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The handle http://hdl.handle.net/1887/47467 holds various files of this Leiden University dissertation

Author: Welten, S.M.J.

Title: The role of 14q32 microRNAs in vascular remodelling

Issue Date: 2017-03-09

The role of 14q32 microRNAs in vascular remodelling

Sabine Welten

ŽǀĞƌ͗/ŵŵƵŶŽŇƵŽƌĞƐĐĞŶƚƐƚĂŝŶŝŶŐŽĨĂŽƌƟĐƐƉƌŽƵƚƐŝŶŵƵƌŝŶĞĂŽƌƟĐƌŝŶŐĂƐƐĂLJ WƌŝŶƟŶŐ͗ZŝĚĚĞƌƉƌŝŶƚs͕dŚĞEĞƚŚĞƌůĂŶĚƐ

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Sabine Marlies Janine Welten

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Part I

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14q32 microRNAs in vascular remodelling

dŚĞŵƵůƟĨĂĐƚŽƌŝĂůŶĂƚƵƌĞŽĨŵŝĐƌŽZEƐŝŶǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ

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Chapter 1

1

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ƚŽƌĞƐƉŽŶĚƚŽĐĞƌƚĂŝŶƐƟŵƵůŝ͘&ŽƌĞdžĂŵƉůĞ͕ŝĨƚŚĞƌĞŝƐĂŶŝŶĐƌĞĂƐĞŝŶĚĞŵĂŶĚĨŽƌŽdžLJŐĞŶ͕ĐĞƌƚĂŝŶŶĞǁ

ďůŽŽĚǀĞƐƐĞůƐĐĂŶĂƌŝƐĞ͘hŶĨŽƌƚƵŶĂƚĞůLJ͕ďůŽŽĚǀĞƐƐĞůƐĐĂŶĂůƐŽďĞĐŽŵĞĐůŽŐŐĞĚĚƵĞƚŽƚŚĞďƵŝůĚͲƵƉŽĨ

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Vascular remodelling

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ĐĞůůƐĂŶĚƚŚĞƚƵŶŝĐĂĂĚǀĞŶƟƟĂǁŚŝĐŚŝƐƚŚĞŽƵƚĞƌůĂLJĞƌĐŽŶƚĂŝŶŝŶŐĮďƌŽďůĂƐƚƐĂŶĚĞdžƚƌĂĐĞůůƵůĂƌŵĂƚƌŝdž

ƚŚĂƚŝƐƌŝĐŚŝŶĐŽůůĂŐĞŶ͘dŚĞĞŶĚŽƚŚĞůŝƵŵƉůĂLJƐĂƉƌŽŵŝŶĞŶƚƉĂƌƚŝŶǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ͕ĂƐŝƚŝƐůŽĐĂƚĞĚ

Ăƚ ƚŚĞ ŝŶŶĞƌ ůĂLJĞƌ ŽĨ ƚŚĞ ǀĂƐĐƵůĂƚƵƌĞ ĂŶĚ ĐĂƉĂďůĞ ŽĨ ƐĞŶƐŝŶŐ ĐŚĂŶŐĞƐ ŝŶ ďůŽŽĚ ŇŽǁ͕ ŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJ

ŵĞĚŝĂƚŽƌƐ͕ĐLJƚŽŬŝŶĞƐĂŶĚĐŚĞŵŽŬŝŶĞƐ͘ĐƟǀĂƚĞĚĞŶĚŽƚŚĞůŝƵŵĐĂŶƐƵďƐĞƋƵĞŶƚůLJůĞĂĚƚŽĐŚĂŶŐĞƐŝŶ

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Angiogenesis and arteriogenesis

ŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĂŶĚ ĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĂƌĞ ďŽƚŚ ŵĞĐŚĂŶŝƐŵƐ ŽĨ ŶĞŽǀĂƐĐƵůĂƌŝƐĂƟŽŶ ƚŚƌŽƵŐŚ ǁŚŝĐŚ ďůŽŽĚ

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ŽĨĐĂƉŝůůĂƌŝĞƐĨƌŽŵƉƌĞͲĞdžŝƐƟŶŐďůŽŽĚǀĞƐƐĞůƐ͕ĚƌŝǀĞŶďLJŝƐĐŚĞŵŝĐĂŶĚŚLJƉŽdžŝĐƐŝŐŶĂůƐ

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ĮůŽƉŽĚŝĂƚŚĂƚƐĞŶƐĞĐŚĞŵŽƚĂĐƟĐŐƵŝĚĂŶĐĞĐƵĞƐ;ƐƵĐŚĂƐĞƉŚƌŝŶƐĂŶĚƐĞŵĂƉŚŽƌŝŶƐͿ͘^ƚĂůŬĐĞůůƐĨŽůůŽǁŝŶŐ

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ĐĞůůƐǁŝƚŚŽƚŚĞƌĐĂƉŝůůĂƌLJŶĞƚǁŽƌŬƐŝƐĂŝĚĞĚďLJƌĞĐƌƵŝƚĞĚŵLJĞůŽŝĚĐĞůůƐ͕ĂůůŽǁŝŶŐĨŽƌƉĞƌĨƵƐŝŽŶŽĨƚŚĞ

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ĂƐǁĞůůĂƐĂĐĐĞůĞƌĂƚĞĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ

.

12

Figure 1. ƵƌŝŶŐ ŝƐĐŚĞŵŝĂ͕ ƉƌŽͲĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐ ĨĂĐƚŽƌƐ ƐƵĐŚ ĂƐ s'& ĐĂƵƐĞ ǀĂƐĐƵůĂƌ ƉĞƌŵĞĂďŝůŝƚLJ͘ ĞŐƌĂĚĂƟŽŶ ŽĨ ƚŚĞ ďĂƐĞŵĞŶƚ

ŵĞŵďƌĂŶĞŝƐĨŽůůŽǁĞĚďLJůŽŽƐĞŶŝŶŐŽĨĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĐĞůů ;ͿũƵŶĐƟŽŶƐĂŶĚƉĞƌŝĐLJƚĞ;WͿĐŽŶƚĂĐƚ͘EĞdžƚ͕ƟƉĐĞůůƐ;dͿǁŝůůƐƉƌŽƵƚ

ĨƌŽŵƚŚĞĞdžŝƐƟŶŐďůŽŽĚǀĞƐƐĞů;AͿ͘WƌŽƚĞĂƐĞƐĐĂƵƐĞĚĞŐƌĂĚĂƟŽŶŽĨƚŚĞĞdžƚƌĂĐĞůůƵůĂƌŵĂƚƌŝdž͕ƌĞůĞĂƐŝŶŐŐƌŽǁƚŚĨĂĐƚŽƌƐ;ŝŶŐƌĞĞŶͿ

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ƌĞĐƌƵŝƚĞĚŵLJĞůŽŝĚĐĞůůƐ͘;BͿ͘ůŽŽĚĐĂŶŶŽǁŇŽǁƚŚƌŽƵŐŚƚŚĞŶĞŽǀĞƐƐĞů͕ĂůůŽǁŝŶŐĨŽƌƌĞͲĞƐƚĂďůŝƐŚŵĞŶƚŽĨƚŚĞďĂƐĞŵĞŶƚŵĞŵďƌĂŶĞ

ĂŶĚĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĐĞůůũƵŶĐƟŽŶƐ͕ƌĞĐƌƵŝƚŵĞŶƚŽĨƉĞƌŝĐLJƚĞƐĂŶĚŵĂƚƵƌĂƟŽŶŽĨƚŚĞŶĞǁůLJĨŽƌŵĞĚĐĂƉŝůůĂƌLJŶĞƚǁŽƌŬ͘

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ĂƌƚĞƌLJĨŽƌŵĂƟŽŶŝƐĚƌŝǀĞŶďLJĐŚĂŶŐĞƐŝŶƐŚĞĂƌƐƚƌĞƐƐƌĂƚŚĞƌƚŚĂŶŽdžLJŐĞŶůĞǀĞůƐ

͘DĂƚƵƌĞĐŽůůĂƚĞƌĂů

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ŶĞǁĐĂƉŝůůĂƌŝĞƐďLJĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐŝƐŽŌĞŶŶŽƚƐƵĸĐŝĞŶƚƚŽƌĞƐƚŽƌĞďůŽŽĚŇŽǁĂŶĚŽdžLJŐĞŶůĞǀĞůƐŝŶƚŚĞ

ĂīĞĐƚĞĚĂƌĞĂ͘hŶĚĞƌŶŽƌŵĂůĐŽŶĚŝƟŽŶƐ͕ƚŚĞƌĞŝƐŽŶůLJĂŵŝŶŝŵĂůŶĞƚŇŽǁŝŶƚŚĞĂƌƚĞƌŝŽůĂƌĂŶĂƐƚŽŵŽƐĞƐ͕

ĚƵĞƚŽĂŚŝŐŚƌĞƐŝƐƚĂŶĐĞǁŝƚŚŝŶƚŚĞƐĞĂŶĂƐƚŽŵŽƐĞƐ͘,ŽǁĞǀĞƌ͕ĂƐƵĚĚĞŶŽĐĐůƵƐŝŽŶŽĨĂŵĂũŽƌĂƌƚĞƌLJ

