŚĞ
ĂďŝůŝƚLJƚŽƌĞŐƵůĂƚĞŚƵŶĚƌĞĚƐŽĨƚĂƌŐĞƚƐĂŶĚďLJĚŽŝŶŐƐŽ͕ƐƉĞĐŝĮĐŵŝĐƌŽZEƐĐĂŶƌĞŐƵůĂƚĞĐŽŵƉůĞdž͕
ŵƵůƟĨĂĐƚŽƌŝĂůƉŚLJƐŝŽůŽŐŝĐĂůƉƌŽĐĞƐƐĞƐƐƵĐŚĂƐǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ͘dŚĞĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚĂŶĚƉƌŽŐƌĞƐƐŝŽŶ
ŽĨ ĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌ ĚŝƐĞĂƐĞ ŚĂƐ ďĞĞŶ ůŝŶŬĞĚ ƚŽ ƚŚĞ ĚLJƐƌĞŐƵůĂƟŽŶ ŽĨ ŵĂŶLJ ŝŶĚŝǀŝĚƵĂů ŵŝĐƌŽZEƐ ĂŶĚ
ŵƵůƟƉůĞŵŝĐƌŽZEƐŚĂǀĞďĞĞŶĨŽƵŶĚƚŽďĞŵŽĚƵůĂƚŽƌƐŽĨĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͕ůŝƉŽƉƌŽƚĞŝŶŵĞƚĂďŽůŝƐŵ͕
ŝŶŇĂŵŵĂƟŽŶĂŶĚǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐϮϴ͘&ŽƌĞdžĂŵƉůĞ͕ƚŚĞŵŝZͲϯϯĨĂŵŝůLJĐŽŶƐŝƐƟŶŐŽĨŵŝZͲϯϯĂͬď͕
ƚĂƌŐĞƚƐƚŚĞĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůƚƌĂŶƐƉŽƌƚĞƌϭĂŶĚŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϯϯĂͬďƌĞĚƵĐĞĚ in vivoƉƌŽŐƌĞƐƐŝŽŶ
ŽĨ ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐ ƉůĂƋƵĞ ĨŽƌŵĂƟŽŶϮϵ͘ dŚĞ ŵŝZͲϭϳͲϵϮ ŐĞŶĞ ĐůƵƐƚĞƌ ŚĂƐ Ă ǁĞůů ĚĞƐĐƌŝďĞĚ ƌŽůĞ ŝŶ
ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ ĂƐ ǁĞůů ĂƐ ĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐϯϬ͕ ϯϭ͘ /Ŷ ĂĚĚŝƟŽŶ͕ ŵŝĐƌŽZEƐ ĨƌŽŵ ƚŚŝƐ ĐůƵƐƚĞƌ ĐŽŶƚƌŝďƵƚĞ ƚŽ
ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĂŶĚŶĞŽŝŶƟŵĂĨŽƌŵĂƟŽŶϯϮ͕ϯϯ.
The 14q32 non-coding RNA cluster
dŚĞϭϰƋϯϮŐĞŶŽŵŝĐƌĞŐŝŽŶŝƐůŽĐĂƚĞĚŽŶŚƵŵĂŶĐŚƌŽŵŽƐŽŵĞϭϰ͕ĐŚƌŽŵŽƐŽŵĞϭϮ&ϭŝŶŵŝĐĞ͘dŚŝƐ
ƌĞŐŝŽŶŚŽƐƚƐŽŶĞŽĨƚŚĞůĂƌŐĞƐƚŵŝĐƌŽZEĐůƵƐƚĞƌƐŝŶƚŚĞŐĞŶŽŵĞ͕ĐŽŶƚĂŝŶŝŶŐϱϰŵŝĐƌŽZEƐĂŶĚŝƐ
ŚŝŐŚůLJ ĐŽŶƐĞƌǀĞĚ ŝŶ ŵĂŵŵĂůƐϰϯ͘ džƚĞŶƐŝǀĞ ŚLJƉŽŵĞƚŚLJůĂƟŽŶ ŽĨ ƚŚĞ ϭϰƋϯϮ ůŽĐƵƐ ǁĂƐ ŽďƐĞƌǀĞĚ ŝŶ
ŚƵŵĂŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐƉůĂƋƵĞƐ͕ǁŚŝĐŚƌĞƐƵůƚĞĚŝŶƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐĂŶĚƐƵŐŐĞƐƟŶŐĂ
ƌŽůĞĨŽƌĞƉŝŐĞŶĞƟĐŵŽĚƵůĂƟŽŶŽĨƚŚĞϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEĐůƵƐƚĞƌŝŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐϰϰ.
