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The handle http://hdl.handle.net/1887/47467 holds various files of this Leiden University dissertation

Author: Welten, S.M.J.

Title: The role of 14q32 microRNAs in vascular remodelling

Issue Date: 2017-03-09

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dŚĞŵƵůƟĨĂĐƚŽƌŝĂůŶĂƚƵƌĞŽĨŵŝĐƌŽZEƐŝƐǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ

Cardiovasc Res 2016 May 1;110(1):6-22

SMJ Welten^1,2Ύ

'ŽŽƐƐĞŶƐ^1,2Ύ W,YƵĂǆ^1,2†

zEŽƐƐĞŶƚ^1,2†

Chapter 2

(3)

Ϯϴ

Abstract

sĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐŝƐĂŵƵůƟĨĂĐƚŽƌŝĂůƉƌŽĐĞƐƐǁŚŝĐŚŝŶǀŽůǀĞƐďŽƚŚĂĚĂƉƟǀĞĂŶĚŵĂůĂĚĂƉƟǀĞĐŚĂŶŐĞƐ

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ŽĨƚŚĞǀĞƐƐĞůǁĂůů͘^ŝŶĐĞŵĂŶǇĚŝīĞƌĞŶƚƉƌŽĐĞƐƐĞƐŽĨǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐĂƌĞƌĞŐƵůĂƚĞĚďǇƐŝŵŝůĂƌ

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ďŽƚŚ ƚŚĞ ĂĚĂƉƟǀĞ ƉƌŽĐĞƐƐĞƐ ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĂŶĚ ĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĂƐ ǁĞůů ĂƐ ŵĂůĂĚĂƉƟǀĞ ƉƌŽĐĞƐƐĞƐ

ŽĨ ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͕ ƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐ ĂŶĚ ĂŶĞƵƌǇƐŵ ĨŽƌŵĂƟŽŶ͘ ,ĞƌĞ͕ ǁĞ ĚŝƐĐƵƐƐ ƚŚĞ ŵƵůƟĨĂĐƚŽƌŝĂů ƌŽůĞ ŽĨ

ŵŝĐƌŽZEƐĂŶĚŵŝĐƌŽZEĐůƵƐƚĞƌƐƚŚĂƚǁĞƌĞƌĞƉŽƌƚĞĚƚŽƉůĂǇĂƌŽůĞŝŶŵƵůƟƉůĞ ĨŽƌŵƐŽĨǀĂƐĐƵůĂƌ

ƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐĂŶĚĂƌĞĐůĞĂƌůǇůŝŶŬĞĚƚŽĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌĚŝƐĞĂƐĞ͘dŚĞŵŝĐƌŽZEƐƌĞǀŝĞǁĞĚĂƌĞŵŝZͲϭϮϲ͕

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(4)

2 /ŶƚƌŽĚƵĐƟŽŶ

MicroRNAs

DŝĐƌŽZEƐ ĂƌĞ Ă ĐůĂƐƐ ŽĨ ĞŶĚŽŐĞŶŽƵƐ ŶŽŶĐŽĚŝŶŐ ZE ŵŽůĞĐƵůĞƐ ŽĨ ĂƉƉƌŽǆŝŵĂƚĞůǇ ϮϮ ŶƵĐůĞŽƟĚĞƐ

ŝŶ ůĞŶŐƚŚ͘ DŝĐƌŽZEƐ ŝŶŚŝďŝƚ ƚƌĂŶƐůĂƟŽŶ ŽĨ ŵZEƐ ŝŶƚŽ ƉƌŽƚĞŝŶƐ ďǇ ďŝŶĚŝŶŐ ƚŽ ƐƉĞĐŝĮĐ ƐŝƚĞƐ ŝŶ ƚŚĞ

ϯ͛ƵŶƚƌĂŶƐůĂƚĞĚƌĞŐŝŽŶ;ϯ͛hdZͿŽĨƚŚĞŝƌƚĂƌŐĞƚŵZEƐ͘ZĂƚŚĞƌƚŚĂŶĐŽŵƉůĞƚĞůǇƐŝůĞŶĐŝŶŐƚŚĞŝƌƚĂƌŐĞƚ

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Vascular remodelling

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(5)

ϯϬ

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Janus phenomenon

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ĄŶĚĂƌĞĐůĞĂƌůǇůŝŶŬĞĚƚŽs͘

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2

Non-standard Abbreviations and Acronyms

3’UTR 3’untranslated region

AAA Abdominal aortic aneurysm

AAV Adeno-associated virus

AngII Angiotensin II

CAD Coronary artery disease

CVD Cardiovascular disease

EC Endothelial cell

HDL High density lipoprotein

IA Intracranial aneurysm

LNA Locked nucleic acid

miR MicroRNA

MO Morpholino

MP/MV Microparticle/Microvesicle

MSC Mesenchymal stem cell

oxLDL Oxidized low density lipoprotein

PBMC Peripheral blood mononuclear cell

siRNA Small interfering RNA

TLR Toll-like receptor

(V)LDL (very) low density lipoprotein

(V)SMC (vascular) smooth muscle cell

Abbreviations of NCBI-Annotated Target Genes

ABCA1 ATP-binding cassette transporter A1

ACAT1 Acyl-CoA cholesterol acyltransferase-1

ACE Angiotensin converting enzyme

ANGPTL3 Angiopoietin-like 3

ARF6 ADP ribosylation factor 6

AT1R Angiotensin II type 1 receptor

BCL2 / 6 B-cell lymphoma 2 / 6

bFGF Basic fibroblast growth factor

BIC B cell integration cluster

BMP4 Bone morphogenetic protein 4

CCL2/MCP1 Monocyte chemoattractant protein 1

CD146 Cluster of differentiation 146 (melanoma cell adhesion molecule)

CDK4 Cyclin dependent kinase 4

Wdϭɲ ĂƌŶŝƚŝŶĞƉĂůŵŝƚŽǇůƚƌĂŶƐĨĞƌĂƐĞϭɲ

CXCL12/SDF1 Stromal derived factor-1

CXCR4 Chemokine (C-X-C motif) receptor 4

DGAT2 Diacylglycerol O-acyltransferase 2

DLK1 NOTCH1 inhibitor delta-like 1 homolog

E2F1 E2F transcription factor 1

EFNB2 Ephrin B2

(7)

ϯϮ

dĂďůĞϭ͘EŽŶƐƚĂŶĚĂƌĚĂďďƌĞǀŝĂƟŽŶƐĂŶĚĂĐƌŽŶǇŵƐ͘

IL33 Interleukin 33

INSIG1 Insulin induced gene 1

IRS1 / 2 Insulin receptor substrate 1 / 2

/d'ɴϴ /ŶƚĞŐƌŝŶɴϴ

JAK1 Janus Kinase 1

KLF2 / 4 / 5 Krüppel-like factor 2 / 4 / 5

LPL Lipoprotein lipase

LRP6 LDL receptor related protein 6

MCP1/CCL2 Monocyte chemoattractant protein 1

MEF2a Myocyte enhancer factor 2

MEG3 Maternally expressed gene 3

MIF Macrophage migration inhibitory factor

MKK4 Mitogen-Activated Protein Kinase Kinase 4

MMP1 / 3 Matrix metalloproteinase 1 / 3

MRTFA Myocardin related transcription factor A Myd88 myeloid differentiation primary response gene

PAK4 p21-activated kinase 4

PIK3R2 Phosphoinositide-3-kinase, regulatory subunit 2

WWZɶ Proliferator-activator receptor gamma

PPP2R2A Protein phosphatase 2 regulatory subunit B, alpha

RGS16 Regulator of G protein signalling 16

SDF1/CXCL12 Stromal derived factor-1 SEMA6A / 6D / 3B Semaphorin 6A / 6D / 3B

SMAD3 SMAD family member 3

SOCS1 / 5 Suppressor of cytokine signalling 1 / 5 SPRED1 Sprouty-related, EVH1 domain containing 1 SREBPs Sterol regulatory element-binding proteins

SRF Serum response factor

TAB2 TGF-ɴĂĐƚŝǀĂƚĞĚkinase1/MAP3K7 binding protein 2 d'&ɴ;ϮͿ Transforming growth factor beta (2)

d'&ɴZϮ d'&ɴƌĞĐĞƉƚŽƌϮ

TIMP3 Tissue inhibitor of metalloproteinase 3

TLR4 Toll like receptor 4

TNF-ɲ Tumor necrosis factor alpha

TRIF TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-ɴ

uPA urokinase-type plasminogen activator

VCAM1 Vascular cell adhesion molecule 1

VE-cadherin Vascular endothelial cadherin

VEGF Vascular endothelial growth factor

(8)

2

Figure 1.dŚĞƚŽƉϱŵŝĐƌŽZEƐƌĞƉŽƌƚĞĚƚŽƉůĂǇĂƌŽůĞŝŶĞĂĐŚŽĨƚŚĞĨŽůůŽǁŝŶŐǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐƉƌŽĐĞƐƐĞƐ͕ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĂŶĚ

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(9)

ϯϰ

miR-126

DŝZͲϭϮϲŝƐŽŶĞŽĨƚŚĞŵŽƐƚĂďƵŶĚĂŶƚůǇĞǆƉƌĞƐƐĞĚŵŝĐƌŽZEƐŝŶĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĐĞůůƐ;ƐͿ^ϭϱ͘dŚĞŵŝZͲ ϭϮϲŐĞŶĞŝƐůŽĐĂƚĞĚŽŶŚƵŵĂŶĐŚƌŽŵŽƐŽŵĞϵĂŶĚŐŝǀĞƐƌŝƐĞƚŽƚǁŽŵĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEƐ͕ŵŝZͲϭϮϲͲϯƉ

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Ă ƌŽůĞ ĨŽƌ ŵŝZͲϭϮϲ ŝŶ ǀĂƐĐƵůĂƌ ŚŽŵĞŽƐƚĂƐŝƐ ĂŶĚ ŝŶŇĂŵŵĂƟŽŶ^ϭϲ͘ WůĂƚĞůĞƚƐ ĂƌĞ Ă ŵĂũŽƌ ƐŽƵƌĐĞ ŽĨ

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ŝŶŚŝďŝƚŽƌƐ͕ ƐƵĐŚ ĂƐ ĂƐƉŝƌŝŶ¹⁷͘ dŚĞ ĚĞůŝǀĞƌǇ ŽĨ ŵŝZͲϭϮϲ ďǇ ƉůĂƚĞůĞƚ ŵŝĐƌŽƉĂƌƟĐůĞƐ ;DWƐͿ ƚŽ ƉƌŝŵĂƌǇ

ŚƵŵĂŶŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐǁĂƐƌĞƉŽƌƚĞĚƌĞĐĞŶƚůǇĂŶĚŵŝZͲϭϮϲĚĞƌŝǀĞĚĨƌŽŵƚŚĞƐĞƉůĂƚĞůĞƚDWƐŝŶŇƵĞŶĐĞƐ

ŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞŐĞŶĞĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶĂŶĚĨƵŶĐƟŽŶ^ϭϴ͘>ĞǀĞůƐŽĨŵŝZͲϭϮϲĂƌĞĚŝīĞƌĞŶƟĂůůǇĞǆƉƌĞƐƐĞĚŝŶƉůĂƐŵĂ

ƐĂŵƉůĞƐŽĨƉĂƟĞŶƚƐǁŝƚŚĐŽƌŽŶĂƌǇĂƌƚĞƌǇĚŝƐĞĂƐĞ;Ϳ^ϭϵ.