ƌĞƐƵůƚƐŝŶĂŶŝŶĐƌĞĂƐĞĚƉƌĞƐƐƵƌĞŐƌĂĚŝĞŶƚŽǀĞƌƚŚĞĂŶĂƐƚŽŵŽƐĞƐ͘ůŽŽĚŇŽǁŝƐƌĞĚŝƐƚƌŝďƵƚĞĚƚŚƌŽƵŐŚƚŚĞ

ƉƌĞͲĞdžŝƐƚĞŶƚĐŽůůĂƚĞƌĂůĂƌƚĞƌŝŽůĞƐ͕ǁŚŝĐŚŝŶĐƌĞĂƐĞƐƚŚĞŇƵŝĚƐŚĞĂƌƐƚƌĞƐƐƚŽƚŚĞǀĂƐĐƵůĂƌǁĂůů͘/ŶĐƌĞĂƐĞĚ

ƐŚĞĂƌƐƚƌĞƐƐĂĐƟǀĂƚĞƐĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĐĞůůƐ͕ǁŚŝĐŚƵƉƌĞŐƵůĂƚĞƚŚĞĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨĐĞůůĂĚŚĞƐŝŽŶŵŽůĞĐƵůĞƐ

;ƐƵĐŚĂƐsDͲϭͿŽŶƚŚĞŝƌƐƵƌĨĂĐĞ͘dŚĞĞŶĚŽƚŚĞůŝƵŵƉƌŽĚƵĐĞƐĐLJƚŽŬŝŶĞƐ͕ƐƵĐŚĂƐDWͲϭ͕ĂŶĚƌĞůĞĂƐĞƐ

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ĂĚŚĞƐŝŽŶĂŶĚŝŶǀĂƐŝŽŶŽĨŵŽŶŽĐLJƚĞƐŝŶƚŽƚŚĞĐŽůůĂƚĞƌĂůǁĂůů

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ďĞĞŶĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚƚŽƉůĂLJĂƌŽůĞŝŶĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͖ŵŽŶŽĐLJƚĞƐĂŶĚE<ĐĞůůƐĂƌĞƚŚŽƵŐŚƚƚŽƉůĂLJĂƌŽůĞ

ŝŶƚŚĞĞĂƌůLJƉŚĂƐĞƐŽĨĐŽůůĂƚĞƌĂůĂƌƚĞƌLJŐƌŽǁƚŚ͕ǁŚĞƌĞĂƐĂǀĂƌŝĞƚLJŽĨdͲĐĞůůƐƵďƐĞƚƐŚĂǀĞďĞĞŶĨŽƵŶĚƚŽ

ƉůĂLJĂƌŽůĞŝŶĂƐƵďƐĞƋƵĞŶƚůĂƚĞƌƉŚĂƐĞ

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ŐƌŽǁƚŚĨĂĐƚŽƌƐĂŶĚĐLJƚŽŬŝŶĞƐ͕ĐŽŶƚƌŝďƵƟŶŐƚŽƚŚĞŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJĞŶǀŝƌŽŶŵĞŶƚŽĨƚŚĞĂƌƚĞƌŝŽůĞƐ͘DĂƚƌŝdž

ŵĞƚĂůůŽƉƌŽƚĞŝŶĂƐĞƐ;DDWƐͿƉƌŽĚƵĐĞĚďLJŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ͕ǁŝůůĚĞŐƌĂĚĞƚŚĞĞdžƚƌĂĐĞůůƵůĂƌŵĂƚƌŝdž͕ĐƌĞĂƟŶŐ

ƐƉĂĐĞĨŽƌƚŚĞĞdžƉĂŶƐŝŽŶŽĨŐƌŽǁŝŶŐĐŽůůĂƚĞƌĂůƐ͘^ŵŽŽƚŚŵƵƐĐůĞĐĞůůƐĂƌĞŶŽǁĂĐƟǀĂƚĞĚĂŶĚǁŝůůƐƚĂƌƚ

ƚŽƉƌŽůŝĨĞƌĂƚĞ͘/ŶĂĚĚŝƟŽŶ͕ƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐŽĨƚŚĞĂĚǀĞŶƟƟĂůůĂLJĞƌŝƐĞƐƚĂďůŝƐŚĞĚƚŚƌŽƵŐŚĂĐƟǀĂƟŽŶĂŶĚ

ƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ ŽĨ ĮďƌŽďůĂƐƚƐ͕ ƚŚĞ ĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶ ŽĨ ŐƌŽǁƚŚ ĨĂĐƚŽƌƐ ĂŶĚ ĞdžƚƌĂĐĞůůƵůĂƌ ƉƌŽƚĞŽůLJƐŝƐ͘ &ŝŶĂůůLJ͕

ĞŶůĂƌŐĞŵĞŶƚŽĨƚŚĞĐŽůůĂƚĞƌĂůĂƌƚĞƌLJĚŝĂŵĞƚĞƌŝƐĞƐƚĂďůŝƐŚĞĚĂŶĚďůŽŽĚŇŽǁƚŽĚŝƐƚĂůƟƐƐƵĞƐŝƐ;ƉĂƌƟĂůůLJͿ

ƌĞƐƚŽƌĞĚ;&ŝŐƵƌĞϮͿ

.

Flow

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DLJĞůŽŝĚĐĞůůƌĞĐƌƵŝƚŵĞŶƚ

TC PC EC

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DĂƚƵƌĂƟŽŶĂŶĚƐƚĂďŝůŝnjĂƟŽŶ

A B

1

Figure 2. hƉŽŶŝŶĐƌĞĂƐĞĚƐŚĞĂƌƐƚƌĞƐƐ͕ĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĐĞůůƐĂƌĞĂĐƟǀĂƚĞĚĂŶĚƚŚĞĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨĂĚŚĞƐŝŽŶŵŽůĞĐƵůĞƐŝƐƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚ͘

LJƚŽŬŝŶĞƐƌĞůĞĂƐĞĚďLJƚŚĞĞŶĚŽƚŚĞůŝƵŵǁŝůůĂƩƌĂĐƚĂŶĚƌĞĐƌƵŝƚŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJĐĞůůƐ͕ƐƵĐŚĂƐŵŽŶŽĐLJƚĞƐ͕ƚŽƚŚĞǀĞƐƐĞůǁĂůů͘KŶĐĞ

ŝŶǀĂĚĞĚŝŶƚŽƚŚĞǀĞƐƐĞůǁĂůů͕ŵŽŶŽĐLJƚĞƐǁŝůůĚŝīĞƌĞŶƟĂƚĞŝŶƚŽŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐĂŶĚƌĞůĞĂƐĞŐƌŽǁƚŚĨĂĐƚŽƌƐ͕ŵĂƚƌŝdžŵĞƚĂůůŽƉƌŽƚĞŝŶĂƐĞƐ

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ŵƵƐĐůĞĐĞůůƐ͕ĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĐĞůůƐĂŶĚĮďƌŽďůĂƐƚƐǁŝůůƐƚĂƌƚƚŽƉƌŽůŝĨĞƌĂƚĞ͕ƌĞƐƵůƟŶŐŝŶĐŽůůĂƚĞƌĂůŐƌŽǁƚŚ͘

ƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĂŶĚƉŽƐƚͲŝŶƚĞƌǀĞŶƟŽŶĂůƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐ

dŚĞ ŵŽƐƚ ĐŽŵŵŽŶ ĐĂƵƐĞ ƵŶĚĞƌůLJŝŶŐ ĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌ ĚŝƐĞĂƐĞƐ ŝƐ ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͕ ƚŚĞ ďƵŝůĚͲƵƉ ŽĨ

ƉůĂƋƵĞƐŝŶƚŚĞŝŶŶĞƌǁĂůůƐŽĨƚŚĞĂƌƚĞƌŝĞƐ͘ƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐŝƐĂĐŚƌŽŶŝĐ͕ŵƵůƟĨĂĐƚŽƌŝĂůĚŝƐĞĂƐĞŝŶǁŚŝĐŚ

ŵƵůƟƉůĞŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJƉƌŽĐĞƐƐĞƐĂŶĚĐŚĂŶŐĞƐŝŶĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůŚŽŵĞŽƐƚĂƐŝƐƉůĂLJĂƌŽůĞ͘

dŚĞĨŽƌŵĂƟŽŶ

ŽĨ ĞĂƌůLJ ĨĂƩLJ ƐƚƌĞĂŬƐ ƐƚĂƌƚƐ Ăƚ ƐŝƚĞƐ ŽĨ ĚĂŵĂŐĞĚ Žƌ ĂĐƟǀĂƚĞĚ ĞŶĚŽƚŚĞůŝƵŵ ĐĂƵƐĞĚ ďLJ ĨŽƌ ĞdžĂŵƉůĞ

ĚLJƐůŝƉŝĚĞŵŝĂ͕ ĚŝƐƚƵƌďĞĚ ŇŽǁ Žƌ ŚLJƉĞƌƚĞŶƐŝŽŶ͘ dŚĞ ĂĐƟǀĂƚĞĚ ĞŶĚŽƚŚĞůŝƵŵ ŝŶĐƌĞĂƐĞƐ ĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶ ŽĨ

ĂĚŚĞƐŝŽŶŵŽůĞĐƵůĞƐƐƵĐŚĂƐsDͲϭĂŶĚƐĞůĞĐƟŶƐ͘ŝƌĐƵůĂƟŶŐŵŽŶŽĐLJƚĞƐƐƵďƐĞƋƵĞŶƚůLJĂĚŚĞƌĞĂŶĚ

ŝŶĮůƚƌĂƚĞŝŶƚŽƚŚĞĂƌƚĞƌŝĂůǁĂůů͘DŽŶŽĐLJƚĞƐǁŝůůƚŚĞŶĚŝīĞƌĞŶƟĂƚĞŝŶƚŽŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐ͕ǁŚŝĐŚĂƌĞĂďůĞ