/ŶĂĚĚŝƟŽŶ͕ƚŚĞŚƵŵĂŶϭϰƋϯϮůŽĐƵƐĐŽŶƚĂŝŶƐƚŚƌĞĞůŶĐZEƐĂŶĚϰϭƐŶŽZEƐ;&ŝŐƵƌĞϱͿ͘D'ϯ͕ŽŶĞ
ŽĨƚŚĞϭϰƋϯϮůŶĐZEƐ͕ŝƐƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚŝŶĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĐĞůůƐƵŶĚĞƌŚLJƉŽdžŝĂϯϳ͘ĞůĞƟŽŶŽĨD'ϯŝŶŵŝĐĞ
;D'ϯͲͬͲŵŝĐĞͿůĞĂĚƐƚŽŝŶĐƌĞĂƐĞĚs'&ĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶĂŶĚĐŽƌƟĐĂůŵŝĐƌŽǀĞƐƐĞůĚĞŶƐŝƚLJŝŶƚŚĞƐĞĂŶŝŵĂůƐϰϱ. dŚĞϭϰƋϯϮƐŶŽZEƐĂƌĞŽƌƉŚĂŶƐŶŽZEƐŽĨƚŚĞͬďŽdžƐƵďƚLJƉĞĂŶĚĐĂŶďĞĚŝǀŝĚĞĚŝŶƚŽƚŚƌĞĞŚŝŐŚůLJ
ƌĞůĂƚĞĚĐŽƉLJͲƐĞƚƐ͕ŶĂŵĞůLJ^EKZϭϭϮ;ϭĐŽƉLJͿ͕^EKZϭϭϯ;ϵĐŽƉŝĞƐͿĂŶĚ^EKZϭϭϰ;ϯϭĐŽƉŝĞƐͿ͘
ϭϴ
Figure 5. ƐĐŚĞŵĂƟĐŽǀĞƌǀŝĞǁŽĨƚŚĞŚƵŵĂŶϭϰƋϯϮĂŶĚŵƵƌŝŶĞϭϮ&ϭůŽĐƵƐ͘/ŶŚƵŵĂŶƐ͕ƚŚĞϭϰƋϯϮůŽĐƵƐĐŽŶƚĂŝŶƐϱϰŵŝĐƌŽZEƐ͕
ϯůŶĐZEƐ;D'ϯ͕D'ϴĂŶĚ^E,'ϮϯͿĂŶĚϰϭƐŶŽZEƐƚŽĚĂƚĞ͘/ŶŵŝĐĞ͕ƚŚĞĐůƵƐƚĞƌĐŽŶƚĂŝŶƐϲϭŵŝĐƌŽZEƐ͕ϮůĐŶZEƐ;DĞŐϯĂŶĚ
ZŝĂŶͿĂŶĚϳƐŶŽZEƐ͘ŽůŽƌƐŝŶĚŝĐĂƚĞǁŚĞƚŚĞƌŵƵƌŝŶĞŵŝĐƌŽZEƐǁĞƌĞĞĂƌůLJ;ƌĞĚͿ͕ůĂƚĞ;ŐƌĞĞŶͿŽƌŶŽŶͲƌĞƐƉŽŶĚĞƌƐ;ďůƵĞͿĂŌĞƌŚŝŶĚ
ůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂŝŶŵŝĐĞ͘ŽĚŝŶŐ;ƚŚŝĐŬďĂƌƐͿĂŶĚŶŽŶĐŽĚŝŶŐ;ƚŚŝŶďĂƌƐͿŐĞŶĞƐĂƌĞŝŶĚŝĐĂƚĞĚŝŶďůĂĐŬ͘
MMU-12F1
10.945MB
10.951MB
10.974MB 10.971MB 10.948MB
10.954MB
10.957MB
10.969MB 10.966MB 10.963MB 10.96MB
11.028MB
+ -
miR-3071
miR-1247 Dio3
Rtl1 Dlk1
Meg3 miR-1906-1 miR-770 miR-673 miR-493 miR-337 miR-540 miR-665 miR-3070a miR-3070b miR-431 6430411K18Rik miR-433 miR-127 miR-434 miR-432 miR-136 Rian miR-341 miR-1188 miR-370 SNO Cluster miR-882 miR-379 miR-411 miR-299a miR-380 miR-1197 miR-323 miR-758 miR-329 miR-494 miR-679 miR-1193 miR-666 miR-543 miR-495 miR-667 miR-376c miR-654 miR-376b miR-376a miR-300 miR-381 miR-487b miR-539 miR-544 miR-382 miR-134 miR-668 miR-485 Mirg miR-453 miR-154 miR-496a miR-377 miR-541 miR-409 miR-412 miR-369 miR-410 miR-3072
HSA-14q32
101.20MB
101.24MB
101.48MB
101.56MB 101.44MB
101.52MB
102.03MB 101.28MB
101.32MB
101.36MB
101.4MB
- +
RTL1
miR-1247 DIO3
DLK1
miR-2392 MEG3 miR-770 miR-493
miR-337
miR-665
miR-431 miR-433 miR-127 miR-432 miR-136 LOC100288160 MEG8 SNORD112 miR-370
SNHG23
miR-379 miR-411 miR-299 miR-380 miR-1197 miR-323a miR-758 miR-329-1 miR-329-2 miR-494 miR-1193 miR-543 miR495 miR-376c miR-376a-2 miR-654 miR-376b miR-376a-1 miR-300 miR-1185-1 miR-1185-2 miR-381 miR-487b miR-539 miR-889 miR-544a miR-655 miR-487a miR-382 miR-134 miR-668 miR-485 miR-323b miR-154 miR-496 miR-377 miR-541 miR-409 mir-412 miR-369 miR-410 miR-656
Protein Coding gene Early responding miR/snoR Late responding miR/snoR Non-responding miR/snoR miR/snoR regulation unknown lincRNAs
miR-3544
miR-299b SNORD113.1
SNORD113.2 SNORD113.3 SNORD113.4 SNORD113.5 SNORD113.6 SNORD113.7 SNORD113.8 SNORD113.9 SNORD114.1 SNORD114.2 SNORD114.3 SNORD114.4 SNORD114.5 SNORD114.6 SNORD114.7 SNORD114.8 SNORD114.9 SNORD114.10 SNORD114.11 SNORD114.12 SNORD114.13 SNORD114.14 SNORD114.15 SNORD114.16 SNORD114.17 SNORD114.18 SNORD114.19 SNORD114.20 SNORD114.21 SNORD114.22 SNORD114.23 SNORD114.24 SNORD114.25 SNORD114.26 SNORD114.27 SNORD114.28 SNORD114.29 SNORD114.30 SNORD114.31
AF357425 AF357426 DQ267100 AF357359 DQ267101 AF357355 DQ267102
1
Outline of this thesis
dŚĞĂŝŵŽĨƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐŝƐƚŽŝŶǀĞƐƟŐĂƚĞƚŚĞƌŽůĞŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐŝŶǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ͕ĂƐǁĞůůĂƐ
ƚŽŝĚĞŶƟĨLJŵŝĐƌŽZEƐĂƐŶĞǁƚŚĞƌĂƉĞƵƟĐƚĂƌŐĞƚƐĨŽƌƚŚĞƚƌĞĂƚŵĞŶƚŽĨĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌĚŝƐĞĂƐĞƐ͘
dŚĞĮƌƐƚƉĂƌƚŽĨƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐĨŽĐƵƐĞƐŽŶƚŚĞƌŽůĞŽĨŵŝĐƌŽZEƐŝŶǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐĂŶĚŝŶƉĂƌƟĐƵůĂƌ
ƚŚĂƚ ŽĨ ŵŝĐƌŽZEƐ ĨƌŽŵ ƚŚĞ ϭϰƋϯϮ ĐůƵƐƚĞƌ͕ ďLJ ƐƚƵĚLJŝŶŐ ƚŚĞŝƌ ŝŶǀŽůǀĞŵĞŶƚ ŝŶ ĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĂŶĚ
ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĂŶĚƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐ͘
Chapter 2 ƌĞǀŝĞǁƐƚŚĞŵƵůƟĨĂĐƚŽƌŝĂůŶĂƚƵƌĞŽĨŵŝĐƌŽZEƐŝŶƚŚĞǀĂƐĐƵůĂƚƵƌĞ͕ĞŵƉŚĂƐŝnjŝŶŐƚŚĞŵƵůƟƉůĞ
ƌŽůĞƐŵŝĐƌŽZEƐĐĂŶŚĂǀĞŝŶĚŝīĞƌĞŶƚĨŽƌŵƐŽĨǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ͘KŌĞŶ͕ƚŚĞĞīĞĐƚŽĨŵŝĐƌŽZE
ŵĂŶŝƉƵůĂƟŽŶŝƐĂƐĐƌŝďĞĚƚŽƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨĂƐŝŶŐůĞƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞ͘,ŽǁĞǀĞƌ͕ŝƚƐŚŽƵůĚďĞƚĂŬĞŶŝŶƚŽĂĐĐŽƵŶƚ
ƚŚĂƚŵŝĐƌŽZEƐĂƌĞĂďůĞƚŽƚĂƌŐĞƚŶƵŵĞƌŽƵƐŐĞŶĞƐĂŶĚŵŽĚƵůĂƟŽŶŽĨĂƐŝŶŐůĞŵŝĐƌŽZEĐĂŶŚĂǀĞ
ĚŝǀĞƌƐĞĞīĞĐƚƐŝŶĚŝīĞƌĞŶƚĚŝƐĞĂƐĞŵŽĚĞůƐ͘
Chapter 3 ĚĞƐĐƌŝďĞƐ ƚŚĞ ƵƐĞ ŽĨ Ă ZĞǀĞƌƐĞĚ dĂƌŐĞƚ WƌĞĚŝĐƟŽŶ ;ZdWͿ ƐƚƌĂƚĞŐLJ ƚŽ ŝĚĞŶƟĨLJ ŵŝĐƌŽZEƐ
ƚŚĂƚĂīĞĐƚĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐĂŶĚĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘/ŶƚŚŝƐĐŚĂƉƚĞƌ͕ǁĞƌĞƉŽƌƚƚŚĞƌŽůĞŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐ
ŵŝZͲϯϮϵ͕ ŵŝZͲϰϴϳď͕ ŵŝZͲϰϵϰ ĂŶĚ ŵŝZͲϰϵϱ ŝŶ ƉŽƐƚͲŝƐĐŚĞŵŝĐ ďůŽŽĚ ŇŽǁ ƌĞĐŽǀĞƌLJ͘ hƉƌĞŐƵůĂƟŽŶ ŽĨ
ŵŝĐƌŽZEƐĨƌŽŵƚŚĞϭϰƋϯϮĐůƵƐƚĞƌǁĂƐŽďƐĞƌǀĞĚĂŌĞƌƐŝŶŐůĞůŝŐĂƟŽŶŽĨƚŚĞĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌLJ͕ĨŽůůŽǁŝŶŐ
ƚŚƌĞĞĚŝīĞƌĞŶƚĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶƉĂƩĞƌŶƐ;&ŝŐƵƌĞϱͿ͘^ĞůĞĐƟŶŐŵŝĐƌŽZEƐĨƌŽŵĞĂĐŚĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶƉĂƩĞƌŶ;ŵŝZͲ ϯϮϵĂƐĂůĂƚĞƌĞƐƉŽŶĚĞƌ͕ŵŝZͲϰϴϳďĂŶĚŵŝZͲϰϵϰĂƐĞĂƌůLJƌĞƐƉŽŶĚĞƌƐĂŶĚŵŝZͲϰϵϱĂƐŶŽŶͲƌĞƐƉŽŶĚĞƌͿ͕
ǁĞ ĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚ ŝŶĐƌĞĂƐĞĚ ďůŽŽĚ ŇŽǁ ƌĞĐŽǀĞƌLJ ĂŶĚ ŶĞŽǀĂƐĐƵůĂƌŝnjĂƟŽŶ ĂŌĞƌ ŝŶŚŝďŝƟŽŶ ŽĨ ƚŚĞƐĞ
ŵŝĐƌŽZEƐƵƐŝŶŐ'ĞŶĞ^ŝůĞŶĐŝŶŐKůŝŐŽŶƵĐůĞŽƟĚĞƐ;'^KƐͿŝŶĂŶŚŝŶĚůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂŵŽĚĞů͘
In Chapter 4͕ ǁĞ ŵĂĚĞ ƵƐĞ ŽĨ ƚŚĞ ƐĂŵĞ ZdW ƐƚƌĂƚĞŐLJ ƚŽ ŝĚĞŶƟĨLJ ŵŝĐƌŽZEƐ ƚŚĂƚ ĐŽƵůĚ ĂīĞĐƚ
ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͘ŐĂŝŶ͕ƚŚĞϭϰƋϯϮĐůƵƐƚĞƌǁĂƐƉƌĞĚŝĐƚĞĚƚŽƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞƐƚŚĂƚŝŶŇƵĞŶĐĞĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͘
tĞŽďƐĞƌǀĞĚŝŶĐƌĞĂƐĞĚĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEŵŝZͲϰϵϰŝŶƵŶƐƚĂďůĞŚƵŵĂŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐ
ƉůĂƋƵĞƐĐŽŵƉĂƌĞĚƚŽƐƚĂďůĞůĞƐŝŽŶƐ͘/ŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϰϵϰŝŶƚŚĞĐĂƌŽƟĚĐŽůůĂƌŵŽĚĞůĨŽƌĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ
ƌĞƐƵůƚĞĚŝŶƌĞĚƵĐĞĚůĞƐŝŽŶĨŽƌŵĂƟŽŶ͕ǁŚŝůĞƉůĂƋƵĞƐƚĂďŝůŝƚLJǁĂƐŝŶĐƌĞĂƐĞĚ͘DƵůƟƉůĞƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞƐŽĨ
ŵŝZͲϰϵϰǁĞƌĞƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚďŽƚŚin vitroĂŶĚin vivo.