EĞŽǀĂƐĐƵůĂƌŝǌĂƟŽŶ

dŚĞĮƌƐƚƐƚƵĚŝĞƐĨƌŽŵϮϬϬϴƚŚĂƚŝŶǀĞƐƟŐĂƚĞĚƚŚĞƌŽůĞŽĨŵŝZͲϭϮϲŝŶĨƵŶĐƟŽŶĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚƚŚĂƚ

ŵŝZͲϭϮϲƚĂƌŐĞƚƐsDϭ²⁰͘/ŶĐƌĞĂƐĞĚĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨĂĚŚĞƐŝŽŶŵŽůĞĐƵůĞƐƐƵĐŚĂƐsDϭĂŶĚŝŶĐƌĞĂƐĞĚ

ůĞƵŬŽĐǇƚĞĂĚŚĞƌĞŶĐĞƚŽƐĂƌĞŶĞĐĞƐƐĂƌǇĨŽƌƚŚĞŝŶŝƟĂƟŽŶŽĨĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘ŽƚŚŵĞĐŚĂŶŝƐŵƐĂƌĞ

ƐƟŵƵůĂƚĞĚďǇŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϮϲ²⁰͘/Ŷ,hsƐ͕ŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϮϲůĞĚƚŽŝŶĐƌĞĂƐĞĚƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ

ĂŶĚŵŝŐƌĂƟŽŶ²¹͘&ƵƌƚŚĞƌŵŽƌĞ͕ŝŶũĞĐƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϮϲŝŶŚŝďŝƚŽƌƐŝŶƚŽǌĞďƌĂĮƐŚĞŵďƌǇŽƐĂīĞĐƚĞĚďůŽŽĚ

ǀĞƐƐĞů ŝŶƚĞŐƌŝƚǇ͕ ĂƐ ǁĂƐ ĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚ ďǇ ĐŽůůĂƉƐĞĚ ůƵŵĞŶƐ ĂŶĚ ĐŽŵƉƌŽŵŝƐĞĚ ĞŶĚŽƚŚĞůŝĂů ƚƵďĞ

ŽƌŐĂŶŝǌĂƟŽŶ²¹͘^ƚƵĚŝĞƐŝŶŵŝĐĞƐŚŽǁĞĚƚŚĂƚŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϮϲĚĞĐƌĞĂƐĞĚƌĞĐŽǀĞƌǇĂŌĞƌŵǇŽĐĂƌĚŝĂů

ŝŶĨĂƌĐƟŽŶĂŶĚŝŵƉĂŝƌĞĚĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐĐĂƉĂĐŝƚǇŝŶĂŚŝŶĚůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂŵŽĚĞů^ϮϮͲϮϰ͘dŚĞƐĞĞīĞĐƚƐǁĞƌĞ

ƉĂƌƟĂůůǇ ŵĞĚŝĂƚĞĚ ǀŝĂ ŝŶŚŝďŝƚŽƌƐ ŽĨ s'&ͲƐŝŐŶĂůůŝŶŐ͕ ŶĂŵĞůǇ ^WZϭ ĂŶĚ W/<ϯZϮ^ϮϭͲϮϯ͘ ŽƚŚ ^ƉƌĞĚϭ

ĂŶĚWŝŬϯƌϮĂƌĞƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚŝŶĂďƐĞŶĐĞŽĨŵŝZͲϭϮϲ͕ĐĂƵƐŝŶŐĂŶŝŶĐƌĞĂƐĞŝŶǀĂƐĐƵůĂƌƉĞƌŵĞĂďŝůŝƚǇĂŶĚ

ůĞĂŬĂŐĞ^Ϯϭ͕Ϯϯ͘DŝZͲϭϮϲǁĂƐĂůƐŽƐŚŽǁŶƚŽƚĂƌŐĞƚy>ϭϮ^Ϯϱ͘^ŝůĞŶĐŝŶŐŵŝZͲϭϮϲŝŶĚƵĐĞĚy>ϭϮĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ

ǁŚŝĐŚĞŶŚĂŶĐĞĚŵŝŐƌĂƟŽŶŽĨϯϰ^нƉƌŽŐĞŶŝƚŽƌĐĞůůƐin vitroĂŶĚŝŶĐƌĞĂƐĞĚƚŚĞŶƵŵďĞƌŽĨĐŝƌĐƵůĂƟŶŐ

ďŽŶĞŵĂƌƌŽǁͲĚĞƌŝǀĞĚƉƌŽŐĞŶŝƚŽƌĐĞůůƐĂŌĞƌŚŝŶĚůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂin vivo^Ϯϱ͕Ϯϲ.

/Ŷ ĂĚĚŝƟŽŶ͕ ĞǆŽƐŽŵĞƐ ĨƌŽŵ ŚƵŵĂŶ ϯϰ^н ĐĞůůƐ͕ ǁŚŝĐŚ ĂƌĞ ƌŝĐŚ ŝŶ ŵŝZͲϭϮϲ͕ ŚĂǀĞ ŐƌĞĂƚ ĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐ

ĐĂƉĂĐŝƚǇďŽƚŚin vitroĂŶĚin vivo²⁷͘DŽĐŚĂƌůĂet al.ƐŚŽǁĞĚƚŚĂƚϯϰ^нƉĞƌŝƉŚĞƌĂůďůŽŽĚŵŽŶŽŶƵĐůĞĂƌ

ĐĞůůƐ ;WDƐͿ ƐĞĐƌĞƚĞ ŵŝĐƌŽǀĞƐŝĐůĞƐ ĂŶĚ ĞǆŽƐŽŵĞƐ ƚŚĂƚ ĂƌĞ ĞŶƌŝĐŚĞĚ ǁŝƚŚ ŵŝZͲϭϮϲ^Ϯϴ͘ dŚĞƐĞ

ŵŝĐƌŽǀĞƐŝĐůĞƐĂŶĚĞǆŽƐŽŵĞƐĂƌĞƚĂŬĞŶƵƉďǇƐĂŶĚĨĂĐŝůŝƚĂƚĞƚŚĞƉƌŽĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐĞīĞĐƚƐŽĨŵŝZͲϭϮϲ^Ϯϴ.

Atherosclerosis

ƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐ ƉůĂƋƵĞ ƉƌŽŐƌĞƐƐŝŽŶ ŝƐ ŽŌĞŶ ĂĐĐŽŵƉĂŶŝĞĚ ďǇ ĂƉŽƉƚŽƐŝƐ ŽĨ ;ǀĂƐĐƵůĂƌͿ ĐĞůůƐ ŝŶ ƚŚĞ

ƉůĂƋƵĞ^Ϯϵ͘ ƵƌŝŶŐ ĂƉŽƉƚŽƐŝƐ͕ Ɛ ƌĞůĞĂƐĞ ŵŝĐƌŽǀĞƐŝĐůĞƐ ƚŚĂƚ ĂƌĞ ĞŶƌŝĐŚĞĚ ǁŝƚŚ ŵŝZͲϭϮϲ^Ϯϱ͘ ĞůŝǀĞƌǇ

ŽĨ ŵŝZͲϭϮϲ ƚŽ ƌĞĐŝƉŝĞŶƚ ǀĂƐĐƵůĂƌ ĐĞůůƐ ŝŶŚŝďŝƚƐ ƚŚĞ ƉƌŽŐƌĞƐƐŝŽŶ ŽĨ ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͕ ƉƌĞƐƵŵĂďůǇ ǀŝĂ

ƐƵƉƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨZ'^ϭϲ͕ǁŚŝĐŚŝƐĂŶĞŐĂƟǀĞƌĞŐƵůĂƚŽƌŽĨyZϰ͘^ƵďƐĞƋƵĞŶƚƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨyZϰůĞĚ

ƚŽƚŚĞƉƌŽĚƵĐƟŽŶŽĨy>ϭϮ͘dŚŝƐƌĞĚƵĐĞĚůĞƐŝŽŶĨŽƌŵĂƟŽŶďǇĚĞĐƌĞĂƐŝŶŐƚŚĞŶƵŵďĞƌŽĨŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ

ĂŶĚĂƉŽƉƚŽƟĐĐĞůůƐŝŶƚŚĞƉůĂƋƵĞĂŶĚŝŶĐƌĞĂƐŝŶŐƚŚĞƌĞĐƌƵŝƚŵĞŶƚŽĨĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůƉƌŽŐĞŶŝƚŽƌĐĞůůƐĨŽƌ

ƌĞƉĂŝƌ ŝŶ Ă ŵŽƵƐĞ ŵŽĚĞů ĨŽƌ ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ^Ϯϱ͘ sĞƐŝĐůĞͲŝŶĚĞƉĞŶĚĞŶƚ ƚƌĂŶƐĨĞƌ ŽĨ ŵŝZͲϭϮϲ ĨƌŽŵ Ɛ

(10)

2

ƚŽ^DƐǁĂƐĂůƐŽƌĞƉŽƌƚĞĚ͕ŝŶĐƌĞĂƐŝŶŐŵŝZͲϭϮϲůĞǀĞůƐŝŶ^DƐ;&ŝŐƵƌĞϮͿ͘ĞĐƌĞĂƐĞĚĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨ

ŵŝZͲϭϮϲƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞƐ&KyKϯ͕>ϮĂŶĚ/Z^ϭůĞĚƚŽŝŶĐƌĞĂƐĞĚƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶŽĨ^DƐ^ϯϬ͘^ƵďũĞĐƟŶŐƐ

ƚŽůĂŵŝŶĂƌƐŚĞĂƌƐƚƌĞƐƐŽƌŵŝZͲϭϮϲŝŶŚŝďŝƟŽŶĂďŽůŝƐŚĞĚƚŚĞƐĞĞīĞĐƚƐ͘/ŶŵŝZͲϭϮϲ^ͲͬͲŵŝĐĞ͕ŶĞŽŝŶƟŵĂ

ĨŽƌŵĂƟŽŶ ǁĂƐ ĂƩĞŶƵĂƚĞĚ ĐŽŵƉĂƌĞĚ ƚŽ ǁŝůĚƚǇƉĞ ŵŝĐĞ ĂŌĞƌ ůŝŐĂƟŽŶ ŽĨ ƚŚĞ ůĞŌ ĐŽŵŵŽŶ ĐĂƌŽƟĚ

ĂƌƚĞƌǇ^ϯϬ͘ZĞĐĞŶƚůǇ͕ƚŚĞĐŽŶƚƌŝďƵƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϮϲͲϱƉƚŽĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĨŽƌŵĂƟŽŶǁĂƐĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚďǇ

^ĐŚŽďĞƌet al.^ϯϭ͘,ǇƉĞƌĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĞŵŝĐŵŝZͲϭϮϲ^ͲͬͲƉŽ^ͲͬͲĂŶĚŵŝZͲϭϮϲ^нͬнƉŽ^ͲͬͲŵŝĐĞǁĞƌĞƐƵďũĞĐƚĞĚ

ƚŽĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĚĞŶƵĚĂƟŽŶ͘ŌĞƌϭϰĂŶĚϮϴĚĂǇƐ͕ůĞƐŝŽŶĂƌĞĂǁĂƐŝŶĐƌĞĂƐĞĚŝŶŵŝZͲϭϮϲ^ͲͬͲƉŽ^ͲͬͲŵŝĐĞ

ĐŽŵƉĂƌĞĚƚŽĐŽŶƚƌŽůĂŶŝŵĂůƐ^ϯϭ͘DŽƌĞŽǀĞƌ͕ĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůƌĞĐŽǀĞƌǇŽĨƚŚĞĐĂƌŽƟĚůƵŵĞŶǁĂƐŝŵƉĂŝƌĞĚŝŶ

ŵŝZͲϭϮϲ^ͲͬͲƉŽ^ͲͬͲĂŶŝŵĂůƐĚƵĞƚŽƌĞĚƵĐĞĚƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ^ϯϭ͘/ŶƚŚĞƐĞĂŶŝŵĂůƐ͕ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵƵůƟƉůĞ

ŵŝZͲϭϮϲͲϱƉƉƌĞĚŝĐƚĞĚƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞƐǁĂƐŝŶĐƌĞĂƐĞĚ͕ǁŚĞƌĞĂƐĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŬŶŽǁŶŵŝZͲϭϮϲͲϯƉƚĂƌŐĞƚƐ

ǁĂƐŶŽƚ^ϯϭ͘dŚĞĂƵƚŚŽƌƐĐŽŶĮƌŵĞĚƚĂƌŐĞƟŶŐŽĨ><ϭďǇŵŝZͲϭϮϲͲϱƉĂŶĚĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚƚŚĂƚŝŶŚŝďŝƟŽŶ

ŽĨŵŝZͲϭϮϲͲϱƉŝŶĐƌĞĂƐĞĚůŬϭĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶĂŶĚƌĞĚƵĐĞĚƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ^ϯϭ͘dŽŝĚĞŶƟĨǇƚŚĞƐƉĞĐŝĮĐƌŽůĞ

ŽĨŵŝZͲϭϮϲͲϯƉĂŶĚŵŝZͲϭϮϲͲϱƉŝŶĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůƌĞƉĂŝƌ͕ĚĞŶƵĚĞĚĂƌƚĞƌŝĞƐŽĨƉŽ^ͲͬͲŵŝĐĞǁĞƌĞƚƌĞĂƚĞĚ

ǁŝƚŚ ĞŝƚŚĞƌ ŵŝZͲϭϮϲͲϯƉͲ͕ ŵŝZͲϭϮϲͲϱƉͲ Žƌ ĐŽŶƚƌŽůͲŵŝZ ŝŶŚŝďŝƚŽƌƐ͘ dƌĞĂƚŵĞŶƚ ǁŝƚŚ ĂŶƟͲŵŝZͲϭϮϲͲϱƉ͕

ďƵƚŶŽƚĂŶƟͲŵŝZͲϭϮϲͲϯƉ͕ƐŝŐŶŝĮĐĂŶƚůǇŝŶĐƌĞĂƐĞĚƚŚĞůĞƐŝŽŶĂƌĞĂĂŶĚŝŵƉĂŝƌĞĚĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůƌĞĐŽǀĞƌǇ

ĂŶĚƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ^ϯϭ͘/ŶƵŶƚƌĞĂƚĞĚƉŽ^ͲͬͲŵŝĐĞ͕ĚŝƐƚƵƌďĞĚŇŽǁůĞĚƚŽĚĞĐƌĞĂƐĞĚŵŝZͲϭϮϲͲϱƉůĞǀĞůƐ

ĂŶĚŝŶĐƌĞĂƐĞĚůŬϭŵZEĂŶĚƉƌŽƚĞŝŶůĞǀĞůƐŝŶƚŚĞĐĂƌŽƟĚĂƌƚĞƌǇ͕ǁŚĞƌĞĂƐŵŝZͲϭϮϲͲϯƉůĞǀĞůƐǁĞƌĞ

ƵŶĂůƚĞƌĞĚ^ϯϭ͘ dŚĞ ĂƵƚŚŽƌƐ ƉƌŽƉŽƐĞĚ ƚŚĂƚ ŵŝZͲϭϮϲͲϱƉ ƉůĂǇƐ Ă ƌŽůĞ ŝŶ ƌĞŐƵůĂƟŶŐ ƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ Ăƚ

ŶŽŶͲƉƌĞĚŝůĞĐƟŽŶƐŝƚĞƐ͕ǁŚĞƌĞĂƐŵŝZͲϭϮϲͲϯƉƉƌĞƐƵŵĂďůǇƌĞŐƵůĂƚĞƐƚŚĞƌĞƉůŝĐĂƟǀĞĐĂƉĂĐŝƚǇŽĨƐĂƚ

ƉƌĞĚŝůĞĐƟŽŶƐŝƚĞƐ^ϯϭ͘&ŝŶĂůůǇ͕ŝŶŚƵŵĂŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐůĞƐŝŽŶƐŵŝZͲϭϮϲͲϱƉůĞǀĞůƐǁĞƌĞĨŽƵŶĚƚŽŝŶǀĞƌƐĞůǇ

ĐŽƌƌĞůĂƚĞǁŝƚŚ><ϭĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶĂŶĚƚŚĞŶƵŵďĞƌŽĨůĞƐŝŽŶĂůŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐĂŶĚƉŽƐŝƟǀĞůǇĐŽƌƌĞůĂƚĞĚǁŝƚŚ

ƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ͕ƐƵŐŐĞƐƟŶŐĂŶĂƚŚĞƌŽƉƌŽƚĞĐƟǀĞĞīĞĐƚŽĨŝŶĐƌĞĂƐĞĚŵŝZͲϭϮϲͲϱƉůĞǀĞůƐŝŶŚƵŵĂŶƐ^ϯϭ.

Aneurysm

ůƚŚŽƵŐŚ ŵŝZͲϭϮϲ ŝƐ ƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚ ŝŶ ĂŶĚ ƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶ ĐŽƌƌĞůĂƚĞĚ ǁŝƚŚ ĚĞĐƌĞĂƐĞĚ dE&Ͳɲ

ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ͕ƚŚĞĞǆĂĐƚĨƵŶĐƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϮϲŝŶƉĂƚŚŽŐĞŶĞƐŝƐŝƐƐƟůůƵŶŬŶŽǁŶ^ϯϮ͘/ŶƉůĂƐŵĂŽĨƉĂƟĞŶƚƐ

ǁŝƚŚ͕ŵŝZͲϭϮϲǁĂƐƐŝŐŶŝĮĐĂŶƚůǇĚŽǁŶƌĞŐƵůĂƚĞĚĐŽŵƉĂƌĞĚƚŽƉůĂƐŵĂŽĨŚĞĂůƚŚǇǀŽůƵŶƚĞĞƌƐ͕ďƵƚ

ŶŽƚĐŽŵƉĂƌĞĚƚŽƉĂƟĞŶƚƐǁŝƚŚ^ϯϮ.

(11)

ϯϲ

Figure 2. dŚĞ ƌŽůĞ ŽĨ ĞŶĚŽƚŚĞůŝĂů ŵŝZͲϭϮϲ ŝŶ ǀĂƐĐƵůĂƌ ƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ͘ DŝZͲϭϮϲ ƌĞŐƵůĂƚĞƐ ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĂŶĚ ǀĂƐĐƵůĂƌ ŝŶƚĞŐƌŝƚǇ ǀŝĂ

ƚĂƌŐĞƟŶŐŽĨsDϭĂŶĚƚĂƌŐĞƟŶŐƚŚĞŝŶŚŝďŝƚŽƌƐŽĨs'&ƐŝŐŶĂůůŝŶŐ͖^WZϭĂŶĚW/<ϯZϮ͘sŝĂŵŝĐƌŽǀĞƐŝĐůĞͲŵĞĚŝĂƚĞĚĚĞůŝǀĞƌǇĨƌŽŵƐ

ƚŽŶĞŝŐŚďŽƵƌŝŶŐǀĂƐĐƵůĂƌĐĞůůƐ͕ŵŝZͲϭϮϲŝŶŚŝďŝƚƐZ'^ϭϲ͕ĂŶŝŶŚŝďŝƚŽƌŽĨyZϰ͕ƌĞƐƵůƟŶŐŝŶƚŚĞĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨy>ϭϮĂŶĚƌĞĚƵĐŝŶŐ

ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͘WĂƌĂĐƌŝŶĞƐĞĐƌĞƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϮϲĨƌŽŵƐƚŽ^DƐůĞĂĚƐƚŽŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨ&KyKϯ͕>ϮĂŶĚ/Z^ϭƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞƐĂŶĚ

ŝŶĐƌĞĂƐĞƐ ƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ ŽĨ ^DƐ͕ ǁŚŝĐŚ ĐŽŶƚƌŝďƵƚĞƐ ƚŽ ƚŚĞ ĂƚŚĞƌŽŐĞŶŝĐ ĂĐƟŽŶƐ ŽĨ ŵŝZͲϭϮϲ͘ /Ŷ ĂĚĚŝƟŽŶ͕ ŵŝZͲϭϮϲͲϱƉ ƐƵƉƉƌĞƐƐĞƐ

ƚŚĞEKd,ϭŝŶŚŝďŝƚŽƌ><ϭ͕ƚŚĞƌĞďǇůŝŵŝƟŶŐĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͘ƌƌŽǁƐŝŶĚŝĐĂƚĞƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶ͘ĂƉƉĞĚůŝŶĞƐŝŶĚŝĐĂƚĞŝŶŚŝďŝƟŽŶ͘Ds͖

ŵŝĐƌŽǀĞƐŝĐůĞ͕͖ĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĐĞůů͕^D͖ƐŵŽŽƚŚŵƵƐĐůĞĐĞůů͘WDƐ͖ƉĞƌŝƉŚĞƌĂůďůŽŽĚŵŽŶŽŶƵĐůĞĂƌĐĞůůƐ͘&ŽƌĨƵůůƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞŶĂŵĞƐ͕

ƐĞĞdĂďůĞϭ͘

miR-155

dŚĞŵŝZͲϭϱϱŐĞŶĞŝƐůŽĐĂƚĞĚǁŝƚŚŝŶĂŶĞǆŽŶŽĨƚŚĞŶŽŶͲĐŽĚŝŶŐZE/ŽŶŚƵŵĂŶĐŚƌŽŵŽƐŽŵĞϮϭ͘

DŝZͲϭϱϱŝƐŚŝŐŚůǇĞǆƉƌĞƐƐĞĚďǇĂĐƟǀĂƚĞĚĂŶĚdĐĞůůƐ͕ďƵƚĂůƐŽďǇŵŽŶŽĐǇƚĞƐĂŶĚŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ^ϯϯ͕ϯϰ. In ĂĚĚŝƟŽŶ͕ŵŝZͲϭϱϱŝƐĞǆƉƌĞƐƐĞĚŝŶƐĂŶĚ^DƐ^ϯϱ.

DŝZͲϭϱϱŝƐƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚŝŶŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐǀŝĂd>ZůŝŐĂŶĚƐ͕ƐƵĐŚĂƐ>W^^ϯϰ͘DŝZͲϭϱϱĞǆĞƌƚƐƉƌŽͲŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌǇ

ĞīĞĐƚƐǀŝĂƚĂƌŐĞƟŶŐŽĨƚŚĞĂŶƟͲŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌǇ^K^ϭ^ϯϲ͘/ŶĐŽŶƚƌĂƐƚ͕ĂŶƟͲŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌǇĞīĞĐƚƐŽĨŵŝZͲ

(12)

2

ϭϱϱƐŝŐŶĂůůŝŶŐŚĂǀĞĂůƐŽďĞĞŶĚĞƐĐƌŝďĞĚǀŝĂƚĂƌŐĞƟŶŐŽĨdϮ^ϯϳ;&ŝŐƵƌĞϯͿ͘

/ŶϮϬϭϮ͕ŽƌƐƚĞŶet al.ĚĞƐĐƌŝďĞĚĂƌŽůĞĨŽƌŵŝZͲϭϱϱŝŶs͕ĚĞŵŽŶƐƚƌĂƟŶŐƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϱϱ

ĚƵƌŝŶŐƚŚĞĂĐƵƚĞŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌǇƉŚĂƐĞŽĨǀŝƌĂůŵǇŽĐĂƌĚŝƟƐ^ϯϴ͘^ǇƐƚĞŵŝĐŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϱϱƌĞĚƵĐĞĚ

ĐĂƌĚŝĂĐŵŽŶŽĐǇƚĞͬŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞŝŶĮůƚƌĂƟŽŶ͕ĚĞĐƌĞĂƐĞĚdůǇŵƉŚŽĐǇƚĞĂĐƟǀĂƟŽŶĂŶĚƌĞĚƵĐĞĚŵǇŽĐĂƌĚŝĂů

ĚĂŵĂŐĞŝŶĂŵŽƵƐĞŵŽĚĞůŽĨĂĐƵƚĞǀŝƌĂůŵǇŽĐĂƌĚŝƟƐ^ϯϴ.