ƚŽƚĂŬĞƵƉůŝƉŝĚƐǀŝĂƚŚĞŝƌƐĐĂǀĞŶŐĞƌƌĞĐĞƉƚŽƌƐ͕ĐŽŶƚƌŝďƵƟŶŐƚŽƚŚĞĨŽƌŵĂƟŽŶŽĨĨŽĂŵĐĞůůƐĂŶĚĞĂƌůLJ

ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐůĞƐŝŽŶƐ

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dĐĞůůƐĂŶĚŵĂƐƚĐĞůůƐƌĞƐƵůƚƐŝŶƚŚĞƉƌŽŐƌĞƐƐŝŽŶŽĨĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ

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ƐŵŽŽƚŚŵƵƐĐůĞĐĞůůƐ͕ǁŚŝĐŚƐƚĂƌƚƚŽƉƌŽůŝĨĞƌĂƚĞĂŶĚŵŝŐƌĂƚĞŝŶƚŽƚŚĞŝŶƟŵĂ͘

Shear stress

Extracellular Matrix Adhesion Molecules bFGF

MCP-1 VEGF MMPs

džƚƌĂĐĞůůƵůĂƌDĂƚƌŝdžĞŐƌĂĚĂƟŽŶ

WƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶ

Endothelial cells Smooth muscle cells Monocyte/

Macrophage

Monocyte recruitment

ŽůůĂƚĞƌĂůĂƌƚĞƌLJĨŽƌŵĂƟŽŶ T cells

NK cells Fibroblasts

ϭϰ

,ĞƌĞ͕ƐŵŽŽƚŚŵƵƐĐůĞĐĞůůƐǁŝůůƉƌŽĚƵĐĞĐŽůůĂŐĞŶĂŶĚŽƚŚĞƌĞdžƚƌĂĐĞůůƵůĂƌŵĂƚƌŝdžĐŽŵƉŽŶĞŶƚƐ͕ĨŽƌŵŝŶŐ

ĂĮďƌŽƵƐĐĂƉ

͘KǀĞƌƟŵĞ͕ĐĞůůƵůĂƌĂƉŽƉƚŽƐŝƐĐĂŶůĞĂĚƚŽƚŚĞĨŽƌŵĂƟŽŶŽĨĂŶĞĐƌŽƟĐĐŽƌĞĐŽŶƚĂŝŶŝŶŐ

ĐĞůůƵůĂƌĚĞďƌŝƐĂŶĚĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĐƌLJƐƚĂůƐ͘ƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐƉůĂƋƵĞƐĐĂŶƌĞŵĂŝŶƐƚĂďůĞĂŶĚĂƐLJŵƉƚŽŵĂƟĐ

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ĂůĂƌŐĞŶĞĐƌŽƟĐĐŽƌĞĂŶĚƚŚŝŶĮďƌŽƵƐĐĂƉĂƌĞƉƌŽŶĞƚŽƌƵƉƚƵƌĞ͘WůĂƋƵĞƌƵƉƚƵƌĞǁŝůůĞdžƉŽƐĞƚŚĞƉƌŽͲ ƚŚƌŽŵďŽƟĐŶĞĐƌŽƟĐĐŽƌĞƚŽƚŚĞďůŽŽĚ͕ĐĂƵƐŝŶŐƉůĂƚĞůĞƚĂŐŐƌĞŐĂƟŽŶ͕ƚŚĞĨŽƌŵĂƟŽŶŽĨďůŽŽĚĐůŽƚƐĂŶĚ

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ŝŶĨĂƌĐƟŽŶ ĂŶĚ ƚŚƵƐ ƌĞƋƵŝƌĞ ƐƵƌŐŝĐĂů ŝŶƚĞƌǀĞŶƟŽŶ ƚŽ ƌĞͲŽƉĞŶ ƚŚĞ ǀĞƐƐĞů Žƌ ƚŚƌŽŵďŽůLJƟĐ ƚŚĞƌĂƉLJ ƚŽ

ĚŝƐƐŽůǀĞƚŚĞďůŽŽĚĐůŽƚĂŶĚƌĞƐƚŽƌĞďůŽŽĚŇŽǁ;&ŝŐƵƌĞϯͿ͘

Figure 3.&ŽƌŵĂƟŽŶŽĨĂŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐƉůĂƋƵĞĨƌŽŵůĞŌƚŽƌŝŐŚƚ͘/ŶŇƵdžŽĨ>>ĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůŝŶƚŽƚŚĞǀĞƐƐĞůǁĂůůůĞĂĚƐƚŽĂĐƟǀĂƟŽŶ

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ƚŽƚŚĞǀĞƐƐĞůǁĂůůĂŶĚŵŝŐƌĂƚĞŝŶƚŽƚŚĞŝŶƟŵĂ͘tŝƚŚŝŶƚŚĞŝŶƟŵĂ͕ŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐǁŝůůƚĂŬĞƵƉůŝƉŝĚƐǀŝĂƚŚĞŝƌƐĐĂǀĞŶŐĞƌƌĞĐĞƉƚŽƌƐĂŶĚ

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ŵƵƐĐůĞĐĞůůƐ͕ǁŚĞƌĞĂƐƵŶƐƚĂďůĞƉůĂƋƵĞƐĂƌĞƌŝĐŚŝŶĨŽĂŵĐĞůůƐĂŶĚŚĂǀĞĂǁĞĂŬĮďƌŽƵƐĐĂƉ͕ŵĂŬŝŶŐŝƚƉƌŽŶĞƚŽƌƵƉƚƵƌĞ͘hƉŽŶ

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ŝƐůŝŵŝƚĞĚďLJƚŚĞĨĂĐƚƚŚĂƚĂƐŝŐŶŝĮĐĂŶƚŶƵŵďĞƌŽĨƉĂƟĞŶƚƐĞdžƉĞƌŝĞŶĐĞƐƌĞŶĞǁĞĚŽďƐƚƌƵĐƟŽŶŽĨƚŚĞ

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ƌĞĂĐƟŽŶ͕ ƌĞƐƵůƟŶŐ ŝŶ ƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐ ŽĨ ƚŚĞ ĂƌƚĞƌLJ͘ ZĞƐƚĞŶŽƐŝƐ ĐŽŶƐŝƐƚƐ ŽĨ ďŽƚŚ ŝŶƟŵĂů ŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂ

Extracellular Matrix Adhesion Molecules Endothelial cells

Smooth muscle cells Monocyte/

Macrophage Lymfocytes

Foam cells Cholesterol crystals

Cholesterol Thrombus

EĞĐƌŽƟĐĐŽƌĞ

1

ĂŶĚ ĂĐĐĞůĞƌĂƚĞĚ ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ

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ƚŚĞƵƉƚĂŬĞŽĨůŝƉŝĚƐďLJŵĂĐƌŽƉŚĂŐĞƐŝŶƚŚĞǀĞƐƐĞůǁĂůůĂŶĚƚŚĞƐƵďƐĞƋƵĞŶƚĨŽƌŵĂƟŽŶŽĨĨŽĂŵĐĞůůƐ͘

In vivo mouse models for vascular remodelling

dŚĞĐŽŶƚƌŝďƵƟŽŶŽĨĚŝīĞƌĞŶƚŵŽůĞĐƵůĞƐ͕ŐƌŽǁƚŚĨĂĐƚŽƌƐŽƌĐĞůůƐƚŽǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐĐĂŶďĞƐƚƵĚŝĞĚ

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ŽƚŚ ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĂŶĚ ĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĐĂŶ ďĞ ƐƚƵĚŝĞĚ ƵƐŝŶŐ ŵŽĚĞůƐ ŝŶ ǁŚŝĐŚ ŚŝŶĚ ůŝŵď ŝƐĐŚĞŵŝĂ ŝƐ

ŝŶĚƵĐĞĚ͘^ŝŶŐůĞůŝŐĂƟŽŶŽĨƚŚĞůĞŌĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌLJŝŶϱϳ>ͬϲŵŝĐĞŝƐŽŌĞŶƵƐĞĚƚŽƐƚƵĚLJĨĂĐƚŽƌƐƚŚĂƚĂƌĞ

ƌĞŐƵůĂƚĞĚĚƵƌŝŶŐŶĞŽǀĂƐĐƵůĂƌŝnjĂƟŽŶ͘'ĞŶĞƌĂůůLJ͕ϱϳ>ͬϲŵŝĐĞŚĂǀĞĂŐŽŽĚĂŶŐŝŽŐĞŶŝĐĂŶĚĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶŝĐ

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ůŽĐĂůŝƐĐŚĞŵŝĂŝŶĚƵĐĞƐĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘

ŝīĞƌĞŶƚŵŽĚĞůƐĂƌĞƵƐĞĚƚŽƐƚƵĚLJĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĨŽƌŵĂƟŽŶŝŶŵŝĐĞ͘KŶĞƐƵĐŚŵŽĚĞůŝƐƚŚĞĐĂƌŽƟĚ