In Chapter 5 ƚŚĞƌŽůĞŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐŝŶƉŽƐƚͲŝŶƚĞƌǀĞŶƟŽŶĂůǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐŽƌƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐŝƐ
ŝŶǀĞƐƟŐĂƚĞĚ͘ZĞƐƚĞŶŽƐŝƐĐŽŶƐŝƐƚŽĨŝŶƟŵĂůŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂĂŶĚĂĐĐĞůĞƌĂƚĞĚĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͘EŽŶͲĐŽŶƐƚƌŝĐƟǀĞ
ĐƵīƐ ǁĞƌĞ ƉůĂĐĞĚ ĂƌŽƵŶĚ ƚŚĞ ĨĞŵŽƌĂů ĂƌƚĞƌLJ ŽĨ ŵŝĐĞ ƚŽ ŝŶĚƵĐĞ ŝŶƟŵĂů ŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂ͘ ĐĐĞůĞƌĂƚĞĚ
ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐǁĂƐŝŶĚƵĐĞĚŝŶŚLJƉĞƌĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĞŵŝĐƉŽŵŝĐĞďLJƉůĂĐŝŶŐƐĞŵŝͲĐŽŶƐƚƌŝĐƟǀĞĐŽůůĂƌƐ
ĂƌŽƵŶĚďŽƚŚĐĂƌŽƟĚĂƌƚĞƌŝĞƐ͘'^KƐĂŐĂŝŶƐƚŵŝZͲϯϮϵ͕ŵŝZͲϰϵϰĂŶĚŵŝZͲϰϵϱǁĞƌĞƵƐĞĚƚŽŝŶŚŝďŝƚƚŚĞƐĞ
ŵŝĐƌŽZEƐŝŶďŽƚŚĞdžƉĞƌŝŵĞŶƚĂůŵŽĚĞůƐĨŽƌƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐ͘'^KͲϰϵϱƚƌĞĂƚĞĚĂŶŝŵĂůƐƐŚŽǁĞĚĚĞĐƌĞĂƐĞĚ
ŝŶƟŵĂůŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂĐŽŵƉĂƌĞĚƚŽĐŽŶƚƌŽůĂŶŝŵĂůƐĂŌĞƌĐƵīƉůĂĐĞŵĞŶƚ͕ǁŚĞƌĞĂƐ'^KͲϯϮϵĂŶĚ'^KͲϰϵϰ
ƚƌĞĂƚŵĞŶƚŚĂĚůĞƐƐƉƌŽĨŽƵŶĚĞīĞĐƚƐŽŶŝŶƟŵĂůŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂ͘/ŶƚŚĞĂĐĐĞůĞƌĂƚĞĚĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐŵŽĚĞů͕
'^KͲϰϵϱƚƌĞĂƚŵĞŶƚƌĞƐƵůƚĞĚŝŶƐŵĂůůĞƌĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐůĞƐŝŽŶƐǁŚŝĐŚŚĂĚƐŵĂůůĞƌŶĞĐƌŽƟĐĐŽƌĞƐĂŶĚ
ŝŶĐƌĞĂƐĞĚĐŽůůĂŐĞŶĐŽŶƚĞŶƚ͘
dŚĞƐĞĐŽŶĚƉĂƌƚŽĨƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐŝŶǀĞƐƟŐĂƚĞƐƚŚĞ;ƉŽƐƚͿƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂůƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZE
ĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶ͘
20
Chapter 6 ĨŽĐƵƐĞƐ ŽŶ DLJŽĐLJƚĞ ŶŚĂŶĐĞƌ &ĂĐƚŽƌ ϮĂ ;D&ϮĂͿ ŝŶ ƉŽƐƚͲŝƐĐŚĞŵŝĐ ŶĞŽǀĂƐĐƵůĂƌŝnjĂƟŽŶ͘
ƌĞĐĞŶƚ ƐƚƵĚLJ ƐŚŽǁĞĚ ƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂů ƌĞŐƵůĂƟŽŶ ŽĨ ƚŚĞ ϭϰƋϯϮ ƌĞŐŝŽŶ ďLJ D&ϮĂϰϲ͘ dŚĞƌĞĨŽƌĞ͕ ǁĞ
ŚLJƉŽƚŚĞƐŝnjĞĚƚŚĂƚŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨD&ϮĂĐŽƵůĚŝŵƉƌŽǀĞƉŽƐƚͲŝƐĐŚĞŵŝĐŶĞŽǀĂƐĐƵůĂƌŝnjĂƟŽŶǀŝĂŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨ
ϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐ͘/ŶĚĞĞĚ͕'^KͲDĞĨϮĂƚƌĞĂƚŵĞŶƚůĞĚƚŽŝŵƉƌŽǀĞĚďůŽŽĚŇŽǁƌĞĐŽǀĞƌLJĂŶĚŝŶĐƌĞĂƐĞĚ
ĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐĂŶĚĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐĂŌĞƌŚŝŶĚůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂŝŶŵŝĐĞ͘DŽƌĞŽǀĞƌ͕ƌĞĚƵĐĞĚĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨ
ϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐŵŝZͲϯϮϵĂŶĚŵŝZͲϰϵϰǁĂƐŽďƐĞƌǀĞĚŝŶƚŚĞƐĞĂŶŝŵĂůƐ͕ǁŚŝĐŚĐŽƵůĚƉĂƌƟĂůůLJĞdžƉůĂŝŶ
ƚŚĞŽďƐĞƌǀĞĚĞīĞĐƚƐ͘,ŽǁĞǀĞƌ͕ǁĞĐŽƵůĚŶŽƚĐŽŶĮƌŵƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂůƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐ
ďLJDĞĨϮĂ͕ďƵƚǁĞĚŝĚƐŚŽǁƚŚĂƚDĞĨϮĂĐŽƵůĚĂĐƚĂƐZEďŝŶĚŝŶŐƉƌŽƚĞŝŶ͕ƌĞŐƵůĂƟŶŐƚŚĞĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨ
ϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐĂƚƚŚĞƉŽƐƚͲƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂůůĞǀĞů͘
In Chapter 7͕ǁĞnjŽŽŵŝŶŽŶƚŚĞĚŝīĞƌĞŶƟĂůĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐŽďƐĞƌǀĞĚĂŌĞƌŝƐĐŚĞŵŝĂ͘
LJĞǀĂůƵĂƟŶŐƚŚĞĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶůĞǀĞůƐŽĨƉƌŝͲŵŝĐƌŽZEƐ͕ƉƌĞͲŵŝĐƌŽZEƐĂŶĚŵĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEƐĂŌĞƌ
ŝŶĚƵĐƟŽŶ ŽĨ ŝƐĐŚĞŵŝĂ͕ ǁĞ ĨŽƵŶĚ ĐůƵĞƐ ƚŚĂƚ ƚŚĞ ĚŝīĞƌĞŶƟĂů ƌĞŐƵůĂƟŽŶ ŽĨ ƚŚĞƐĞ ŵŝĐƌŽZEƐ ŽĐĐƵƌƐ
ĨƌŽŵƉƌĞͲŵŝĐƌŽZEƚŽŵĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEƉƌŽĐĞƐƐŝŶŐ͘hƐŝŶŐ^ƚĂďůĞ/ƐŽƚŽƉĞ>ĂďĞůůŝŶŐŽĨŵŝŶŽĐŝĚƐ
;^/>Ϳ͕ĨŽůůŽǁĞĚďLJZEƉƵůůĚŽǁŶĂŶĚDĂƐƐ^ƉĞĐƚƌŽŵĞƚƌLJŽŶϯdϯĐĞůůƐƵŶĚĞƌƐĞƌƵŵƐƚĂƌǀĂƟŽŶ͕ǁĞ