DŝZͲϭϱϱ ŝƐ ĐŽͲĞǆƉƌĞƐƐĞĚ ǁŝƚŚ dϭZ ŝŶ ,hsƐ ĂŶĚ ^DƐ͕ ǁŚĞƌĞ ŝƚ ƌĞƉƌĞƐƐĞƐ dϭZ ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ^ϯϵ. /ŶƚĞƌĞƐƟŶŐůǇ͕ĂƐŝŶŐůĞŶƵĐůĞŽƟĚĞƉŽůǇŵŽƌƉŚŝƐŵ;нϭϭϲϲͬͿ͕ǁŚŝĐŚŝƐĂƐƐŽĐŝĂƚĞĚǁŝƚŚs͕ǁĂƐĨŽƵŶĚ

ƚŽĚŝƐƌƵƉƚĂŵŝZͲϭϱϱƚĂƌŐĞƚƐŝƚĞŝŶƚŚĞϯ͛hdZŽĨdϭZ^ϯϵ͘KǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϭϱϱƌĞĚƵĐĞĚŵŝŐƌĂƟŽŶ

ŽĨ,hsƐŝŶƌĞƐƉŽŶƐĞƚŽŶŐŝŽƚĞŶƐŝŶ//;ŶŐ//ͿǀŝĂƚĂƌŐĞƟŶŐŽĨƚŚĞdϭZ͘

d^ͲϭŚĂƐƚǁŽƉŽƚĞŶƟĂůďŝŶĚŝŶŐƐŝƚĞƐĨŽƌŵŝZͲϭϱϱŝŶŝƚƐϯ͛hdZĂŶĚŝƐĂŶŽƚŚĞƌƚĂƌŐĞƚŽĨŵŝZͲϭϱϱŝŶ

,hsƐ^ϯϱ͘d^ͲϭĂŶĚŝƚƐĚŽǁŶƐƚƌĞĂŵƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞƐsDϭ͕DWϭĂŶĚ&>dϭǁĞƌĞŝŶĚƵĐĞĚŝŶ,hsƐ

ƵƉŽŶƐƟŵƵůĂƟŽŶǁŝƚŚŶŐ//͘KǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϭϱϱĂďƌŽŐĂƚĞĚƚŚŝƐĞīĞĐƚ^ϯϱ.

ZĞĐĞŶƚ ǁŽƌŬ ďǇ WĂŶŬƌĂƚǌ et al. ĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚ ƚŚĂƚ ŵŝZͲϭϱϱ ĞǆĞƌƚƐ ďŽƚŚ ĂŶƟĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐ ĂŶĚ

ƉƌŽĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶŝĐĨƵŶĐƟŽŶƐĂŌĞƌŝŶĚƵĐƟŽŶŽĨŚŝŶĚůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂŝŶŵŝĐĞ^ϰϬ͕ϰϭ͘DŝZͲϭϱϱǁĂƐƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚ

ƐĞǀĞŶĚĂǇƐĂŌĞƌĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌǇůŝŐĂƟŽŶŝŶŵŝĐĞ͘/ŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϱϱŝŶ,hsƐƌĞƐƵůƚĞĚŝŶŝŶĐƌĞĂƐĞĚ

ƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶĂŶĚƚƵďĞĨŽƌŵĂƟŽŶ^ϰϬ͘dŚĞƐĞƌĞƐƵůƚƐǁĞƌĞĐŽŶĮƌŵĞĚŝŶĂŽƌƟĐƌŝŶŐĂƐƐĂǇƐ͕ĂƐǁĞůůĂƐŝŶ

in vivoŵĂƚƌŝŐĞůƉůƵŐĂƐƐĂǇƐƵƐŝŶŐŵŝZͲϭϱϱ^ͲͬͲŵŝĐĞ͘/ŶŵŝZͲϭϱϱ^ͲͬͲƐ͕ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨdϭZǁĂƐŝŶĐƌĞĂƐĞĚ͘

dϭZĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ ĐŽƵůĚ ďĞŵĂŶŝƉƵůĂƚĞĚďǇŽǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ ŽƌŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϱϱŝŶ ďŽƚŚ ŚƵŵĂŶ

ĂŶĚŵƵƌŝŶĞƐ͘dŚĞĂƵƚŚŽƌƐĐŽŶĐůƵĚĞĚƚŚĂƚƚŚĞĂŶƟĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐƉƌŽƉĞƌƟĞƐŽĨŵŝZͲϭϱϱĂƌĞŵĞĚŝĂƚĞĚ

ǀŝĂ dϭZ^ϰϬ ;&ŝŐƵƌĞ ϮͿ͘ ĞƐƉŝƚĞ ƚŚĞ ĂŶƟĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐ ƉƌŽƉĞƌƟĞƐ ŽĨ ŵŝZͲϭϱϱ͕ ďůŽŽĚ ŇŽǁ ƌĞĐŽǀĞƌǇ ĂŌĞƌ

ŚŝŶĚůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂǁĂƐŝŵƉĂŝƌĞĚŝŶŵŝZͲϭϱϱ^ͲͬͲŵŝĐĞ͘DŝZͲϭϱϱĚĞĮĐŝĞŶĐǇĚĞĐƌĞĂƐĞĚŵŝŐƌĂƟŽŶŽĨďŽŶĞͲ ŵĂƌƌŽǁ ĚĞƌŝǀĞĚ ŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ͘ DŝZͲϭϱϱ^ͲͬͲ ŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ ƐŚŽǁĞĚ ƐŝŐŶŝĮĐĂŶƚůǇ ƌĞĚƵĐĞĚ ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ

ůĞǀĞůƐŽĨƉƌŽĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶŝĐĐǇƚŽŬŝŶĞƐĂŶĚĐŚĞŵŽŬŝŶĞƐƵƉŽŶ>W^ƐƟŵƵůĂƟŽŶ͕ĐŽŵƉĂƌĞĚƚŽǁŝůĚƚǇƉĞĐĞůůƐ͘

^K^ϭǁĂƐŝĚĞŶƟĮĞĚĂƐĂƉŽƚĞŶƟĂůŵĞĚŝĂƚŽƌ͕ĂƐƚŚŝƐǁĂƐƚŚĞŵŽƐƚƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞŝŶŵŝZͲϭϱϱ^Ͳ

ͬͲDDƐ͘<ŶŽĐŬĚŽǁŶŽĨ^K^ϭŝŶĚĞĞĚƌĞǀĞƌƐĞĚƚŚĞĞīĞĐƚƐŽĨŵŝZͲϭϱϱĚĞĮĐŝĞŶĐǇŽŶƉƌŽĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶŝĐ

ĐǇƚŽŬŝŶĞƉƌŽĚƵĐƟŽŶ^ϰϬ.

(13)

ϯϴ

ŽƉƉŽƐŝƚĞĮŶĚŝŶŐƐŽŶƚŚĞƌŽůĞŽĨŵŝZͲϭϱϱŝŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐŚĂǀĞĂůƐŽďĞĞŶƌĞƉŽƌƚĞĚ͘>>ͲZ^ͲͬͲŵŝĐĞ

ƚƌĂŶƐƉůĂŶƚĞĚǁŝƚŚŵŝZͲϭϱϱ^ͲͬͲďŽŶĞŵĂƌƌŽǁĚĞǀĞůŽƉĞĚůĂƌŐĞƌůĞƐŝŽŶƐĐŽŵƉĂƌĞĚƚŽŵŝĐĞƚƌĂŶƐƉůĂŶƚĞĚ

ǁŝƚŚ ǁŝůĚƚǇƉĞ ďŽŶĞ ŵĂƌƌŽǁ^ϰϴ͘ /ŶĐƌĞĂƐĞĚ ŶƵŵďĞƌƐ ŽĨ ŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ ĂŶĚ ŶĞƵƚƌŽƉŚŝůƐ ǁĞƌĞ ƉƌĞƐĞŶƚ

ŝŶƚŚĞƐĞůĞƐŝŽŶƐĂƐǁĞůůĂƐŝŶĐƌĞĂƐĞĚŶƵŵďĞƌƐŽĨŐƌĂŶƵůŽĐǇƚĞƐĂŶĚŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌǇŵŽŶŽĐǇƚĞƐŝŶƚŚĞ

ĐŝƌĐƵůĂƟŽŶ^ϰϴ͘ƉƉĂƌĞŶƚůǇ͕ŵŝZͲϭϱϱĐĂŶŚĂǀĞŽƉƉŽƐŝƚĞĞīĞĐƚƐŝŶŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ͕ďĞŝŶŐĞŝƚŚĞƌƉƌŽͲŽƌĂŶƟͲ ŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌǇ;&ŝŐƵƌĞϯͿ͘

&ŝŐƵƌĞϯ͘dŚĞŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌǇŵŝZͲϭϱϱŝŶǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ͘DŝZͲϭϱϱŝƐĐŽͲĞǆƉƌĞƐƐĞĚǁŝƚŚdϭZŝŶ,hsƐĂŶĚ^DƐĂŶĚŝŶŚŝďŝƚƐ

ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨdϭZŝŶƚŚĞƐĞĐĞůůƐ͘d^ϭƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĨĂĐƚŽƌŝƐĂůƐŽƚĂƌŐĞƚĞĚďǇŵŝZͲϭϱϱŝŶ,hsƐ͘sŝĂƚŚĞƐĞƚĂƌŐĞƚƐ͕ŵŝZͲϭϱϱ

ĂīĞĐƚƐĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘/ŶĂĚĚŝƟŽŶ͕ŵŝZͲϭϱϱŚĂƐďĞĞŶĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚƚŽĂīĞĐƚĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘dŚŝƐĞīĞĐƚŝƐŵĞĚŝĂƚĞĚďǇŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨ

^K^ϭŝŶŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ͕ƌĞƐƵůƟŶŐŝŶƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨƉƌŽĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶŝĐĐǇƚŽŬŝŶĞƐ͘DŝZͲϭϱϱŝŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐƉůĂƋƵĞƐŝƐƉƌĞĚŽŵŝŶĂŶƚůǇ

ĞǆƉƌĞƐƐĞĚŝŶ;ƉƌŽͲŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌǇͿŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ͕ǁŚĞƌĞŝƚƐƵƉƉƌĞƐƐĞƐƚŚĞƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĨĂĐƚŽƌ>ϲ͘/ŶĂĚĚŝƟŽŶ͕ ŵŝZͲϭϱϱƚĂƌŐĞƚƐ

,D'ϭ͕ŝŶĐƌĞĂƐŝŶŐŽǆ>>ƵƉƚĂŬĞďǇŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ͘DŝZͲϭϱϱƌĞĚƵĐĞƐŵĂƚƌŝǆŵĞƚĂůůŽƉƌŽƚĞŝŶĂƐĞƐDDWͲϭĂŶĚDDWͲϯ͕ǁŚŝĐŚĐŽƵůĚ

ƌĞĚƵĐĞŵĂƚƌŝǆĚĞŐƌĂĚĂƟŽŶĂŶĚƉƌŽŐƌĞƐƐŝŽŶŽĨĂŶĞƵƌǇƐŵĨŽƌŵĂƟŽŶ͘ƌƌŽǁƐŝŶĚŝĐĂƚĞƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶ͘ĂƉƉĞĚůŝŶĞƐŝŶĚŝĐĂƚĞŝŶŚŝďŝƟŽŶ͘

dŚĞĚĂƐŚĞĚůŝŶĞŝŶĚŝĐĂƚĞƐƉŽƐƐŝďůĞŝŶƚĞƌĂĐƟŽŶƐƚŚĂƚŚĂǀĞŶŽƚďĞĞŶĐŽŶĮƌŵĞĚǇĞƚ͘;,hsͿ͖;ŚƵŵĂŶƵŵďŝůŝĐĂůǀĞŶŽƵƐͿĞŶĚŽƚŚĞůŝĂů