ĐŽůůĂƌ ŵŽĚĞů͘ /Ŷ ƚŚŝƐ ŵŽĚĞů͕ Ă ƐĞŵŝͲĐŽŶƐƚƌŝĐƟǀĞ ĐŽůůĂƌ ŝƐ ƉůĂĐĞĚ ĂƌŽƵŶĚ ƚŚĞ ĐĂƌŽƟĚ ĂƌƚĞƌŝĞƐ ŽĨ

ŚLJƉĞƌĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĞŵŝĐƉŽ

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ĂŌĞƌĐŽůůĂƌƉůĂĐĞŵĞŶƚ͕ƚŚĞƐĞůĞƐŝŽŶƐĐĂŶďĞĞǀĂůƵĂƚĞĚĨŽƌŶƵŵĞƌŽƵƐƉĂƌĂŵĞƚĞƌƐ͕ƐƵĐŚĂƐŶĞĐƌŽƟĐĐŽƌĞ͕

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dŚĞĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌLJĐƵīŵŽĚĞůŝƐĂƐƵŝƚĂďůĞŵŽĚĞůƚŽƐƚƵĚLJƉŽƐƚͲŝŶƚĞƌǀĞŶƟŽŶĂůŶĞŽŝŶƟŵĂůŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂ͘

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ŵŽĚĞůŝŶĞŝƚŚĞƌŶŽƌŵŽĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĞŵŝĐϱϳ>ͬϲŵŝĐĞŽƌŚLJƉĞƌĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĞŵŝĐŵŝĐĞĂůůŽǁƵƐƚŽƐƚƵĚLJ

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Non-coding RNAs

EŽŶĐŽĚŝŶŐZEƐŝŶĐůƵĚĞĂůůĨƵŶĐƟŽŶĂůZEŵŽůĞĐƵůĞƐƚŚĂƚĂƌĞŶŽƚƚƌĂŶƐĐƌŝďĞĚĂŶĚƚƌĂŶƐůĂƚĞĚŝŶƚŽ

ĨƵŶĐƟŽŶĂů ƉƌŽƚĞŝŶƐ͘ dŚŝƐ ĐůĂƐƐ ŽĨ ZE ŵŽůĞĐƵůĞƐ ŝŶĐůƵĚĞƐ͕ ĂŵŽŶŐƐƚ ŽƚŚĞƌƐ͕ ƚƌĂŶƐĨĞƌ ZEƐ ;ƚZEƐͿ͕

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ŝŶƚĞƌĨĞƌŝŶŐZEƐ;ƐŝZEƐͿ͕ŵŝĐƌŽZEƐ͕ĂŶĚůŽŶŐŶŽŶͲĐŽĚŝŶŐZEƐ;ůŶĐZEƐͿ͘DŽƐƚŽĨƚŚĞƐĞZEƐĂƌĞ

ŝŶǀŽůǀĞĚŝŶƚŚĞƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨŽƚŚĞƌZEƐ͕ƐƵĐŚĂƐƐŶZEƐ͕ǁŚŝĐŚƌĞŐƵůĂƚĞƐƉůŝĐŝŶŐĂŶĚƐŶŽZEƐ͕ǁŚŝĐŚ

ŵŽĚŝĨLJ ƌZEƐ͘ KƚŚĞƌ ZEƐ ĂƌĞ ŝŶǀŽůǀĞĚ ŝŶ ŐĞŶĞ ƌĞŐƵůĂƟŽŶ͕ ĐĂůůĞĚ ZE ŝŶƚĞƌĨĞƌĞŶĐĞ ;ZEŝͿ͘ dŚĞƐĞ

ZEƐŝŶĐůƵĚĞŵŝĐƌŽZEƐ͕ƐŝZEƐĂŶĚůŶĐZEƐ

.

ϭϲ

Figure 4. ŝŽŐĞŶĞƐŝƐŽĨŵŝĐƌŽZEƐ͘WƌŝŵĂƌLJŵŝĐƌŽZEƐĂƌĞƚƌĂŶƐĐƌŝďĞĚĨƌŽŵŝŶĚŝǀŝĚƵĂůŵŝĐƌŽZEŐĞŶĞƐ͕ĨƌŽŵŝŶƚƌŽŶƐŽĨƉƌŽƚĞŝŶ

ĐŽĚŝŶŐŐĞŶĞƐŽƌĨƌŽŵƉŽůLJĐŝƐƚƌŽŶŝĐƚƌĂŶƐĐƌŝƉƚƐďLJZEƉŽůLJŵĞƌĂƐĞ//͘dŚĞƐĞƉƌŝͲŵŝĐƌŽZEƐĂƌĞƉƌŽĐĞƐƐĞĚďLJƌŽƐŚĂƚŽĨŽƌŵƉƌĞͲ ŵŝĐƌŽZEƐŽĨĂƉƉƌŽdžŝŵĂƚĞůLJϳϬͲϭϬϬŶƵĐůĞŽƟĚĞƐůŽŶŐ͘ŌĞƌƚƌĂŶƐƉŽƌƚĂƟŽŶďLJdžƉŽƌƟŶͲϱƚŽƚŚĞĐLJƚŽƉůĂƐŵ͕ƉƌĞͲŵŝĐƌŽZEƐĂƌĞ

ĐůĞĂǀĞĚďLJŝĐĞƌŝŶƚŽŵŝĐƌŽZEĚƵƉůĞdžĞƐ͘KŶĞŽĨƚŚĞŵĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEƐƚƌĂŶĚƐŝƐƚŚĞŶŝŶĐŽƌƉŽƌĂƚĞĚŝŶƚŽƚŚĞZ/^ĐŽŵƉůĞdž͕ǁŚĞƌĞĂƐ

ƚŚĞŽƚŚĞƌƐƚƌĂŶĚŝƐĚĞŐƌĂĚĞĚŽƌůŽĂĚĞĚŝŶƚŽŝƚƐŽǁŶZ/^ĐŽŵƉůĞdž͘DĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEƐƌĞŐƵůĂƚĞŐĞŶĞĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶǀŝĂƚƌĂŶƐůĂƟŽŶĂů

ƌĞƉƌĞƐƐŝŽŶŽƌŵZEĚĞŐƌĂĚĂƟŽŶŽĨƚŚĞŝƌƚĂƌŐĞƚŵZE͘

MicroRNAs and their role in vascular remodelling

DŝĐƌŽZEƐ ĂƌĞ ƐŚŽƌƚ ĞŶĚŽŐĞŶŽƵƐ ZE ŵŽůĞĐƵůĞƐ ŽĨ ΕϮϮ ŶƵĐůĞŽƟĚĞƐ ůŽŶŐ ƚŚĂƚ ƌĞŐƵůĂƚĞ ŐĞŶĞ

ĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶ͘DŝĐƌŽZEŐĞŶĞƐĂƌĞůŽĐĂƚĞĚĞŝƚŚĞƌŝŶƚĞƌŐĞŶŝĐŽƌŝŶƚƌĂŐĞŶŝĐ;ǁŝƚŚŝŶŝŶƚƌŽŶƐŽĨĐŽĚŝŶŐŽƌ

ŶŽŶĐŽĚŝŶŐ ŐĞŶĞƐͿ͘ ^ŽŵĞ ŵŝĐƌŽZEƐ ŚĂǀĞ ƚŚĞŝƌ ŽǁŶ ƉƌŽŵŽƚĞƌƐ ĂŶĚ ĂƌĞ ĞdžƉƌĞƐƐĞĚ ŝŶĚĞƉĞŶĚĞŶƚůLJ͕

ǁŚŝůĞ ŽƚŚĞƌ ŵŝĐƌŽZEƐ ĂƌĞ ŽƌŐĂŶŝnjĞĚ ŝŶ ĐůƵƐƚĞƌƐ ĂŶĚ ƐŚĂƌĞ ƚŚĞ ƐĂŵĞ ƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂů ƌĞŐƵůĂƟŽŶ

. DŝĐƌŽZEŐĞŶĞƐĂƌĞƚƌĂŶƐĐƌŝďĞĚĂƐƉƌŝŵĂƌLJŵŝĐƌŽZEƐ;ƉƌŝͲŵŝĐƌŽZEƐͿďLJZEƉŽůLJŵĞƌĂƐĞ//ĂŶĚ

ĨŽƌŵƐƚĞŵͲůŽŽƉƐƚƌƵĐƚƵƌĞƐ;&ŝŐƵƌĞϰͿ

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ĂďŽƵƚϳϬŶƵĐůĞŽƟĚĞƐůŽŶŐ

͘WƌĞͲŵŝĐƌŽZEƐĂƌĞƚƌĂŶƐƉŽƌƚĞĚƚŽƚŚĞĐLJƚŽƉůĂƐŵďLJdžƉŽƌƟŶͲϱ͕ǁŚĞƌĞ

5’

3’

ZEƉŽů//ƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶ

MicroRNA gene

Drosha

DGCR8

Pri-microRNA Polycistronic pri-microRNAs

Pre-microRNA

džƉŽƌƟŶͲϱ

Nucleus

Cytoplasm

Ran GTP

Dicer

TRBP

mature microRNA microRNA duplex

ŵZEƚĂƌŐĞƫŶŐ

ĞŐƌĂĚĂƟŽŶ RISC

ŵZEĚĞŐƌĂĚĂƟŽŶ dƌĂŶƐůĂƟŽŶĂůƌĞƉƌĞƐƐŝŽŶ AGO

1

ƚŚĞLJĂƌĞƉƌŽĐĞƐƐĞĚďLJƚŚĞĞŶnjLJŵĞŝĐĞƌŝŶƚŽŵĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEĚƵƉůĞdžĞƐ͘&ƌŽŵƚŚŝƐŵŝĐƌŽZEĚƵƉůĞdž͕