ĚĞƚĞƌŵŝŶĞĚǁŚŝĐŚZEͲŝŶĚŝŶŐWƌŽƚĞŝŶƐ;ZWƐͿĂƌĞƌĞƐƉŽŶƐŝďůĞĨŽƌƚŚĞĚŝīĞƌĞŶƟĂůƉŽƐƚͲƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂů
ƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐ͘tĞŝĚĞŶƟĮĞĚ/ZWĂŶĚ,,ĂƐƉŽƐƚͲƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂůƌĞŐƵůĂƚŽƌƐŽĨ
ϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEŵŝ/ZͲϯϮϵĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶƵŶĚĞƌŝƐĐŚĞŵŝĂ͘
/ŶƚŚĞƚŚŝƌĚĂŶĚůĂƐƚƉĂƌƚŽĨƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐ͕ƚŚĞĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝĐƌŽZEƐŝŶƐƵďĐƵƚĂŶĞŽƵƐĂĚŝƉŽƐĞƟƐƐƵĞ
ŽĨĐƌŝƟĐĂůůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂƉĂƟĞŶƚƐŝƐĚŝƐĐƵƐƐĞĚĂŶĚƚŚĞƉŽƚĞŶƟĂůƵƐĞŽĨŵŝĐƌŽZEƐĂƐďŝŽŵĂƌŬĞƌƚŽ
ƉƌĞĚŝĐƚ ƚŚĞ ƌŝƐŬ ŽĨ ĂŵƉƵƚĂƟŽŶ ŝŶ ƚŚĞƐĞ ƉĂƟĞŶƚƐ ŝƐ ĞǀĂůƵĂƚĞĚ͘ /Ŷ ƚŚĞ ƉĂƐƚ͕ ŵŝĐƌŽZEƐ ŚĂǀĞ ďĞĞŶ
ƌĞƉŽƌƚĞĚĂƐƐƵŝƚĂďůĞďŝŽŵĂƌŬĞƌƐĨŽƌƚŚĞĚŝĂŐŶŽƐŝƐĂŶĚƉƌŽŐŶŽƐŝƐŽĨĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌĚŝƐĞĂƐĞŝŶĐůƵĚŝŶŐ
ĂĐƵƚĞŵLJŽĐĂƌĚŝĂůŝŶĨĂƌĐƟŽŶ͕ŚĞĂƌƚĨĂŝůƵƌĞĂŶĚƉĞƌŝƉŚĞƌĂůĂƌƚĞƌŝĂůĚŝƐĞĂƐĞ͘DŽƌĞŽǀĞƌ͕ƚŚĞŝƌƐŵĂůůƐŝnjĞ
ƉƌŽƚĞĐƚƐƚŚĞŵĨƌŽŵĞŶĚŽŐĞŶŽƵƐZEĂƐĞĂĐƟǀŝƚLJ͕ǁŚŝĐŚĐŽŶƚƌŝďƵƚĞƐƚŽƚŚĞŚŝŐŚƐƚĂďŝůŝƚLJŽĨŵŝĐƌŽZEƐ͘
In Chapter 8 ǁĞĚĞƚĞƌŵŝŶĞĚůŽĐĂůŵŝĐƌŽZEĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŝŶƐƵďĐƵƚĂŶĞŽƵƐĂŶĚƉĞƌŝǀĂƐĐƵůĂƌĂĚŝƉŽƐĞ
ƟƐƐƵĞƐ ŽĨ ĐƌŝƟĐĂů ůŝŵď ŝƐĐŚĞŵŝĂ ƉĂƟĞŶƚƐ ƚŚĂƚ ƵŶĚĞƌǁĞŶƚ ŵĂũŽƌ ĂŵƉƵƚĂƟŽŶ ĐŽŵƉĂƌĞĚ ƚŽ ŚĞĂůƚŚLJ
ĐŽŶƚƌŽůƐ͘ tŚĞƌĞĂƐŵŽƐƚŵŝĐƌŽZEƐǁĞƌĞĚŽǁŶƌĞŐƵůĂƚĞĚŝŶ ĂŵƉƵƚĂƟŽŶ ƐĂŵƉůĞƐ͕ĞŝŐŚƚŵŝĐƌŽZEƐ
ǁĞƌĞ ƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚ ŝŶ ƚŚĞƐĞ ƉĂƟĞŶƚƐ͘ ^ŝdž ŽƵƚ ŽĨ ĞŝŐŚƚ ƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚ ŵŝĐƌŽZEƐ ďĞůŽŶŐ ƚŽ ƚŚĞ ϭϰƋϯϮ
ŵŝĐƌŽZEĐůƵƐƚĞƌ͘tĞƐŚŽǁƚŚĂƚŝŶĐƌĞĂƐĞĚĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨƚŚĞƐĞƐŝdžϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐĐĂŶďĞƵƐĞĚĂƐ
ďŝŽŵĂƌŬĞƌƐƚŽŝĚĞŶƟĨLJ>/ƉĂƟĞŶƚƐĂƚƌŝƐŬŽĨŵĂũŽƌĂŵƉƵƚĂƟŽŶ͘
dŚĞ ƌĞƐƵůƚƐ ŽĨ Ăůů ƐƚƵĚŝĞƐ ĚĞƐĐƌŝďĞĚ ŝŶ ƚŚŝƐ ƚŚĞƐŝƐ͕ ĂƐ ǁĞůů ĂƐ ĨƵƚƵƌĞ ƉĞƌƐƉĞĐƟǀĞƐ͕ ĂƌĞ ĚŝƐĐƵƐƐĞĚ ŝŶ
Chapter 9͘&ŝŐƵƌĞϲƐƵŵŵĂƌŝnjĞƐƚŚĞŽƵƚůŝŶĞŽĨƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐ͘
1
Figure 6.'ƌĂƉŚŝĐĂůƐƵŵŵĂƌLJŽĨƚŚĞƚŚĞƐŝƐŽƵƚůŝŶĞ͘WĂƌƚ/ŽĨƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐŝŶǀĞƐƟŐĂƚĞƐƚŚĞƌŽůĞŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐŝŶĚŝīĞƌĞŶƚƉƌŽĐĞƐƐĞƐ
ŽĨǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ͕ŶĂŵĞůLJĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐĂŶĚĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕;ĂĐĐĞůĞƌĂƚĞĚͿĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĂŶĚŝŶƟŵĂůŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂ;ƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐͿ͘
WĂƌƚ//ĚŝƐĐƵƐƐĞƐƐĞǀĞƌĂů;ƉŽƐƚͿƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂůŵĞĐŚĂŶŝƐŵƐƚŚĂƚĐŽƵůĚƌĞŐƵůĂƚĞϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶ͘/ŶWĂƌƚ///͕ŵŝĐƌŽZE
ĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŝŶĂĚŝƉŽƐĞƟƐƐƵĞŽĨĐƌŝƟĐĂůůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂƉĂƟĞŶƚƐŝƐƐƚƵĚŝĞĚĂŶĚƚŚĞƉŽƐƐŝďůĞƵƐĞŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐĂƐďŝŽŵĂƌŬĞƌĨŽƌ
ŝĚĞŶƟĮĐĂƟŽŶŽĨĐƌŝƟĐĂůůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂƉĂƟĞŶƚƐĂƚƌŝƐŬŽĨĂŵƉƵƚĂƟŽŶŝƐĞǀĂůƵĂƚĞĚ͘
14q32 microRNAs in vascular remodelling
arteriogenesis
angiogenesis (accelerated) atherosclerosis
intimal hyperplasia
PART I
PART II
PART III
14q32 microRNAs in adipose tissue
as biomarker
Pri-microRNA
Pre-microRNA
5’
3’
MicroRNA duplex
Mature microRNA
RNA Binding Proteins +/-
+/-
(Post)transcriptional Regulation of 14q32 microRNAs
MicroRNA gene
MEF2A
?