ĐĞůů͕^D͖ƐŵŽŽƚŚŵƵƐĐůĞĐĞůů͘&ŽƌĨƵůůƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞŶĂŵĞƐ͕ƐĞĞdĂďůĞϭ͘

(14)

2

Aneurysm

DŝZͲϭϱϱŝƐƐŝŐŶŝĮĐĂŶƚůǇƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚŝŶƟƐƐƵĞ^ϯϮ͘,ŽǁĞǀĞƌ͕ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϭϱϱǁĂƐůŽǁĞƌŝŶ

ƉůĂƐŵĂŽĨƉĂƟĞŶƚƐǁŝƚŚĐŽŵƉĂƌĞĚƚŽƉůĂƐŵĂůĞǀĞůƐŽĨŚĞĂůƚŚǇĐŽŶƚƌŽůƐĄŶĚŽĨƉĂƟĞŶƚƐǁŝƚŚ^ϯϮ. /ŶŵŽĚĞůƐĨŽƌƌŚĞƵŵĂƚŽŝĚĂƌƚŚƌŝƟƐ͕ŽǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϭϱϱůĞĚƚŽĚŽǁŶƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨDDWϭĂŶĚ

DDWϯ^ϰϵ͘dŚŝƐƐƵŐŐĞƐƚƐƚŚĂƚŽǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϭϱϱŝŶŵĂǇĨƵŶĐƟŽŶĂƐĂŶĞŶĚŽŐĞŶŽƵƐƌĞƐĐƵĞ

ŵĞĐŚĂŶŝƐŵƚŚĂƚŝŶŚŝďŝƚƐŵĂƚƌŝǆĚĞŐƌĂĚĂƟŽŶĂŶĚƉƌŽŐƌĞƐƐŝŽŶŽĨĂŶĞƵƌǇƐŵĨŽƌŵĂƟŽŶ^ϰϵ.

miR-17-92 cluster

dŚĞŵŝZͲϭϳͲϵϮŐĞŶĞĐůƵƐƚĞƌŝƐůŽĐĂƚĞĚǁŝƚŚŝŶŝŶƚƌŽŶϯŽĨƚŚĞϭϯŽƌĨϮϱŐĞŶĞŽŶŚƵŵĂŶĐŚƌŽŵŽƐŽŵĞ

ϭϯ ĂŶĚ ĞŶĐŽĚĞƐ Ɛŝǆ ŝŶĚŝǀŝĚƵĂů ŵŝĐƌŽZEƐ͕ ŶĂŵĞůǇ ŵŝZͲϭϳ͕ ŵŝZͲϭϴĂ͕ ŵŝZͲϭϵĂ͕ ŵŝZͲϮϬĂ͕ ŵŝZͲϭϵďͲϭ

ĂŶĚŵŝZͲϵϮĂ^ϱϬ;&ŝŐƵƌĞϰͿ͘ZĞĐĞŶƚůǇ͕ŝƚǁĂƐƐŚŽǁŶƚŚĂƚĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨƚŚĞŵŝZͲϭϳͲϵϮĐůƵƐƚĞƌŝŶƐŝƐ

ƐƟŵƵůĂƚĞĚďǇs'&͕ǀŝĂĂĐƟǀĂƟŽŶŽĨƚŚĞƌŬͬůŬϭƉĂƚŚǁĂǇ^ϱϭ͘hƉŽŶƐƟŵƵůĂƟŽŶ͕ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲ ϭϳͲϵϮ ĐŽŶƚƌŝďƵƚĞĚ ƚŽ ĞŶĚŽƚŚĞůŝĂů ƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ ĂŶĚ ĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐ ƐƉƌŽƵƟŶŐ in vitro ĂŶĚ ƉŚǇƐŝŽůŽŐŝĐĂů

ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐin vivo^ϱϭ.

/ŶϮϬϬϵ͕ŽŶĂƵĞƌet al.ƐŚŽǁĞĚƚŚĂƚŵŝZͲϵϮĂŝƐŚŝŐŚůǇĞǆƉƌĞƐƐĞĚŝŶŚƵŵĂŶƐĂŶĚŽǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨ

ŵŝZͲϵϮĂŝŶƐďůŽĐŬĞĚƐƉƌŽƵƟŶŐŝŶĂƚŚƌĞĞͲĚŝŵĞŶƐŝŽŶĂůĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐŵŽĚĞů͘In vivoŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲ ϵϮĂŝŶĐƌĞĂƐĞĚƚŚĞŶƵŵďĞƌŽĨƉĞƌĨƵƐĞĚǀĞƐƐĞůƐŝŶŵĂƚƌŝŐĞůƉůƵŐƐĂŶĚŝŵƉƌŽǀĞĚďůŽŽĚŇŽǁƌĞĐŽǀĞƌǇ

ĂŌĞƌŚŝŶĚůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂ^ϱϮ͘/d'ϱǁĂƐŝĚĞŶƟĮĞĚĂƐĂĚŝƌĞĐƚƚĂƌŐĞƚŽĨŵŝZͲϵϮĂ^ϱϮ͘dŽĞůƵĐŝĚĂƚĞƚŚĞƐƉĞĐŝĮĐ

ĨƵŶĐƟŽŶŽĨƚŚĞŽƚŚĞƌŵĞŵďĞƌƐŽĨƚŚĞŵŝZͲϭϳͲϵϮĐůƵƐƚĞƌŝŶĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ŽĞďĞůĞet al.ŽǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐĞĚ

ŽƌďůŽĐŬĞĚŝŶĚŝǀŝĚƵĂůŵĞŵďĞƌƐŽĨƚŚĞĐůƵƐƚĞƌďŽƚŚin vitroĂŶĚin vivo^ϱϯ. In vitroŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨĂůůŵŝZͲϭϳͲ ϵϮŵĞŵďĞƌƐ͕ĞǆĐĞƉƚŵŝZͲϭϵ͕ƌĞƐƵůƚĞĚŝŶŝŶĐƌĞĂƐĞĚƐƉƌŽƵƟŶŐŽĨƐƉŚĞƌŽŝĚƐ^ϱϯ͘ŽŵďŝŶĞĚŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨ

ŵŝZͲϭϳĂŶĚŵŝZͲϮϬĂǁĂƐƐŚŽǁŶƚŽƉƌŽŵŽƚĞĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐŝŶŵĂƚƌŝŐĞůƉůƵŐƐin vivo, ǁŚĞƌĞĂƐŝŶŚŝďŝƟŽŶ

ŽĨŽƚŚĞƌŵĞŵďĞƌƐƐŚŽǁĞĚƚƌĞŶĚƐďƵƚŶŽƐŝŐŶŝĮĐĂŶƚĞīĞĐƚƐŽŶĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ^ϱϯ͘ǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨ:<ϭǁĂƐ

ƌĞĚƵĐĞĚĂƚŵZEĂŶĚƉƌŽƚĞŝŶůĞǀĞůƵƉŽŶŵŝZͲϭϳŽǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶĂŶĚŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨ:<ϭƵƐŝŶŐƐŝZEƐ

ǁĂƐƐŚŽǁŶƚŽƌĞĚƵĐĞin vitroĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘hƐŝŶŐůƵĐŝĨĞƌĂƐĞĂƐƐĂǇƐ͕:<ϭǁĂƐĐŽŶĮƌŵĞĚĂƐĂĚŝƌĞĐƚ

(15)

ϰϬ

Atherosclerosis

^ĞǀĞƌĂůƐƚƵĚŝĞƐƐŚŽǁĞĚƚŚĂƚŵŝZͲϭϳͲϵϮĐůƵƐƚĞƌŵĞŵďĞƌƐĂƌĞƌĞŐƵůĂƚĞĚďǇĐŚĂŶŐĞƐŝŶƐŚĞĂƌƐƚƌĞƐƐ^ϱϲ͕

ϱϳ͘hƉƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϵĂďǇůĂŵŝŶĂƌƐŚĞĂƌƐƚƌĞƐƐŚĂƐĂŶĂŶƟƉƌŽůŝĨĞƌĂƟǀĞĞīĞĐƚŽŶƐǀŝĂƚĂƌŐĞƟŶŐ

ŽĨǇĐůŝŶϭ^ϱϳ͘DŝZͲϵϮĂĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶǁĂƐƌĞĚƵĐĞĚŝŶ,hsƐƚŚĂƚǁĞƌĞƐƵďũĞĐƚĞĚƚŽĂƚŚĞƌŽƉƌŽƚĞĐƟǀĞ

ůĂŵŝŶĂƌ ƐŚĞĂƌ ƐƚƌĞƐƐ͕ ůĞĂĚŝŶŐ ƚŽ ƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶ ŽĨ <>&Ϯ^ϱϴ͘ ǆƉƌĞƐƐŝŽŶ ŽĨ <>&Ϯ ƚĂƌŐĞƚƐ ĞEK^ ĂŶĚ

ƚŚƌŽŵďŽŵŽĚƵůŝŶǁĞƌĞĚĞĐƌĞĂƐĞĚƵƉŽŶŵŝZͲϵϮĂŽǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ^ϱϴ.

DŝĐƌŽZEĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶƉƌŽĮůŝŶŐŝŶ,hsƐƌĞǀĞĂůĞĚƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨŵŝZͲϵϮĂƵƉŽŶůŽǁƐŚĞĂƌƐƚƌĞƐƐ

ĐŽŶĚŝƟŽŶƐĂŶĚƚŚĞƉƌĞƐĞŶĐĞŽĨŽǆ>>^ϱϵ͘ĐĐŽƌĚŝŶŐůǇ͕ŵŝZͲϵϮĂĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶǁĂƐŚŝŐŚĞƌŝŶƚŚĞǀĂƐĐƵůĂƚƵƌĞ

ŽĨďŽƚŚŵŝĐĞĂŶĚŚƵŵĂŶƐŝŶĂƚŚĞƌŽƉƌŽŶĞƌĞŐŝŽŶƐǁŝƚŚůŽǁƐŚĞĂƌƐƚƌĞƐƐ^ϱϵ͘DŝZͲϵϮĂŝŶŚŝďŝƟŽŶƌĞĚƵĐĞĚ

ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĨŽƌŵĂƟŽŶŝŶŚǇƉĞƌĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĞŵŝĐ>>Z^ͲͬͲŵŝĐĞ͘ǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞƐ<ůĨϮĂŶĚ

<ůĨϰǁĂƐŝŶĐƌĞĂƐĞĚƵƉŽŶĂŶƟͲŵŝZͲϵϮĂƚƌĞĂƚŵĞŶƚ͘dŚĞĂƵƚŚŽƌƐŝĚĞŶƟĮĞĚ^K^ϱĂƐĂŶŽǀĞůƚĂƌŐĞƚŽĨ

ŵŝZͲϵϮĂ͕ǁŚŝĐŚŝƐŝŶǀŽůǀĞĚŝŶƚŚĞƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůŝŶŇĂŵŵĂƟŽŶ^ϱϴ͘&ƵƌƚŚĞƌŵŽƌĞ͕ĐŝƌĐƵůĂƟŶŐ

/DͲϭůĞǀĞůƐǁĞƌĞƌĞĚƵĐĞĚŝŶĂŶƟͲŵŝZͲϵϮĂƚƌĞĂƚĞĚĂŶŝŵĂůƐ͘dŚĞƐĞƌĞƐƵůƚƐƐƵŐŐĞƐƚƚŚĂƚƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶ

ŽĨŵŝZͲϵϮĂďǇŽǆ>>ŝŶĂƚŚĞƌŽƉƌŽŶĞƌĞŐŝŽŶƐƉƌŽŵŽƚĞƐĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĚǇƐĨƵŶĐƟŽŶĂŶĚĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ

ĨŽƌŵĂƟŽŶ^ϱϵ.