ŽŶĞƐƚƌĂŶĚ;ƚŚĞŐƵŝĚĞƐƚƌĂŶĚͿŝƐŐĞŶĞƌĂůůLJƉƌĞĨĞƌƌĞĚĨŽƌĂƐƐŽĐŝĂƟŽŶǁŝƚŚĂŶƌŐŽŶĂƵƚĞ;'KͿƉƌŽƚĞŝŶ

ĂŶĚ ŝŶĐŽƌƉŽƌĂƟŽŶ ŝŶƚŽ ƚŚĞ ZE ŝŶĚƵĐĞĚ ƐŝůĞŶĐŝŶŐ ĐŽŵƉůĞdž ;Z/^Ϳ͕ ǁŚĞƌĞĂƐ ƚŚĞ ŽƚŚĞƌ ƐƚƌĂŶĚ ;ƚŚĞ

ƉĂƐƐĞŶŐĞƌƐƚƌĂŶĚͿŝƐƌĂƉŝĚůLJƌĞŵŽǀĞĚĂŶĚĚĞŐƌĂĚĞĚ

͘,ŽǁĞǀĞƌ͕ĂĐĐƵŵƵůĂƟŶŐĞǀŝĚĞŶĐĞƐƵŐŐĞƐƚƐƚŚĂƚ

ƚŚĞƉĂƐƐĞŶŐĞƌƐƚƌĂŶĚĐĂŶĂůƐŽďĞůŽĂĚĞĚŝŶƚŽƚŚĞZ/^

͘DĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEƐŐƵŝĚĞƚŚĞZ/^ĐŽŵƉůĞdž

ƚŽƚĂƌŐĞƚƐŝƚĞƐŝŶƚŚĞϯ͛ƵŶƚƌĂŶƐůĂƚĞĚƌĞŐŝŽŶŽĨƚŚĞŝƌƚĂƌŐĞƚŵZEƐ͘ŝŶĚŝŶŐŽĨĂŵŝĐƌŽZEƚŽƚŚĞϯ͛

hdZŽĨĂƚĂƌŐĞƚŵZEĐĂŶĞŝƚŚĞƌůĞĂĚƚŽĚĞŐƌĂĚĂƟŽŶŽĨƚŚĞŵZEŽƌůĞĂĚƚŽƚƌĂŶƐůĂƟŽŶĂůƌĞƉƌĞƐƐŝŽŶ

ŽĨƚŚĞŵZEƚĂƌŐĞƚ

͘DĞƐƐĞŶŐĞƌZEĚĞŐƌĂĚĂƟŽŶŝƐƵƐƵĂůůLJƐĞĞŶŝŶƉůĂŶƚĐĞůůƐĂŶĚƚĂŬĞƐƉůĂĐĞǁŚĞŶ

ŵŝĐƌŽZEďŝŶĚŝŶŐŽĐĐƵƌƐǁŝƚŚƉĞƌĨĞĐƚĐŽŵƉůĞŵĞŶƚĂƌŝƚLJƚŽƚŚĞŵZEƚĂƌŐĞƚ͘ŝƚŚĞƌǁĂLJ͕ďŝŶĚŝŶŐŽĨĂ

ŵŝĐƌŽZEƚŽƚŚĞϯ͛hdZŽĨĂƚĂƌŐĞƚŵZEůĞĂĚƐƚŽĚŽǁŶƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨƚŚĞĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨƚŚĂƚŐĞŶĞ͘dŚĞ

ĮƌƐƚϮƚŽϴŶƵĐůĞŽƟĚĞƐĨƌŽŵƚŚĞϱ͛ƉŽƌƟŽŶŽĨĂŵŝĐƌŽZE͕ŝƐŝŵƉŽƌƚĂŶƚĨŽƌƚĂƌŐĞƚƌĞĐŽŐŶŝƟŽŶĂŶĚŝƐ

ƌĞĨĞƌƌĞĚƚŽĂƐƚŚĞƐĞĞĚƐĞƋƵĞŶĐĞŽĨƚŚĞŵŝĐƌŽZE

.

ƵƌŝŶŐ ĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚ͕ ŵĂŶLJ ŵŝĐƌŽZEƐ ĂƌĞ ĞdžƉƌĞƐƐĞĚ ŝŶ Ă ƟƐƐƵĞ ƐƉĞĐŝĮĐ ŵĂŶŶĞƌ͕ ƐƵŐŐĞƐƟŶŐ ƚŚĞ

ŝŶǀŽůǀĞŵĞŶƚŽĨŵŝĐƌŽZEƐŝŶĚĞƚĞƌŵŝŶŝŶŐĂŶĚŵĂŝŶƚĂŝŶŝŶŐƟƐƐƵĞŝĚĞŶƟƚLJ

͘ĂĐŚŵŝĐƌŽZEŚĂƐƚŚĞ

ĂďŝůŝƚLJƚŽƌĞŐƵůĂƚĞŚƵŶĚƌĞĚƐŽĨƚĂƌŐĞƚƐĂŶĚďLJĚŽŝŶŐƐŽ͕ƐƉĞĐŝĮĐŵŝĐƌŽZEƐĐĂŶƌĞŐƵůĂƚĞĐŽŵƉůĞdž͕

ŵƵůƟĨĂĐƚŽƌŝĂůƉŚLJƐŝŽůŽŐŝĐĂůƉƌŽĐĞƐƐĞƐƐƵĐŚĂƐǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ͘dŚĞĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚĂŶĚƉƌŽŐƌĞƐƐŝŽŶ

ŽĨ ĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌ ĚŝƐĞĂƐĞ ŚĂƐ ďĞĞŶ ůŝŶŬĞĚ ƚŽ ƚŚĞ ĚLJƐƌĞŐƵůĂƟŽŶ ŽĨ ŵĂŶLJ ŝŶĚŝǀŝĚƵĂů ŵŝĐƌŽZEƐ ĂŶĚ

ŵƵůƟƉůĞŵŝĐƌŽZEƐŚĂǀĞďĞĞŶĨŽƵŶĚƚŽďĞŵŽĚƵůĂƚŽƌƐŽĨĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͕ůŝƉŽƉƌŽƚĞŝŶŵĞƚĂďŽůŝƐŵ͕

ŝŶŇĂŵŵĂƟŽŶĂŶĚǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ

͘&ŽƌĞdžĂŵƉůĞ͕ƚŚĞŵŝZͲϯϯĨĂŵŝůLJĐŽŶƐŝƐƟŶŐŽĨŵŝZͲϯϯĂͬď͕

ƚĂƌŐĞƚƐƚŚĞĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůƚƌĂŶƐƉŽƌƚĞƌϭĂŶĚŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϯϯĂͬďƌĞĚƵĐĞĚ in vivoƉƌŽŐƌĞƐƐŝŽŶ

ŽĨ ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐ ƉůĂƋƵĞ ĨŽƌŵĂƟŽŶ

͘ dŚĞ ŵŝZͲϭϳͲϵϮ ŐĞŶĞ ĐůƵƐƚĞƌ ŚĂƐ Ă ǁĞůů ĚĞƐĐƌŝďĞĚ ƌŽůĞ ŝŶ

ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ ĂƐ ǁĞůů ĂƐ ĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ

͘ /Ŷ ĂĚĚŝƟŽŶ͕ ŵŝĐƌŽZEƐ ĨƌŽŵ ƚŚŝƐ ĐůƵƐƚĞƌ ĐŽŶƚƌŝďƵƚĞ ƚŽ

ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĂŶĚŶĞŽŝŶƟŵĂĨŽƌŵĂƟŽŶ

.

The 14q32 non-coding RNA cluster

dŚĞϭϰƋϯϮŐĞŶŽŵŝĐƌĞŐŝŽŶŝƐůŽĐĂƚĞĚŽŶŚƵŵĂŶĐŚƌŽŵŽƐŽŵĞϭϰ͕ĐŚƌŽŵŽƐŽŵĞϭϮ&ϭŝŶŵŝĐĞ͘dŚŝƐ

ƌĞŐŝŽŶŚŽƐƚƐŽŶĞŽĨƚŚĞůĂƌŐĞƐƚŵŝĐƌŽZEĐůƵƐƚĞƌƐŝŶƚŚĞŐĞŶŽŵĞ͕ĐŽŶƚĂŝŶŝŶŐϱϰŵŝĐƌŽZEƐĂŶĚŝƐ

ŚŝŐŚůLJ ĐŽŶƐĞƌǀĞĚ ŝŶ ŵĂŵŵĂůƐ

͘ džƚĞŶƐŝǀĞ ŚLJƉŽŵĞƚŚLJůĂƟŽŶ ŽĨ ƚŚĞ ϭϰƋϯϮ ůŽĐƵƐ ǁĂƐ ŽďƐĞƌǀĞĚ ŝŶ

ŚƵŵĂŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐƉůĂƋƵĞƐ͕ǁŚŝĐŚƌĞƐƵůƚĞĚŝŶƵƉƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐĂŶĚƐƵŐŐĞƐƟŶŐĂ

ƌŽůĞĨŽƌĞƉŝŐĞŶĞƟĐŵŽĚƵůĂƟŽŶŽĨƚŚĞϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEĐůƵƐƚĞƌŝŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ

.