RBPs
22
Reference List
1. 'ŝďďŽŶƐ',͕njĂƵs:͘dŚĞĞŵĞƌŐŝŶŐĐŽŶĐĞƉƚŽĨǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůŝŶŐ͘N Engl J MedϭϵϵϰDĂLJϭϵ͖ϯϯϬ;ϮϬͿ͗ϭϰϯϭͲϴ͘
2. ZŝƐĂƵt͘DĞĐŚĂŶŝƐŵƐŽĨĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘NatureϭϵϵϳƉƌϭϳ͖ϯϴϲ;ϲϲϮϲͿ͗ϲϳϭͲϰ͘
ϯ͘ ĂƌŵĞůŝĞƚW͘DĞĐŚĂŶŝƐŵƐŽĨĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐĂŶĚĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘Nat MedϮϬϬϬƉƌ͖ϲ;ϰͿ͗ϯϴϵͲϵϱ͘
ϰ͘ ĚĂŵƐZ,͕ůŝƚĂůŽ<͘DŽůĞĐƵůĂƌƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐĂŶĚůLJŵƉŚĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘Nat Rev Mol Cell BiolϮϬϬϳ:ƵŶ͖ϴ;ϲͿ͗ϰϲϰͲ ϳϴ͘
ϱ͘ &ŽůŬŵĂŶ:͘ŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐŝŶĐĂŶĐĞƌ͕ǀĂƐĐƵůĂƌ͕ƌŚĞƵŵĂƚŽŝĚĂŶĚŽƚŚĞƌĚŝƐĞĂƐĞ͘Nat Medϭϵϵϱ:ĂŶ͖ϭ;ϭͿ͗ϮϳͲϯϭ͘
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7. /ƚŽt͕ƌƌĂƐD͕^ĐŚŽůnj͕tŝŶŬůĞƌ͕,ƚƵŶW͕^ĐŚĂƉĞƌt͘ŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐďƵƚŶŽƚĐŽůůĂƚĞƌĂůŐƌŽǁƚŚŝƐĂƐƐŽĐŝĂƚĞĚǁŝƚŚŝƐĐŚĞŵŝĂ
ĂŌĞƌĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌLJŽĐĐůƵƐŝŽŶ͘Am J Physiolϭϵϵϳ^ĞƉ͖Ϯϳϯ;ϯWƚϮͿ͗,ϭϮϱϱͲ,ϭϮϲϱ͘
ϴ͘ ǀĂŶKŽƐƚƌŽŵD͕ǀĂŶKŽƐƚƌŽŵK͕͘YƵĂdžW,͕sĞƌŚĂĂƌD͕,ŽĞĨĞƌ/͘/ŶƐŝŐŚƚƐŝŶƚŽŵĞĐŚĂŶŝƐŵƐďĞŚŝŶĚĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͗ǁŚĂƚ
ĚŽĞƐƚŚĞĨƵƚƵƌĞŚŽůĚ͍J Leukoc BiolϮϬϬϴĞĐ͖ϴϰ;ϲͿ͗ϭϯϳϵͲϵϭ͘
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10. ǀĂŶtĞĞů͕s͕dŽĞƐZ͕^ĞŐŚĞƌƐ>͕ĞĐŬĞƌƐDD͕ĚĞsƌŝĞƐDZ͕ŝůĞƌƐW,͕ĞƚĂů͘EĂƚƵƌĂůŬŝůůĞƌĐĞůůƐĂŶĚϰнdͲĐĞůůƐŵŽĚƵůĂƚĞ
ĐŽůůĂƚĞƌĂůĂƌƚĞƌLJĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚ͘Arterioscler Thromb Vasc BiolϮϬϬϳEŽǀ͖Ϯϳ;ϭϭͿ͗ϮϯϭϬͲϴ͘
11. ,ĂŶƐƐŽŶ'<͘/ŶŇĂŵŵĂƟŽŶ͕ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͕ĂŶĚĐŽƌŽŶĂƌLJĂƌƚĞƌLJĚŝƐĞĂƐĞ͘N Engl J MedϮϬϬϱƉƌϮϭ͖ϯϱϮ;ϭϲͿ͗ϭϲϴϱͲϵϱ͘
12. 'ĂůŬŝŶĂ͕>ĞLJ<͘/ŵŵƵŶĞĂŶĚŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJŵĞĐŚĂŶŝƐŵƐŽĨĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ;ΎͿ͘Annu Rev ImmunolϮϬϬϵ͖Ϯϳ͗ϭϲϱͲϵϳ͘
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17. ĞŶƚnjŽŶ:&͕KƚƐƵŬĂ&͕sŝƌŵĂŶŝZ͕&ĂůŬ͘DĞĐŚĂŶŝƐŵƐŽĨƉůĂƋƵĞĨŽƌŵĂƟŽŶĂŶĚƌƵƉƚƵƌĞ͘Circ ResϮϬϭϰ:ƵŶϲ͖ϭϭϰ;ϭϮͿ͗ϭϴϱϮͲϲϲ͘