/ŶƚĞƌĞƐƟŶŐůǇ͕ŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϵϮĂŝŶƌĂƚƐƌĞĚƵĐĞĚŶĞŽŝŶƟŵĂĨŽƌŵĂƟŽŶŝŶĐĂƌŽƟĚĂƌƚĞƌŝĞƐĂŌĞƌǀĂƐĐƵůĂƌ

ŝŶũƵƌǇ^ϲϬ͘DŝZͲϵϮĂŝŶŚŝďŝƟŽŶŝŶĐƌĞĂƐĞĚƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶĂŶĚŵŝŐƌĂƟŽŶ͕ŝŵƉƌŽǀŝŶŐƌĞĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůŝǌĂƟŽŶ

ĂŌĞƌ ďĂůůŽŽŶ ŝŶũƵƌǇ Žƌ ĂƌƚĞƌŝĂů ƐƚĞŶƟŶŐ͘ ǆƉƌĞƐƐŝŽŶ ŽĨ <>&ϰ ĂŶĚ D<< ǁĂƐ ƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚ ďǇ ŵŝZͲϵϮĂ

ŝŶŚŝďŝƟŽŶ^ϲϬ͘DŝZͲϵϮĂŝƐ ĂƉƌŽŵŝƐŝŶŐƚŚĞƌĂƉĞƵƟĐƚĂƌŐĞƚƚŽƌĞĚƵĐĞĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ ĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚĂŶĚ

ƉŽƐƚͲŝŶƚĞƌǀĞŶƟŽŶĂůƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐ͘

Aneurysm

dǁŽŵĞŵďĞƌƐŽĨƚŚĞϭϳͲϵϮĐůƵƐƚĞƌ͕ŵŝZͲϮϬĂĂŶĚŵŝZͲϵϮĂ͕ǁĞƌĞƐŝŐŶŝĮĐĂŶƚůǇƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚŝŶƐŽĨ

ƟƐƐƵĞ͕ďƵƚĂĐĂƵƐĂƟǀĞƌŽůĞŚĂƐǇĞƚƚŽďĞĐŽŶĮƌŵĞĚ^ϯϮ.

(16)

2

Figure 4. The role of the miR-17-92 cluster in vascular remodelling. DŝZͲϭϳͲϵϮ ĐůƵƐƚĞƌ ŵĞŵďĞƌƐ ƌĞŐƵůĂƚĞ ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ǀŝĂ

ƐƵƉƉƌĞƐƐŝŽŶ ŽĨ ƐĞǀĞƌĂů ƚĂƌŐĞƚ ŐĞŶĞƐ͘ DŝZͲϭϳ ƌĞĚƵĐĞƐ ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ ŽĨ :<ϭ͘ /d'ϱ ŝƐ ƚĂƌŐĞƚĞĚ ďǇ ŵŝZͲϵϮĂ͘ /Ŷ ĂĚĚŝƟŽŶ͕ ŵŝZͲϵϮĂ

ƚĂƌŐĞƚƐ<>&Ϯ͕<>&ϰĂŶĚ^K^ϱ͕ƉƌŽŵŽƟŶŐĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĨŽƌŵĂƟŽŶ͘WƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶĂŶĚŵŝŐƌĂƟŽŶŽĨĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĐĞůůƐŝƐƌĞŐƵůĂƚĞĚ

ďǇƚĂƌŐĞƟŶŐŽĨD<<ϰĂŶĚ<>&ϰďǇŵŝZͲϵϮĂ͘DŝZͲϭϵĂŚĂƐĂŶĂŶƟƉƌŽůŝĨĞƌĂƟǀĞĞīĞĐƚŝŶƐǀŝĂƐƵƉƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨǇĐůŝŶϭ͘KƚŚĞƌƚĂƌŐĞƚ

ŐĞŶĞƐŽĨŵŝZͲϭϵĂŝŶĐůƵĚĞ&ϰĂŶĚ>ZWϲ͕ƌĞŐƵůĂƚŽƌƐŽĨtEdƐŝŐŶĂůůŝŶŐ͘dĂƌŐĞƟŶŐŽĨƚŚĞƐĞŐĞŶĞƐďǇŵŝZͲϭϵĂĂīĞĐƚƐĐŽůůĂƚĞƌĂůĂƌƚĞƌǇ

ĨŽƌŵĂƟŽŶĂŶĚďůŽŽĚŇŽǁƌĞĐŽǀĞƌǇĂŌĞƌŝƐĐŚĞŵŝĂ͘ƌƌŽǁƐŝŶĚŝĐĂƚĞƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶ͘ĂƉƉĞĚůŝŶĞƐŝŶĚŝĐĂƚĞŝŶŚŝďŝƟŽŶ͖͘ĞŶĚŽƚŚĞůŝĂů

ĐĞůů͘&ŽƌĨƵůůƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞŶĂŵĞƐ͕ƐĞĞdĂďůĞϭ͘

ŵŝZͲϮϯͬϮϰͬϮϳĨĂŵŝůǇ

miR-17-92 cluster

miR-17, miR-20a, miR-18a

miR-19a, miR-19b miR-92a

JAK1 Cyclin D1

ITGA5 KLF2 KLF4 SOCS5 HDAC9

Endothelial cells

Smooth muscle cells

FZD4 LRP6

MKK4 KLF4 EC proliferation

EC migration

atherosclerosis/

restenosis angiogenesis

arteriogenesis

(17)

ϰϮ

<ŶŽĐŬĚŽǁŶ ŽĨ ŵŝZͲϮϯĂͬď ĂŶĚ ŵŝZͲϮϳĂͬď ĚĞĐƌĞĂƐĞĚ in vitro ƐƉƌŽƵƟŶŐ ĂŶĚ ex vivo ĂŽƌƟĐ ƌŝŶŐ

ƐƉƌŽƵƟŶŐ^ϲϮ͘ ŶƟͲĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐ ŐĞŶĞƐ ^Dϲ͕ ^Dϲ ĂŶĚ ^WZKhdzϮ ĂƌĞ ƚĂƌŐĞƚĞĚ ďǇ ŵŝZͲϮϯĂͬď

ĂŶĚ ŵŝZͲϮϳĂͬď ͕ ĂƐ ƐŚŽǁŶ ďǇ ůƵĐŝĨĞƌĂƐĞ ŐĞŶĞ ƌĞƉŽƌƚĞƌ ĂƐƐĂǇƐ^ϲϮ͘ hƌďŝĐŚ et al. ƐŚŽǁĞĚ ƚŚĂƚ ŝn vivo ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐǁĂƐĂůƐŽĂīĞĐƚĞĚƵƉŽŶŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϮϳĂͬď͘ŶƟͲŵŝZͲϮϳĂͬďƚƌĞĂƚŵĞŶƚĚĞĐƌĞĂƐĞĚ

ƚŚĞ ŶƵŵďĞƌ ŽĨ ƉĞƌĨƵƐĞĚ ǀĞƐƐĞůƐ ŝŶ ŵĂƚƌŝŐĞů ƉůƵŐƐ^ϲϲ͘ DŽƌĞŽǀĞƌ͕ ŝŶŚŝďŝƟŽŶ ŽĨ ŵŝZͲϮϳĂͬď ŝŵƉĂŝƌĞĚ

ǀĂƐĐƵůŽŐĞŶĞƐŝƐŝŶǌĞďƌĂĮƐŚĞŵďƌǇŽƐ͘In vitroĞǆƉĞƌŝŵĞŶƚƐƐŚŽǁĞĚĂĚĚŝƟŽŶĂůƚĂƌŐĞƟŶŐŽĨ^DϯďƵƚ

in vivo, ŽŶůǇ^DϲǁĂƐĂƚĂƌŐĞƚŽĨŵŝZͲϮϳĂͬď^ϲϲ͘zŽƵŶŐet al. ƐŚŽǁĞĚƚŚĂƚŵŝZͲϮϳĂĂůƐŽƚĂƌŐĞƚƐsͲ ĐĂĚŚĞƌŝŶ͕ďŽƚŚin vitroĂŶĚin vivo^ϲϳ.

DŝZͲϮϰŝƐĞǆƉƌĞƐƐĞĚŝŶĐĂƌĚŝĂĐƐ^ϲϴ͘dŚĞĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϮϰŝƐŝŶĚƵĐĞĚƵƉŽŶŚǇƉŽǆŝĂĂŶĚŵŝZͲϮϰ

ŝƐĞŶƌŝĐŚĞĚŝŶĐĂƌĚŝĂĐƐĐŽŵƉĂƌĞĚƚŽŽƚŚĞƌĐĂƌĚŝĂĐĐĞůůƐĂŌĞƌĐĂƌĚŝĂĐŝƐĐŚĞŵŝĂ^ϲϴ͕ϲϵ͘KǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ

ŽĨ ŵŝZͲϮϰ ŝŶ ,hsƐ ŝŶĐƌĞĂƐĞĚ ĂƉŽƉƚŽƐŝƐ ĂŶĚ ŝŵƉĂŝƌĞĚ ƚƵďĞ ĨŽƌŵĂƟŽŶ͕ ƐƉƌŽƵƟŶŐ͕ ŵŝŐƌĂƟŽŶ ĂŶĚ

ƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ^ϲϴ͘ dŚĞ ĞŶĚŽƚŚĞůŝƵŵͲĞŶƌŝĐŚĞĚ ƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶ ĨĂĐƚŽƌƐ 'dϮ ĂŶĚ W<ϰ ǁĞƌĞ ǀĂůŝĚĂƚĞĚ ĂƐ

ƚĂƌŐĞƚƐŽĨŵŝZͲϮϰ͘/ŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϮϰŝŶĐƌĞĂƐĞĚǀĂƐĐƵůĂƌŝƚǇĂŶĚĚĞĐƌĞĂƐĞĚŵǇŽĐĂƌĚŝĂůŝŶĨĂƌĐƚƐŝǌĞ

ŝŶŵŝĐĞ^ϲϴ͘ŶŽƚŚĞƌĐŽŶĮƌŵĞĚƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞĨŽƌŵŝZͲϮϰŝŶƐŝƐE^dϭ͘/ŶŚŝďŝƟŽŶŽĨE^dϭďǇŵŝZͲ ϮϰĚĞĐƌĞĂƐĞĚƐƵůĨĂƟŽŶŽĨ,^W'ƐĂŶĚƐƵďƐĞƋƵĞŶƚůǇƚŚĞďŝŶĚŝŶŐĂĸŶŝƚǇŽĨ,^W'ƐĨŽƌs'&͘DŝZͲϮϰ

ŵĞĚŝĂƚĞĚƐƵƉƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨE^dϭůŽǁĞƌĞĚs'&ZϮůĞǀĞůƐĂŶĚƌĞĚƵĐĞĚƌĞƐƉŽŶƐŝǀĞŶĞƐƐƚŽs'&⁷⁰. sŝĂƚŚĞƐĞŵĞĐŚĂŶŝƐŵƐ͕ŵŝZͲϮϰĂīĞĐƚƐƌĞƐƉŽŶƐŝǀĞŶĞƐƐƚŽs'&͘DŝZͲϮϰĂůƐŽĂīĞĐƚĞĚĂƉŽƉƚŽƐŝƐ͕

ƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶĂŶĚĨƵŶĐƟŽŶŽĨ^DƐ͕ƉĂƌƟĂůůǇƚŚƌŽƵŐŚ,DKyϭ^ϲϵ.