/ŶĂĚĚŝƟŽŶ͕ƚŚĞŚƵŵĂŶϭϰƋϯϮůŽĐƵƐĐŽŶƚĂŝŶƐƚŚƌĞĞůŶĐZEƐĂŶĚϰϭƐŶŽZEƐ;&ŝŐƵƌĞϱͿ͘D'ϯ͕ŽŶĞ

ŽĨƚŚĞϭϰƋϯϮůŶĐZEƐ͕ŝƐƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚŝŶĞŶĚŽƚŚĞůŝĂůĐĞůůƐƵŶĚĞƌŚLJƉŽdžŝĂ

͘ĞůĞƟŽŶŽĨD'ϯŝŶŵŝĐĞ

;D'ϯ

ŵŝĐĞͿůĞĂĚƐƚŽŝŶĐƌĞĂƐĞĚs'&ĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶĂŶĚĐŽƌƟĐĂůŵŝĐƌŽǀĞƐƐĞůĚĞŶƐŝƚLJŝŶƚŚĞƐĞĂŶŝŵĂůƐ

. dŚĞϭϰƋϯϮƐŶŽZEƐĂƌĞŽƌƉŚĂŶƐŶŽZEƐŽĨƚŚĞͬďŽdžƐƵďƚLJƉĞĂŶĚĐĂŶďĞĚŝǀŝĚĞĚŝŶƚŽƚŚƌĞĞŚŝŐŚůLJ

ƌĞůĂƚĞĚĐŽƉLJͲƐĞƚƐ͕ŶĂŵĞůLJ^EKZϭϭϮ;ϭĐŽƉLJͿ͕^EKZϭϭϯ;ϵĐŽƉŝĞƐͿĂŶĚ^EKZϭϭϰ;ϯϭĐŽƉŝĞƐͿ͘

ϭϴ

Figure 5. ƐĐŚĞŵĂƟĐŽǀĞƌǀŝĞǁŽĨƚŚĞŚƵŵĂŶϭϰƋϯϮĂŶĚŵƵƌŝŶĞϭϮ&ϭůŽĐƵƐ͘/ŶŚƵŵĂŶƐ͕ƚŚĞϭϰƋϯϮůŽĐƵƐĐŽŶƚĂŝŶƐϱϰŵŝĐƌŽZEƐ͕

ϯůŶĐZEƐ;D'ϯ͕D'ϴĂŶĚ^E,'ϮϯͿĂŶĚϰϭƐŶŽZEƐƚŽĚĂƚĞ͘/ŶŵŝĐĞ͕ƚŚĞĐůƵƐƚĞƌĐŽŶƚĂŝŶƐϲϭŵŝĐƌŽZEƐ͕ϮůĐŶZEƐ;DĞŐϯĂŶĚ

ZŝĂŶͿĂŶĚϳƐŶŽZEƐ͘ŽůŽƌƐŝŶĚŝĐĂƚĞǁŚĞƚŚĞƌŵƵƌŝŶĞŵŝĐƌŽZEƐǁĞƌĞĞĂƌůLJ;ƌĞĚͿ͕ůĂƚĞ;ŐƌĞĞŶͿŽƌŶŽŶͲƌĞƐƉŽŶĚĞƌƐ;ďůƵĞͿĂŌĞƌŚŝŶĚ

ůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂŝŶŵŝĐĞ͘ŽĚŝŶŐ;ƚŚŝĐŬďĂƌƐͿĂŶĚŶŽŶĐŽĚŝŶŐ;ƚŚŝŶďĂƌƐͿŐĞŶĞƐĂƌĞŝŶĚŝĐĂƚĞĚŝŶďůĂĐŬ͘

MMU-12F1

10.945MB

10.951MB

10.974MB 10.971MB 10.948MB

10.954MB

10.957MB

10.969MB 10.966MB 10.963MB 10.96MB

11.028MB

+ -

miR-3071

miR-1247 Dio3

Rtl1 Dlk1

Meg3 miR-1906-1 miR-770 miR-673 miR-493 miR-337 miR-540 miR-665 miR-3070a miR-3070b miR-431 6430411K18Rik miR-433 miR-127 miR-434 miR-432 miR-136 Rian miR-341 miR-1188 miR-370 SNO Cluster miR-882 miR-379 miR-411 miR-299a miR-380 miR-1197 miR-323 miR-758 miR-329 miR-494 miR-679 miR-1193 miR-666 miR-543 miR-495 miR-667 miR-376c miR-654 miR-376b miR-376a miR-300 miR-381 miR-487b miR-539 miR-544 miR-382 miR-134 miR-668 miR-485 Mirg miR-453 miR-154 miR-496a miR-377 miR-541 miR-409 miR-412 miR-369 miR-410 miR-3072

HSA-14q32

101.20MB

101.24MB

101.48MB

101.56MB 101.44MB

101.52MB

102.03MB 101.28MB

101.32MB

101.36MB

101.4MB

- +

RTL1

miR-1247 DIO3

DLK1

miR-2392 MEG3 miR-770 miR-493

miR-337

miR-665

miR-431 miR-433 miR-127 miR-432 miR-136 LOC100288160 MEG8 SNORD112 miR-370

SNHG23

miR-379 miR-411 miR-299 miR-380 miR-1197 miR-323a miR-758 miR-329-1 miR-329-2 miR-494 miR-1193 miR-543 miR495 miR-376c miR-376a-2 miR-654 miR-376b miR-376a-1 miR-300 miR-1185-1 miR-1185-2 miR-381 miR-487b miR-539 miR-889 miR-544a miR-655 miR-487a miR-382 miR-134 miR-668 miR-485 miR-323b miR-154 miR-496 miR-377 miR-541 miR-409 mir-412 miR-369 miR-410 miR-656

Protein Coding gene Early responding miR/snoR Late responding miR/snoR Non-responding miR/snoR miR/snoR regulation unknown lincRNAs

miR-3544

miR-299b SNORD113.1

SNORD113.2 SNORD113.3 SNORD113.4 SNORD113.5 SNORD113.6 SNORD113.7 SNORD113.8 SNORD113.9 SNORD114.1 SNORD114.2 SNORD114.3 SNORD114.4 SNORD114.5 SNORD114.6 SNORD114.7 SNORD114.8 SNORD114.9 SNORD114.10 SNORD114.11 SNORD114.12 SNORD114.13 SNORD114.14 SNORD114.15 SNORD114.16 SNORD114.17 SNORD114.18 SNORD114.19 SNORD114.20 SNORD114.21 SNORD114.22 SNORD114.23 SNORD114.24 SNORD114.25 SNORD114.26 SNORD114.27 SNORD114.28 SNORD114.29 SNORD114.30 SNORD114.31

AF357425 AF357426 DQ267100 AF357359 DQ267101 AF357355 DQ267102

1

Outline of this thesis

dŚĞĂŝŵŽĨƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐŝƐƚŽŝŶǀĞƐƟŐĂƚĞƚŚĞƌŽůĞŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐŝŶǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ͕ĂƐǁĞůůĂƐ

ƚŽŝĚĞŶƟĨLJŵŝĐƌŽZEƐĂƐŶĞǁƚŚĞƌĂƉĞƵƟĐƚĂƌŐĞƚƐĨŽƌƚŚĞƚƌĞĂƚŵĞŶƚŽĨĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌĚŝƐĞĂƐĞƐ͘

dŚĞĮƌƐƚƉĂƌƚŽĨƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐĨŽĐƵƐĞƐŽŶƚŚĞƌŽůĞŽĨŵŝĐƌŽZEƐŝŶǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐĂŶĚŝŶƉĂƌƟĐƵůĂƌ

ƚŚĂƚ ŽĨ ŵŝĐƌŽZEƐ ĨƌŽŵ ƚŚĞ ϭϰƋϯϮ ĐůƵƐƚĞƌ͕ ďLJ ƐƚƵĚLJŝŶŐ ƚŚĞŝƌ ŝŶǀŽůǀĞŵĞŶƚ ŝŶ ĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĂŶĚ

ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĂŶĚƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐ͘

Chapter 2 ƌĞǀŝĞǁƐƚŚĞŵƵůƟĨĂĐƚŽƌŝĂůŶĂƚƵƌĞŽĨŵŝĐƌŽZEƐŝŶƚŚĞǀĂƐĐƵůĂƚƵƌĞ͕ĞŵƉŚĂƐŝnjŝŶŐƚŚĞŵƵůƟƉůĞ

ƌŽůĞƐŵŝĐƌŽZEƐĐĂŶŚĂǀĞŝŶĚŝīĞƌĞŶƚĨŽƌŵƐŽĨǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ͘KŌĞŶ͕ƚŚĞĞīĞĐƚŽĨŵŝĐƌŽZE

ŵĂŶŝƉƵůĂƟŽŶŝƐĂƐĐƌŝďĞĚƚŽƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨĂƐŝŶŐůĞƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞ͘,ŽǁĞǀĞƌ͕ŝƚƐŚŽƵůĚďĞƚĂŬĞŶŝŶƚŽĂĐĐŽƵŶƚ