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20. ĂƌƚĞůW͘DŝĐƌŽZEƐ͗ŐĞŶŽŵŝĐƐ͕ďŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ŵĞĐŚĂŶŝƐŵ͕ĂŶĚĨƵŶĐƟŽŶ͘CellϮϬϬϰ:ĂŶϮϯ͖ϭϭϲ;ϮͿ͗ϮϴϭͲϵϳ͘
21. >ĞĞz͕<ŝŵD͕,ĂŶ:͕zĞŽŵ<,͕>ĞĞ^͕ĂĞŬ^,͕ĞƚĂů͘DŝĐƌŽZEŐĞŶĞƐĂƌĞƚƌĂŶƐĐƌŝďĞĚďLJZEƉŽůLJŵĞƌĂƐĞ//͘EMBO JϮϬϬϰ
KĐƚϭϯ͖Ϯϯ;ϮϬͿ͗ϰϬϱϭͲϲϬ͘
22. >ĞĞz͕ŚŶ͕,ĂŶ:͕ŚŽŝ,͕<ŝŵ:͕zŝŵ:͕ĞƚĂů͘dŚĞŶƵĐůĞĂƌZEĂƐĞ///ƌŽƐŚĂŝŶŝƟĂƚĞƐŵŝĐƌŽZEƉƌŽĐĞƐƐŝŶŐ͘NatureϮϬϬϯ^ĞƉ
Ϯϱ͖ϰϮϱ;ϲϵϱϲͿ͗ϰϭϱͲϵ͘
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^ĞƉ͖ϭϭ;ϵͿ͗ϱϵϳͲϲϭϬ͘
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27. tŝĞŶŚŽůĚƐ͕<ůŽŽƐƚĞƌŵĂŶtW͕DŝƐŬĂ͕ůǀĂƌĞnjͲ^ĂĂǀĞĚƌĂ͕ĞƌĞnjŝŬŽǀ͕ĚĞ͕ĞƚĂů͘DŝĐƌŽZEĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŝŶnjĞďƌĂĮƐŚ
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ĚŝƐĞĂƐĞ͘Expert Rev Mol DiagnϮϬϭϭ:ĂŶ͖ϭϭ;ϭͿ͗ϳϵͲϴϵ͘
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ϯϬ͘ ŽŶĂƵĞƌ ͕ ĂƌŵŽŶĂ '͕ /ǁĂƐĂŬŝ D͕ DŝŽŶĞ D͕ <ŽLJĂŶĂŐŝ D͕ &ŝƐĐŚĞƌ ͕ Ğƚ Ăů͘ DŝĐƌŽZEͲϵϮĂ ĐŽŶƚƌŽůƐ ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĂŶĚ
ĨƵŶĐƟŽŶĂůƌĞĐŽǀĞƌLJŽĨŝƐĐŚĞŵŝĐƟƐƐƵĞƐŝŶŵŝĐĞ͘ScienceϮϬϬϵ:ƵŶϮϲ͖ϯϮϰ;ϱϵϯϱͿ͗ϭϳϭϬͲϯ͘
ϯϭ͘ >ĂŶĚƐŬƌŽŶĞƌͲŝŐĞƌ^͕YŝƵ͕WĞƌƌŽƩĂW͕^ŝƌĂŐƵƐĂD͕>ĞĞDz͕hůƌŝĐŚs͕ĞƚĂů͘ŶĚŽƚŚĞůŝĂů ŵŝZͲϭϳĂƉƉƌŽdžŝŵĂƚĞůLJϵϮĐůƵƐƚĞƌ
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ϯϮ͘ tƵt͕yŝĂŽ,͕>ĂŐƵŶĂͲ&ĞƌŶĂŶĚĞnj͕sŝůůĂƌƌĞĂů'͕:ƌ͕͘tĂŶŐ<͕'ĞĂƌLJ''͕ĞƚĂů͘&ůŽǁͲĞƉĞŶĚĞŶƚZĞŐƵůĂƟŽŶŽĨ<ƌƵƉƉĞůͲ>ŝŬĞ
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ϯϯ͘ /ĂĐŽŶĞƫ͕WŽůŝŵĞŶŝ͕^ŽƌƌĞŶƟŶŽ^͕^ĂďĂƟŶŽ:͕WŝƌŽŶƟ'͕ƐƉŽƐŝƚŽ'͕ĞƚĂů͘/ŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϵϮĂŝŶĐƌĞĂƐĞƐĞŶĚŽƚŚĞůŝĂů
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ϯϰ͘ ZŝnjŬŝ'͕ŽLJĞƌ>͘>ŶĐŝŶŐĞƉŝŐĞŶĞƟĐĐŽŶƚƌŽůŽĨƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶƚŽĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚĂŶĚĚŝƐĞĂƐĞ͘Circ ResϮϬϭϱ:Ƶů
ϯ͖ϭϭϳ;ϮͿ͗ϭϵϮͲϮϬϲ͘
1
ϯϱ͘ DĞƌĐĞƌdZ͕DĂƫĐŬ:^͘^ƚƌƵĐƚƵƌĞĂŶĚĨƵŶĐƟŽŶŽĨůŽŶŐŶŽŶĐŽĚŝŶŐZEƐŝŶĞƉŝŐĞŶĞƟĐƌĞŐƵůĂƟŽŶ͘Nat Struct Mol BiolϮϬϭϯ
DĂƌ͖ϮϬ;ϯͿ͗ϯϬϬͲϳ͘