Atherosclerosis, restenosis and lipid metabolism

dŚĞĞīĞĐƚƐŽĨŵŝZͲϮϰĂŶĚϮϳďĂƐĚĞƐĐƌŝďĞĚŚĞƌĞĂƌĞƉƌĞĚŽŵŝŶĂŶƚůǇŽŶůŝƉŝĚŵĞƚĂďŽůŝƐŵ͕ǁŚŝĐŚǁŝůů

ƵůƟŵĂƚĞůǇĂůƐŽŝŶŇƵĞŶĐĞĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ^ϳϭͲϳϯ͘DŝZͲϮϰĂŶĚŵŝZͲϮϳďĂƌĞƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚŝŶůŝǀĞƌƐŽĨŚŝŐŚͲĨĂƚ

ĚŝĞƚ;,&ͿĨĞĚŵŝĐĞ^{71, 72}͘/ŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϮϰŝŶ,&ĨĞĚŵŝĐĞƌĞĚƵĐĞĚƉůĂƐŵĂƚƌŝŐůǇĐĞƌŝĚĞůĞǀĞůƐĂŶĚ

ůŝƉŝĚĂĐĐƵŵƵůĂƟŽŶŝŶƚŚĞůŝǀĞƌ͕ďƵƚĚŝĚŶŽƚĂīĞĐƚƉůĂƐŵĂĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůůĞǀĞůƐ͘dŚŝƐĞīĞĐƚǁĂƐŵĞĚŝĂƚĞĚ

ǀŝĂŝŶĐƌĞĂƐĞĚĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨ/E^/'ϭŝŶƚŚĞůŝǀĞƌĂŶĚƐƵďƐĞƋƵĞŶƚĚĞĐƌĞĂƐĞĚĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨ^ZWƐĂŶĚ

ŽƚŚĞƌůŝƉŽŐĞŶŝĐŐĞŶĞƐ⁷².

DŝZͲϮϳďƚĂƌŐĞƚƐƐĞǀĞƌĂůĂĚĚŝƟŽŶĂůůŝƉŽŐĞŶŝĐŐĞŶĞƐ͕ŝŶĐůƵĚŝŶŐWWZɶ͕E'Wd>ϯĂŶĚ'WD͘,ŽǁĞǀĞƌ͕

ĚŝƌĞĐƚ ďŝŶĚŝŶŐ ŽĨ ŵŝZͲϮϳď ƚŽ ƚŚĞ ϯ͛hdZ ŽĨ ƚŚĞ ŵZEƐ ŽĨ ƚŚĞƐĞ ŐĞŶĞƐ ǁĂƐ ŶŽƚ ĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚ⁷¹. hƉƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨŚĞƉĂƟĐŵŝZͲϮϳďǁĂƐŽďƐĞƌǀĞĚŝŶ,&ƉŽ^ͲͬͲŵŝĐĞĂŶĚĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϮϳďƚĂƌŐĞƚ

ŐĞŶĞƐ ŶŐƉƚůϯ ĂŶĚ 'ƉĂŵ ǁĂƐ ƌĞĚƵĐĞĚ⁷¹͘ ǆƉĞƌŝŵĞŶƚƐ ƉĞƌĨŽƌŵĞĚ ŝŶ ƚŚĞ d,WͲϭ ŚƵŵĂŶ ŵŽŶŽĐǇƚĞ

ĐĞůůůŝŶĞƐŚŽǁĞĚƚŚĂƚŵŝZͲϮϳĂͬďƌĞŐƵůĂƚĞƐĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůŚŽŵĞŽƐƚĂƐŝƐ^ϳϯ͘DŝZͲϮϳĂͬďƚĂƌŐĞƟŶŐŽĨϭ

ĂīĞĐƚĞĚĂƉŽϭͲŵĞĚŝĂƚĞĚĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĞŋƵǆŝŶŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ^ϳϯ͘>ŝƉŝĚƵƉƚĂŬĞǁĂƐĂůƐŽĂīĞĐƚĞĚďǇŵŝZͲ ϮϳĂͬď͕ĂƐǁĂƐƐŚŽǁŶďǇƌĞĚƵĐĞĚŽǆ>>ďŝŶĚŝŶŐƚŽŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐĂŌĞƌŵŝZͲϮϳĂͬďŽǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ͘dŚŝƐ

ǁĂƐŵĞĚŝĂƚĞĚďǇŵŝZͲϮϳĂͬďƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞ>W>͘&ŝŶĂůůǇ͕ĐŚŽůĞƐƚĞƌǇůͲĞƐƚĞƌĨŽƌŵĂƟŽŶǁĂƐƌĞĚƵĐĞĚďǇŵŝZͲ ϮϳĂͬďǀŝĂƚĂƌŐĞƟŶŐŽĨdϭ^ϳϯ.

dŚĞĐŽŶƚƌŝďƵƟŽŶŽĨŵŝZͲϮϯďƚŽ^DƉŚĞŶŽƚǇƉŝĐƐǁŝƚĐŚŝŶŐƵƉŽŶǀĂƐĐƵůĂƌŝŶũƵƌǇǁĂƐƌĞĐĞŶƚůǇƌĞƉŽƌƚĞĚďǇ

/ĂĐŽŶĞƫet al.^ϳϰ͘ǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϮϯďǁĂƐƌĞĚƵĐĞĚĂŌĞƌĐĂƌŽƟĚŝŶũƵƌǇŝŶƌĂƚƐ͘/ŶĐƌĞĂƐĞĚƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ

ĂŶĚŵŝŐƌĂƟŽŶŽĨ^DƐǁĂƐŽďƐĞƌǀĞĚƵƉŽŶŵŝZͲϮϯďŝŶŚŝďŝƟŽŶ͕ǁŚĞƌĞĂƐŽǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϮϯďůĞĚ

ƚŽƌĞĚƵĐĞĚƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶĂŶĚŵŝŐƌĂƟŽŶ^ϳϰ͘KǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϮϯďƌĞƐƵůƚĞĚŝŶĚĞĐƌĞĂƐĞĚŶĞŽŝŶƟŵĂ

ĨŽƌŵĂƟŽŶŝŶƌĂƚĐĂƌŽƟĚĂƌƚĞƌŝĞƐĂŌĞƌďĂůůŽŽŶĂŶŐŝŽƉůĂƐƚǇĂŶĚƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞƐƵW͕^DϯĂŶĚ&KyKϰ

(18)

2

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Aneurysm

DŝĐƌŽZE ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ ƉƌŽĮůŝŶŐ ƌĞǀĞĂůĞĚ ĚĞĐƌĞĂƐĞĚ ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ ŽĨ ƚŚĞ ŵŝZͲϮϯďͬŵŝZͲϮϰͲϭ ĐůƵƐƚĞƌ͕ ŝŶ

ŚƵŵĂŶŝŶƚƌĂĐƌĂŶŝĂůĂŶĞƵƌǇƐŵĂů;/ͿƐĂŵƉůĞƐ^ϳϱ͕ϳϲ͘/ŶŵƵƌŝŶĞŵŽĚĞůƐ͕ƚŚĞŵŝZͲϮϯďͲϮϳďͲϮϰĐůƵƐƚĞƌ

ŝƐĂůƐŽĚŽǁŶƌĞŐƵůĂƚĞĚ͘DŝZͲϮϰǁĂƐŵŽƐƚƐŝŐŶŝĮĐĂŶƚůǇĚŽǁŶƌĞŐƵůĂƚĞĚ͕ůĞĂĚŝŶŐƚŽƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨƚŚĞ

ŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌǇƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞ,/ϯ>ϭ⁷⁷. In situŚǇďƌŝĚŝǌĂƟŽŶƐŚŽǁĞĚůŽĐĂůŝǌĂƟŽŶŽĨŵŝZͲϮϰŝŶĂĚǀĞŶƟƟĂů

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ŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ͕ ǁŚĞƌĞ ,/ϯ>ϭ ĚƌŝǀĞƐ ŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌǇ ŐĞŶĞ ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ^ϳϴ͘ DŽĚƵůĂƟŽŶ ŽĨ ŵŝZͲϮϰ ůĞǀĞůƐ

ŝŶ ŵƵƌŝŶĞ ŵŽĚĞůƐ ƵƐŝŶŐ ĞŝƚŚĞƌ ƉƌĞͲŵŝZͲϮϰ Žƌ ĂŶƟͲŵŝZͲϮϰ ůĞĚ ƚŽ ƌĞĚƵĐĞĚ ĂŶĚ ŝŶĐƌĞĂƐĞĚ

ĨŽƌŵĂƟŽŶƌĞƐƉĞĐƟǀĞůǇ⁷⁷͘/ŶƐƵŵŵĂƌǇ͕ŵŝZͲϮϯďͲϮϰͲϮϳďĨĂŵŝůǇŵĞŵďĞƌƐĂƌĞĚŽǁŶƌĞŐƵůĂƚĞĚŝŶŚƵŵĂŶ

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ĐŽŶƚƌŝďƵƟŶŐƚŽĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚ^ϳϱͲϳϳ͘dŚŝƐƌĞŶĚĞƌƐƚŚĞŵŝZͲϮϯͲϮϰͲϮϳĨĂŵŝůǇĂƉŽƚĞŶƟĂůůǇŝŶƚĞƌĞƐƟŶŐ

ƚŚĞƌĂƉĞƵƟĐƚĂƌŐĞƚĨŽƌƚƌĞĂƚŵĞŶƚ͘

(19)

ϰϰ

miR-143/145 cluster

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ĂĚĞŶŽǀŝƌĂůǀĞĐƚŽƌƌĞĚƵĐĞĚŶĞŽŝŶƟŵĂĨŽƌŵĂƟŽŶƵƉŽŶďĂůůŽŽŶŝŶũƵƌǇŝŶƌĂƚĐĂƌŽƟĚƐ^ϳϵ͕ϴϬ͘DŝZͲϭϰϱŝƐ

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ŵŝZͲϭϰϯĂŶĚŵŝZͲϭϰϱĂƌĞŽďƐĞƌǀĞĚ^ϴϮ͘hƉƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨƚŚĞƐĞŵŝĐƌŽZEƐĂůůŽǁƐĨŽƌ^DĚŝīĞƌĞŶƟĂƟŽŶ͕

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ŝŵƉŽƌƚĂŶƚƌŽůĞŝŶƚŚĞĚŝīĞƌĞŶƟĂƟŽŶĂŶĚƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶŽĨ^DƐ͘ŝīĞƌĞŶƟĂƟŽŶŽĨ^DƐŝƐŝŶĚƵĐĞĚǀŝĂ

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ĨƵƌƚŚĞƌƉƌŽŵŽƟŶŐĚŝīĞƌĞŶƟĂƟŽŶŽĨ^DƐ^ϴϯ͕ϴϰ;&ŝŐƵƌĞϲ͕ƵƉƉĞƌƉĂŶĞůͿ͘ǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨĐŽŶƚƌĂĐƟůĞŐĞŶĞƐ

ŝƐŵĞĚŝĂƚĞĚǀŝĂ;ĂŵŽŶŐƐƚŽƚŚĞƌĨĂĐƚŽƌƐͿ<>&ϰ͕ǁŚŝĐŚŝƐĚŝƌĞĐƚůǇƚĂƌŐĞƚĞĚďǇŵŝZͲϭϰϱ^ϴϮ͘/ŶŚŝďŝƟŽŶŽĨ

<>&ϰďǇŵŝZͲϭϰϱŝŶĐƌĞĂƐĞƐĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨ^DŵĂƌŬĞƌƐ^ϴϮ͘DŝZͲϭϰϯĐĂŶĚŝƌĞĐƚůǇŝŶŚŝďŝƚƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶŽĨ

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/ŶĂĐĐŽƌĚĂŶĐĞǁŝƚŚƚŚĞƐĞĮŶĚŝŶŐƐ͕ŽĞƩŐĞƌet al.ĚĞƐĐƌŝďĞĚƚŚĂƚŵŝZͲϭϰϯͬϭϰϱĚĞĮĐŝĞŶƚŵŝĐĞŚĂǀĞĂ

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ŚĂƐƉƌŽǀĞŶĞƐƐĞŶƟĂůĨŽƌ^DĨƵŶĐƟŽŶĂŶĚĐŽŶƚƌŽůƐƚŚĞƉŚĞŶŽƚǇƉŝĐƐǁŝƚĐŚŽĨĐŽŶƚƌĂĐƟůĞ^DƐƚŽǁĂƌĚƐ

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DŝZͲϭϰϱŝŶŚŝďŝƚƐƚƵŵŽƵƌĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐǀŝĂƚĂƌŐĞƟŶŐŽĨ/'&ϭ͕ƚŚĞ/Z^ϭƉĂƚŚǁĂǇĂŶĚŝƚƐĚŽǁŶƐƚƌĞĂŵ

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ŵŽůĞĐƵůĞ ŝŶ ƚŚĞ /'&ϭ ƌĞĐĞƉƚŽƌ ƉĂƚŚǁĂǇ ĂŶĚ ƚŚĞƌĞďǇ ƌĞŐƵůĂƚĞƐ ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĂŶĚ ƚƵŵŽƌŝŐĞŶĞƐŝƐ^ϴϴ. /ŶĂĐƟǀĂƟŽŶŽĨ<dďǇŵŝZͲϭϰϯƌĞƐƵůƚĞĚŝŶĚĞĐƌĞĂƐĞĚƉƌŽƚĞŝŶůĞǀĞůƐŽĨ,/&ͲϭɲĂŶĚƌĞĚƵĐĞĚs'&

ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ^ϴϴ͘ /Ŷ ŶĞƵƌŽďůĂƐƚŽŵĂ ƐĂŵƉůĞƐ͕ ŵŝZͲϭϰϱ ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ ǁĂƐ ĂůƐŽ ĚŽǁŶƌĞŐƵůĂƚĞĚ͕ ǁŚŝĐŚ ǁĂƐ

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,/&ͲϮɲ ĂŶĚ ƐƵƉƉƌĞƐƐ ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ ǁŚŝĐŚ ǁĂƐ ĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚ ďǇ ƚƵďĞ ĨŽƌŵĂƟŽŶ ŽĨ ŶĞƵƌŽďůĂƐƚŽŵĂ

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ůƚŚŽƵŐŚƚŚĞƐĞĮŶĚŝŶŐƐƌĞůĂƚĞŵĂŝŶůǇƚŽƉĂƚŚŽůŽŐŝĐĂůĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ŵĂŶǇĨƵŶĚĂŵĞŶƚĂůŵĞĐŚĂŶŝƐŵƐ

ĂƌĞ ƐŚĂƌĞĚ ǁŝƚŚ ƉŚǇƐŝŽůŽŐŝĐĂů ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ ƐƵĐŚ ĂƐ ƌĞĐĞƉƚŽƌ ƐŝŐŶĂůůŝŶŐ ĐĂƐĐĂĚĞƐ ;Ğ͘Ő͘ ,/&ͲϭɲͿ͕

ƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶĂŶĚŵŝŐƌĂƟŽŶŽĨǀĂƐĐƵůĂƌĐĞůůƐĂŶĚƚƵďĞĨŽƌŵĂƟŽŶ^ϵϬ͘/ŶĚĞĞĚ͕tĂŶŐet al.ĨŽƵŶĚƚŚĂƚŵŝZͲ ϭϰϱǁĂƐƚƌĂŶƐŝĞŶƚůǇĚŽǁŶƌĞŐƵůĂƚĞĚin vivoĨŽůůŽǁŝŶŐĐŽƌŽŶĂƌǇĂƌƚĞƌǇŽĐĐůƵƐŝŽŶŝŶŵŝĐĞĂŶĚin vitro ƵƉŽŶŚǇƉŽǆŝĂƚƌĞĂƚŵĞŶƚŽĨĐĂƌĚŝĂĐĮďƌŽďůĂƐƚƐ^ϵϭ͘/ŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϭϰϱŝŶĐƌĞĂƐĞĚŝŶĨĂƌĐƚƐĐĂƌƐŝǌĞĂƚϳ

ĂŶĚϮϴĚĂǇƐĂŌĞƌŵǇŽĐĂƌĚŝĂůŝŶĨĂƌĐƟŽŶŝŶŵŝĐĞ͘,ŽǁĞǀĞƌ͕ƌĞĚƵĐĞĚĚŝīĞƌĞŶƟĂƟŽŶŽĨĐĂƌĚŝĂĐĮďƌŽďůĂƐƚƐ

ƚŽǁĂƌĚƐŵǇŽĮďƌŽďůĂƐƚƐ͕ĂŶĚŶŽƚĚĞĐƌĞĂƐĞĚĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ŵŽƐƚůŝŬĞůǇŵĞĚŝĂƚĞĚƚŚĞƐĞĞīĞĐƚƐ^ϵϭ͘dŚĞ

ĂƵƚŚŽƌƐĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚƚŚĂƚƚƌĂŶƐĨĞĐƟŽŶǁŝƚŚŵŝZͲϭϰϱŝŶĐƌĞĂƐĞĚƚŚĞŶƵŵďĞƌŽĨɲͲ^DƉŽƐŝƟǀĞĐĞůůƐ

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(20)

2

ĂĚŝƌĞĐƚƚĂƌŐĞƚŽĨŵŝZͲϭϰϱ͘dƌĂŶƐĨĞĐƟŽŶǁŝƚŚŵŝZͲϭϰϱĚĞĐƌĞĂƐĞĚĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨ<>&ϱĂŶĚŝŶĐƌĞĂƐĞĚ

DǇŽĐĂƌĚŝŶĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ͘dŚĞƐĞĚĂƚĂƐƵŐŐĞƐƚƚŚĂƚŵŝZͲϭϰϱŵĞĚŝĂƚĞƐĚŝīĞƌĞŶƟĂƟŽŶŽĨĐĂƌĚŝĂĐĮďƌŽďůĂƐƚƐ

ƚŽŵǇŽĮďƌŽďůĂƐƚƐƚŚƌŽƵŐŚƚŚĞ<>&ϱͲDǇŽĐĂƌĚŝŶƉĂƚŚǁĂǇ^ϵϭ.

tŽƌŬ ďǇ ůŝŵĞŶƚ et al. ƐƵŐŐĞƐƚƐ ƚŚĂƚ ŵŝZͲϭϰϯ ĂŶĚ ŵŝZͲϭϰϱ ĂƌĞ ƚƌĂŶƐĨĞƌƌĞĚ ĨƌŽŵ ^DƐ ƚŽ Ɛ ǀŝĂ

ŵĞŵďƌĂŶĞƉƌŽƚƌƵƐŝŽŶƐ^ϵϮ͘d'&ɴŝŶĚƵĐĞƐƚŚĞƚƌĂŶƐĨĞƌŽĨŵŝZͲϭϰϯͬϭϰϱ͕ĂƐŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨĞŝƚŚĞƌƚŚĞd'&ɴ

ƉĂƚŚǁĂǇ Žƌ d'&ɴZϮ ƌĞĚƵĐĞĚ ŵŝZͲϭϰϯͬϭϰϱ ƚƌĂŶƐĨĞƌ ƚŽǁĂƌĚƐ Ɛ^ϵϮ͘ KǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ ŽĨ ŵŝZͲϭϰϯ ĂŶĚ

ŵŝZͲϭϰϱŝŶƐƌĞĚƵĐĞĚƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶĂŶĚƚŚĞĂďŝůŝƚǇƚŽĨŽƌŵĐĂƉŝůůĂƌǇͲůŝŬĞƐƚƌƵĐƚƵƌĞƐŽŶŵĂƚƌŝŐĞů^ϵϮ. dŚĞĂƵƚŚŽƌƐŝĚĞŶƟĮĞĚ,<//ĂŶĚ/d'ɴϴĂƐĚŝƌĞĐƚƚĂƌŐĞƚƐŽĨŵŝZͲϭϰϯͬϭϰϱƚŚĂƚŵŽĚƵůĂƚĞƚŚĞĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐ

ƉŽƚĞŶƟĂůŽĨƐ^ϵϮ;&ŝŐƵƌĞϲͿ͘

Atherosclerosis and restenosis

DŝZͲϭϰϯͬϭϰϱ^ͲͬͲŵŝĐĞĚĞǀĞůŽƉƐƉŽŶƚĂŶĞŽƵƐŶĞŽŝŶƟŵĂůůĞƐŝŽŶƐŝŶƚŚĞĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌŝĞƐĂƚŽůĚĞƌĂŐĞ^ϴϱ.

ŶŐŝŽƚĞŶƐŝŶĐŽŶǀĞƌƟŶŐĞŶǌǇŵĞ;ͿǁĂƐŝĚĞŶƟĮĞĚĂƐĂƚĂƌŐĞƚĨŽƌŵŝZͲϭϰϯͬϭϰϱ͘/ŶĐƌĞĂƐĞĚĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶ

ŽĨŝŶŵŝZͲϭϰϯͬϭϰϱ^ͲͬͲŵŝĐĞƌĞƐƵůƚĞĚŝŶŝŶĐƌĞĂƐĞĚŶŐ//ůĞǀĞůƐ͕ǁŚŝĐŚƐƵďƐĞƋƵĞŶƚůǇĐŽŶƚƌŝďƵƚĞĚƚŽ

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ŝƐŝŶůŝŶĞǁŝƚŚƚŚĞĮŶĚŝŶŐƚŚĂƚŽǀĞƌĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϭϰϱĚĞĐƌĞĂƐĞĚŶĞŽŝŶƟŵĂĨŽƌŵĂƟŽŶŝŶďĂůůŽŽŶ

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ďǇƚŚĞĨĂĐƚƚŚĂƚƚŚĞ^DƐŝŶƚŚĞŝƌŬŶŽĐŬŽƵƚŵŽĚĞůǁĞƌĞĂůƌĞĂĚǇĚĞĮĐŝĞŶƚŝŶŵŝZͲϭϰϱĂƚƚŚĞŽŶƐĞƚ

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ŚŽůĞƐƚĞƌŽů ůŽĂĚŝŶŐ ŽĨ ŵŽƵƐĞ ĂŽƌƟĐ ^DƐ ƌĞƐƵůƚĞĚ ŝŶ ĚŽǁŶƌĞŐƵůĂƟŽŶ ŽĨ ^D ŵĂƌŬĞƌƐ͕ ǁŚĞƌĞĂƐ

ĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞŵĂƌŬĞƌƐǁĂƐŝŶĐƌĞĂƐĞĚ^ϵϱ͘ǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϭϰϯĂŶĚŵŝZͲϭϰϱ͕ĂƐǁĞůůĂƐ

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ŽĨƚŚĞŵŝZͲϭϰϯͬϭϰϱͬ^Z&ͬDǇŽĐĂƌĚŝŶĂǆŝƐ͕ĐĂƵƐĞƐƌĞƉƌŽŐƌĂŵŵŝŶŐŽĨ^DƐƚŽǁĂƌĚƐĂŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞůŝŬĞ

ƉŚĞŶŽƚǇƉĞ^ϵϱ͘DŽǀĞƌŽǀĞƌ͕ƐƚĂƟŶƚƌĞĂƚŵĞŶƚ͕ǁŚŝĐŚŝƐƚŚĞŵŽƐƚĐŽŵŵŽŶĨŽƌŵŽĨĂŶƟͲĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐ

ƚŚĞƌĂƉǇƚŽĚĂǇ͕ŝŶĐƌĞĂƐĞƐĞǆƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝZͲϭϰϯͬϭϰϱŝŶƐ^ϵϲ.