ϯϲ͘ ZŝŶŶ:>͕ŚĂŶŐ,z͘'ĞŶŽŵĞƌĞŐƵůĂƟŽŶďLJůŽŶŐŶŽŶĐŽĚŝŶŐZEƐ͘Annu Rev BiochemϮϬϭϮ͖ϴϭ͗ϭϰϱͲϲϲ͘
ϯϳ͘ DŝĐŚĂůŝŬ <D͕ zŽƵ y͕ DĂŶĂǀƐŬŝ z͕ ŽĚĚĂďĂůůĂƉƵƌ ͕ ŽƌŶŝŐ D͕ ƌĂƵŶ d͕ Ğƚ Ăů͘ >ŽŶŐ ŶŽŶĐŽĚŝŶŐ ZE D>dϭ ƌĞŐƵůĂƚĞƐ
ĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĐĞůůĨƵŶĐƟŽŶĂŶĚǀĞƐƐĞůŐƌŽǁƚŚ͘Circ ResϮϬϭϰƉƌϮϱ͖ϭϭϰ;ϵͿ͗ϭϯϴϵͲϵϳ͘
ϯϴ͘ hĐŚŝĚĂ^͕ŝŵŵĞůĞƌ^͘>ŽŶŐŶŽŶĐŽĚŝŶŐZEƐŝŶĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌĚŝƐĞĂƐĞƐ͘Circ ResϮϬϭϱ&Ğďϭϯ͖ϭϭϲ;ϰͿ͗ϳϯϳͲϱϬ͘
ϯϵ͘ <ŝƐƐd͘^ŵĂůůŶƵĐůĞŽůĂƌZEͲŐƵŝĚĞĚƉŽƐƚͲƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂůŵŽĚŝĮĐĂƟŽŶŽĨĐĞůůƵůĂƌZEƐ͘EMBO JϮϬϬϭ:Ƶůϭϲ͖ϮϬ;ϭϰͿ͗ϯϲϭϳͲϮϮ͘
ϰϬ͘ &ŝůŝƉŽǁŝĐnjt͕WŽŐĂĐŝĐs͘ŝŽŐĞŶĞƐŝƐŽĨƐŵĂůůŶƵĐůĞŽůĂƌƌŝďŽŶƵĐůĞŽƉƌŽƚĞŝŶƐ͘Curr Opin Cell BiolϮϬϬϮ:ƵŶ͖ϭϰ;ϯͿ͗ϯϭϵͲϮϳ͘
ϰϭ͘ DŝĐŚĞů/͕,ŽůůĞLJ>͕^ĐƌƵŐŐƐ^͕^ŝĚŚƵZ͕ƌŽŽŬŚĞĂƌƚZd͕>ŝƐƚĞŶďĞƌŐĞƌ>>͕ĞƚĂů͘^ŵĂůůŶƵĐůĞŽůĂƌZEƐhϯϮĂ͕hϯϯ͕ĂŶĚhϯϱĂ
ĂƌĞĐƌŝƟĐĂůŵĞĚŝĂƚŽƌƐŽĨŵĞƚĂďŽůŝĐƐƚƌĞƐƐ͘Cell MetabϮϬϭϭ:Ƶůϲ͖ϭϰ;ϭͿ͗ϯϯͲϰϰ͘
ϰϮ͘ ƌĂŶĚŝƐ<͕'ĂůĞ^͕:ŝŶŶ^͕>ĂŶŐŵĂĚĞ^:͕ƵĚůĞLJͲZƵĐŬĞƌE͕:ŝĂŶŐ,͕ĞƚĂů͘ŽdžͬƐŵĂůůŶƵĐůĞŽůĂƌZE;ƐŶŽZEͿhϲϬƌĞŐƵůĂƚĞƐ
ŝŶƚƌĂĐĞůůƵůĂƌĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůƚƌĂĸĐŬŝŶŐ͘J Biol ChemϮϬϭϯĞĐϭϯ͖Ϯϴϴ;ϱϬͿ͗ϯϱϳϬϯͲϭϯ͘
ϰϯ͘ ĞŶĞƚĂƚŽƐ>͕,ĂƚnjŝŵŝĐŚĂĞů͕>ŽŶĚŝŶ͕sĂƌƚŚŽůŽŵĂƚŽƐ'͕>ŽŚĞƌW͕ZŝŐŽƵƚƐŽƐ/͕ĞƚĂů͘dŚĞŵŝĐƌŽZEƐǁŝƚŚŝŶƚŚĞ><ϭͲ/Kϯ
ŐĞŶŽŵŝĐƌĞŐŝŽŶ͗ŝŶǀŽůǀĞŵĞŶƚŝŶĚŝƐĞĂƐĞƉĂƚŚŽŐĞŶĞƐŝƐ͘Cell Mol Life SciϮϬϭϯDĂƌ͖ϳϬ;ϱͿ͗ϳϵϱͲϴϭϰ͘
ϰϰ͘ ĂǀŝŬ ͕ >ƵŵŝǀƵŽƌŝ ,͕ >ĞƉƉĂŶĞŶ K͕ tŝƌƚŚ d͕ ,ĂŬŬŝŶĞŶ ^<͕ ƌĂƐĞŶ :,͕ Ğƚ Ăů͘ 'ůŽďĂů E ŵĞƚŚLJůĂƟŽŶ ĂŶĂůLJƐŝƐ ŽĨ ŚƵŵĂŶ
ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐƉůĂƋƵĞƐƌĞǀĞĂůƐĞdžƚĞŶƐŝǀĞŐĞŶŽŵŝĐŚLJƉŽŵĞƚŚLJůĂƟŽŶĂŶĚƌĞĂĐƟǀĂƟŽŶĂƚŝŵƉƌŝŶƚĞĚůŽĐƵƐϭϰƋϯϮŝŶǀŽůǀŝŶŐ
ŝŶĚƵĐƟŽŶŽĨĂŵŝZEĐůƵƐƚĞƌ͘Eur Heart JϮϬϭϱƉƌϮϭ͖ϯϲ;ϭϲͿ͗ϵϵϯͲϭϬϬϬ͘
ϰϱ͘ 'ŽƌĚŽŶ&͕EƵƩ>͕ŚĞƵŶƐƵĐŚŽŶW͕EĂŬĂLJĂŵĂz͕WƌŽǀĞŶĐŚĞƌ<͕ZŝĐĞ<͕ĞƚĂů͘/ŶĐƌĞĂƐĞĚĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐŐĞŶĞƐŝŶ
ƚŚĞďƌĂŝŶƐŽĨŵŽƵƐĞŵĞŐϯͲŶƵůůĞŵďƌLJŽƐ͘EndocrinologyϮϬϭϬ:ƵŶ͖ϭϱϭ;ϲͿ͗ϮϰϰϯͲϱϮ͘
ϰϲ͘ ^ŶLJĚĞƌD͕ZŝĐĞ>͕ƐƚƌĞůůĂE>͕,ĞůĚ͕<ĂŶĚĂƌŝĂŶ^͕EĂLJĂ&:͘D&ϮƌĞŐƵůĂƚĞƐƚŚĞ'ƚůϮͲŝŽϯŵŝĐƌŽZEŵĞŐĂͲĐůƵƐƚĞƌƚŽ
ŵŽĚƵůĂƚĞtEdƐŝŐŶĂůŝŶŐŝŶƐŬĞůĞƚĂůŵƵƐĐůĞƌĞŐĞŶĞƌĂƟŽŶ͘DevelopmentϮϬϭϯ:ĂŶϭ͖ϭϰϬ;ϭͿ͗ϯϭͲϰϮ͘