ƚŚĂƚŵŝĐƌŽZEƐĂƌĞĂďůĞƚŽƚĂƌŐĞƚŶƵŵĞƌŽƵƐŐĞŶĞƐĂŶĚŵŽĚƵůĂƟŽŶŽĨĂƐŝŶŐůĞŵŝĐƌŽZEĐĂŶŚĂǀĞ

ĚŝǀĞƌƐĞĞīĞĐƚƐŝŶĚŝīĞƌĞŶƚĚŝƐĞĂƐĞŵŽĚĞůƐ͘

Chapter 3  ĚĞƐĐƌŝďĞƐ ƚŚĞ ƵƐĞ ŽĨ Ă ZĞǀĞƌƐĞĚ dĂƌŐĞƚ WƌĞĚŝĐƟŽŶ ;ZdWͿ ƐƚƌĂƚĞŐLJ ƚŽ ŝĚĞŶƟĨLJ ŵŝĐƌŽZEƐ

ƚŚĂƚĂīĞĐƚĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐĂŶĚĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘/ŶƚŚŝƐĐŚĂƉƚĞƌ͕ǁĞƌĞƉŽƌƚƚŚĞƌŽůĞŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐ

ŵŝZͲϯϮϵ͕ ŵŝZͲϰϴϳď͕ ŵŝZͲϰϵϰ ĂŶĚ ŵŝZͲϰϵϱ ŝŶ ƉŽƐƚͲŝƐĐŚĞŵŝĐ ďůŽŽĚ ŇŽǁ ƌĞĐŽǀĞƌLJ͘ hƉƌĞŐƵůĂƟŽŶ ŽĨ

ŵŝĐƌŽZEƐĨƌŽŵƚŚĞϭϰƋϯϮĐůƵƐƚĞƌǁĂƐŽďƐĞƌǀĞĚĂŌĞƌƐŝŶŐůĞůŝŐĂƟŽŶŽĨƚŚĞĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌLJ͕ĨŽůůŽǁŝŶŐ

ƚŚƌĞĞĚŝīĞƌĞŶƚĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶƉĂƩĞƌŶƐ;&ŝŐƵƌĞϱͿ͘^ĞůĞĐƟŶŐŵŝĐƌŽZEƐĨƌŽŵĞĂĐŚĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶƉĂƩĞƌŶ;ŵŝZͲ ϯϮϵĂƐĂůĂƚĞƌĞƐƉŽŶĚĞƌ͕ŵŝZͲϰϴϳďĂŶĚŵŝZͲϰϵϰĂƐĞĂƌůLJƌĞƐƉŽŶĚĞƌƐĂŶĚŵŝZͲϰϵϱĂƐŶŽŶͲƌĞƐƉŽŶĚĞƌͿ͕

ǁĞ ĚĞŵŽŶƐƚƌĂƚĞĚ ŝŶĐƌĞĂƐĞĚ ďůŽŽĚ ŇŽǁ ƌĞĐŽǀĞƌLJ ĂŶĚ ŶĞŽǀĂƐĐƵůĂƌŝnjĂƟŽŶ ĂŌĞƌ ŝŶŚŝďŝƟŽŶ ŽĨ ƚŚĞƐĞ

ŵŝĐƌŽZEƐƵƐŝŶŐ'ĞŶĞ^ŝůĞŶĐŝŶŐKůŝŐŽŶƵĐůĞŽƟĚĞƐ;'^KƐͿŝŶĂŶŚŝŶĚůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂŵŽĚĞů͘

In Chapter 4 ͕ ǁĞ ŵĂĚĞ ƵƐĞ ŽĨ ƚŚĞ ƐĂŵĞ ZdW ƐƚƌĂƚĞŐLJ ƚŽ ŝĚĞŶƟĨLJ ŵŝĐƌŽZEƐ ƚŚĂƚ ĐŽƵůĚ ĂīĞĐƚ

ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͘ŐĂŝŶ͕ƚŚĞϭϰƋϯϮĐůƵƐƚĞƌǁĂƐƉƌĞĚŝĐƚĞĚƚŽƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞƐƚŚĂƚŝŶŇƵĞŶĐĞĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͘

tĞŽďƐĞƌǀĞĚŝŶĐƌĞĂƐĞĚĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEŵŝZͲϰϵϰŝŶƵŶƐƚĂďůĞŚƵŵĂŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐ

ƉůĂƋƵĞƐĐŽŵƉĂƌĞĚƚŽƐƚĂďůĞůĞƐŝŽŶƐ͘/ŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϰϵϰŝŶƚŚĞĐĂƌŽƟĚĐŽůůĂƌŵŽĚĞůĨŽƌĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ

ƌĞƐƵůƚĞĚŝŶƌĞĚƵĐĞĚůĞƐŝŽŶĨŽƌŵĂƟŽŶ͕ǁŚŝůĞƉůĂƋƵĞƐƚĂďŝůŝƚLJǁĂƐŝŶĐƌĞĂƐĞĚ͘DƵůƟƉůĞƚĂƌŐĞƚŐĞŶĞƐŽĨ

ŵŝZͲϰϵϰǁĞƌĞƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚďŽƚŚin vitroĂŶĚin vivo.

In Chapter 5 ƚŚĞƌŽůĞŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐŝŶƉŽƐƚͲŝŶƚĞƌǀĞŶƟŽŶĂůǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐŽƌƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐŝƐ

ŝŶǀĞƐƟŐĂƚĞĚ͘ZĞƐƚĞŶŽƐŝƐĐŽŶƐŝƐƚŽĨŝŶƟŵĂůŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂĂŶĚĂĐĐĞůĞƌĂƚĞĚĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͘EŽŶͲĐŽŶƐƚƌŝĐƟǀĞ

ĐƵīƐ ǁĞƌĞ ƉůĂĐĞĚ ĂƌŽƵŶĚ ƚŚĞ ĨĞŵŽƌĂů ĂƌƚĞƌLJ ŽĨ ŵŝĐĞ ƚŽ ŝŶĚƵĐĞ ŝŶƟŵĂů ŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂ͘ ĐĐĞůĞƌĂƚĞĚ

ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐǁĂƐŝŶĚƵĐĞĚŝŶŚLJƉĞƌĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůĞŵŝĐƉŽŵŝĐĞďLJƉůĂĐŝŶŐƐĞŵŝͲĐŽŶƐƚƌŝĐƟǀĞĐŽůůĂƌƐ

ĂƌŽƵŶĚďŽƚŚĐĂƌŽƟĚĂƌƚĞƌŝĞƐ͘'^KƐĂŐĂŝŶƐƚŵŝZͲϯϮϵ͕ŵŝZͲϰϵϰĂŶĚŵŝZͲϰϵϱǁĞƌĞƵƐĞĚƚŽŝŶŚŝďŝƚƚŚĞƐĞ

ŵŝĐƌŽZEƐŝŶďŽƚŚĞdžƉĞƌŝŵĞŶƚĂůŵŽĚĞůƐĨŽƌƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐ͘'^KͲϰϵϱƚƌĞĂƚĞĚĂŶŝŵĂůƐƐŚŽǁĞĚĚĞĐƌĞĂƐĞĚ

ŝŶƟŵĂůŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂĐŽŵƉĂƌĞĚƚŽĐŽŶƚƌŽůĂŶŝŵĂůƐĂŌĞƌĐƵīƉůĂĐĞŵĞŶƚ͕ǁŚĞƌĞĂƐ'^KͲϯϮϵĂŶĚ'^KͲϰϵϰ

ƚƌĞĂƚŵĞŶƚŚĂĚůĞƐƐƉƌŽĨŽƵŶĚĞīĞĐƚƐŽŶŝŶƟŵĂůŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂ͘/ŶƚŚĞĂĐĐĞůĞƌĂƚĞĚĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐŵŽĚĞů͕

'^KͲϰϵϱƚƌĞĂƚŵĞŶƚƌĞƐƵůƚĞĚŝŶƐŵĂůůĞƌĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐůĞƐŝŽŶƐǁŚŝĐŚŚĂĚƐŵĂůůĞƌŶĞĐƌŽƟĐĐŽƌĞƐĂŶĚ

ŝŶĐƌĞĂƐĞĚĐŽůůĂŐĞŶĐŽŶƚĞŶƚ͘

dŚĞƐĞĐŽŶĚƉĂƌƚŽĨƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐŝŶǀĞƐƟŐĂƚĞƐƚŚĞ;ƉŽƐƚͿƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂůƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZE

ĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶ͘

20

Chapter 6 ĨŽĐƵƐĞƐ ŽŶ DLJŽĐLJƚĞ ŶŚĂŶĐĞƌ &ĂĐƚŽƌ ϮĂ ;D&ϮĂͿ ŝŶ ƉŽƐƚͲŝƐĐŚĞŵŝĐ ŶĞŽǀĂƐĐƵůĂƌŝnjĂƟŽŶ͘

 ƌĞĐĞŶƚ ƐƚƵĚLJ ƐŚŽǁĞĚ ƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂů ƌĞŐƵůĂƟŽŶ ŽĨ ƚŚĞ ϭϰƋϯϮ ƌĞŐŝŽŶ ďLJ D&ϮĂ

͘ dŚĞƌĞĨŽƌĞ͕ ǁĞ

ŚLJƉŽƚŚĞƐŝnjĞĚƚŚĂƚŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨD&ϮĂĐŽƵůĚŝŵƉƌŽǀĞƉŽƐƚͲŝƐĐŚĞŵŝĐŶĞŽǀĂƐĐƵůĂƌŝnjĂƟŽŶǀŝĂŝŶŚŝďŝƟŽŶŽĨ

ϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐ͘/ŶĚĞĞĚ͕'^KͲDĞĨϮĂƚƌĞĂƚŵĞŶƚůĞĚƚŽŝŵƉƌŽǀĞĚďůŽŽĚŇŽǁƌĞĐŽǀĞƌLJĂŶĚŝŶĐƌĞĂƐĞĚ

ĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐĂŶĚĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐĂŌĞƌŚŝŶĚůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂŝŶŵŝĐĞ͘DŽƌĞŽǀĞƌ͕ƌĞĚƵĐĞĚĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨ

ϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐŵŝZͲϯϮϵĂŶĚŵŝZͲϰϵϰǁĂƐŽďƐĞƌǀĞĚŝŶƚŚĞƐĞĂŶŝŵĂůƐ͕ǁŚŝĐŚĐŽƵůĚƉĂƌƟĂůůLJĞdžƉůĂŝŶ

ƚŚĞŽďƐĞƌǀĞĚĞīĞĐƚƐ͘,ŽǁĞǀĞƌ͕ǁĞĐŽƵůĚŶŽƚĐŽŶĮƌŵƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂůƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐ

ďLJDĞĨϮĂ͕ďƵƚǁĞĚŝĚƐŚŽǁƚŚĂƚDĞĨϮĂĐŽƵůĚĂĐƚĂƐZEďŝŶĚŝŶŐƉƌŽƚĞŝŶ͕ƌĞŐƵůĂƟŶŐƚŚĞĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨ

ϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐĂƚƚŚĞƉŽƐƚͲƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂůůĞǀĞů͘

In Chapter 7͕ǁĞnjŽŽŵŝŶŽŶƚŚĞĚŝīĞƌĞŶƟĂůĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐŽďƐĞƌǀĞĚĂŌĞƌŝƐĐŚĞŵŝĂ͘

LJĞǀĂůƵĂƟŶŐƚŚĞĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶůĞǀĞůƐŽĨƉƌŝͲŵŝĐƌŽZEƐ͕ƉƌĞͲŵŝĐƌŽZEƐĂŶĚŵĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEƐĂŌĞƌ

ŝŶĚƵĐƟŽŶ ŽĨ ŝƐĐŚĞŵŝĂ͕ ǁĞ ĨŽƵŶĚ ĐůƵĞƐ ƚŚĂƚ ƚŚĞ ĚŝīĞƌĞŶƟĂů ƌĞŐƵůĂƟŽŶ ŽĨ ƚŚĞƐĞ ŵŝĐƌŽZEƐ ŽĐĐƵƌƐ

ĨƌŽŵƉƌĞͲŵŝĐƌŽZEƚŽŵĂƚƵƌĞŵŝĐƌŽZEƉƌŽĐĞƐƐŝŶŐ͘hƐŝŶŐ^ƚĂďůĞ/ƐŽƚŽƉĞ>ĂďĞůůŝŶŐŽĨŵŝŶŽĐŝĚƐ

;^/>Ϳ͕ĨŽůůŽǁĞĚďLJZEƉƵůůĚŽǁŶĂŶĚDĂƐƐ^ƉĞĐƚƌŽŵĞƚƌLJŽŶϯdϯĐĞůůƐƵŶĚĞƌƐĞƌƵŵƐƚĂƌǀĂƟŽŶ͕ǁĞ

ĚĞƚĞƌŵŝŶĞĚǁŚŝĐŚZEͲŝŶĚŝŶŐWƌŽƚĞŝŶƐ;ZWƐͿĂƌĞƌĞƐƉŽŶƐŝďůĞĨŽƌƚŚĞĚŝīĞƌĞŶƟĂůƉŽƐƚͲƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂů

ƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐ͘tĞŝĚĞŶƟĮĞĚ/ZWĂŶĚ,,ĂƐƉŽƐƚͲƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂůƌĞŐƵůĂƚŽƌƐŽĨ

ϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEŵŝ/ZͲϯϮϵĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶƵŶĚĞƌŝƐĐŚĞŵŝĂ͘

/ŶƚŚĞƚŚŝƌĚĂŶĚůĂƐƚƉĂƌƚŽĨƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐ͕ƚŚĞĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨŵŝĐƌŽZEƐŝŶƐƵďĐƵƚĂŶĞŽƵƐĂĚŝƉŽƐĞƟƐƐƵĞ

ŽĨĐƌŝƟĐĂůůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂƉĂƟĞŶƚƐŝƐĚŝƐĐƵƐƐĞĚĂŶĚƚŚĞƉŽƚĞŶƟĂůƵƐĞŽĨŵŝĐƌŽZEƐĂƐďŝŽŵĂƌŬĞƌƚŽ

ƉƌĞĚŝĐƚ ƚŚĞ ƌŝƐŬ ŽĨ ĂŵƉƵƚĂƟŽŶ ŝŶ ƚŚĞƐĞ ƉĂƟĞŶƚƐ ŝƐ ĞǀĂůƵĂƚĞĚ͘ /Ŷ ƚŚĞ ƉĂƐƚ͕ ŵŝĐƌŽZEƐ ŚĂǀĞ ďĞĞŶ

ƌĞƉŽƌƚĞĚĂƐƐƵŝƚĂďůĞďŝŽŵĂƌŬĞƌƐĨŽƌƚŚĞĚŝĂŐŶŽƐŝƐĂŶĚƉƌŽŐŶŽƐŝƐŽĨĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌĚŝƐĞĂƐĞŝŶĐůƵĚŝŶŐ

ĂĐƵƚĞŵLJŽĐĂƌĚŝĂůŝŶĨĂƌĐƟŽŶ͕ŚĞĂƌƚĨĂŝůƵƌĞĂŶĚƉĞƌŝƉŚĞƌĂůĂƌƚĞƌŝĂůĚŝƐĞĂƐĞ͘DŽƌĞŽǀĞƌ͕ƚŚĞŝƌƐŵĂůůƐŝnjĞ

ƉƌŽƚĞĐƚƐƚŚĞŵĨƌŽŵĞŶĚŽŐĞŶŽƵƐZEĂƐĞĂĐƟǀŝƚLJ͕ǁŚŝĐŚĐŽŶƚƌŝďƵƚĞƐƚŽƚŚĞŚŝŐŚƐƚĂďŝůŝƚLJŽĨŵŝĐƌŽZEƐ͘

In Chapter 8 ǁĞĚĞƚĞƌŵŝŶĞĚůŽĐĂůŵŝĐƌŽZEĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŝŶƐƵďĐƵƚĂŶĞŽƵƐĂŶĚƉĞƌŝǀĂƐĐƵůĂƌĂĚŝƉŽƐĞ

ƟƐƐƵĞƐ ŽĨ ĐƌŝƟĐĂů ůŝŵď ŝƐĐŚĞŵŝĂ ƉĂƟĞŶƚƐ ƚŚĂƚ ƵŶĚĞƌǁĞŶƚ ŵĂũŽƌ ĂŵƉƵƚĂƟŽŶ ĐŽŵƉĂƌĞĚ ƚŽ ŚĞĂůƚŚLJ

ĐŽŶƚƌŽůƐ͘ tŚĞƌĞĂƐŵŽƐƚŵŝĐƌŽZEƐǁĞƌĞĚŽǁŶƌĞŐƵůĂƚĞĚŝŶ ĂŵƉƵƚĂƟŽŶ ƐĂŵƉůĞƐ͕ĞŝŐŚƚŵŝĐƌŽZEƐ

ǁĞƌĞ ƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚ ŝŶ ƚŚĞƐĞ ƉĂƟĞŶƚƐ͘ ^ŝdž ŽƵƚ ŽĨ ĞŝŐŚƚ ƵƉƌĞŐƵůĂƚĞĚ ŵŝĐƌŽZEƐ ďĞůŽŶŐ ƚŽ ƚŚĞ ϭϰƋϯϮ

ŵŝĐƌŽZEĐůƵƐƚĞƌ͘tĞƐŚŽǁƚŚĂƚŝŶĐƌĞĂƐĞĚĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨƚŚĞƐĞƐŝdžϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐĐĂŶďĞƵƐĞĚĂƐ

ďŝŽŵĂƌŬĞƌƐƚŽŝĚĞŶƟĨLJ>/ƉĂƟĞŶƚƐĂƚƌŝƐŬŽĨŵĂũŽƌĂŵƉƵƚĂƟŽŶ͘

dŚĞ ƌĞƐƵůƚƐ ŽĨ Ăůů ƐƚƵĚŝĞƐ ĚĞƐĐƌŝďĞĚ ŝŶ ƚŚŝƐ ƚŚĞƐŝƐ͕ ĂƐ ǁĞůů ĂƐ ĨƵƚƵƌĞ ƉĞƌƐƉĞĐƟǀĞƐ͕ ĂƌĞ ĚŝƐĐƵƐƐĞĚ ŝŶ

Chapter 9 ͘&ŝŐƵƌĞϲƐƵŵŵĂƌŝnjĞƐƚŚĞŽƵƚůŝŶĞŽĨƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐ͘

1

Figure 6.'ƌĂƉŚŝĐĂůƐƵŵŵĂƌLJŽĨƚŚĞƚŚĞƐŝƐŽƵƚůŝŶĞ͘WĂƌƚ/ŽĨƚŚŝƐƚŚĞƐŝƐŝŶǀĞƐƟŐĂƚĞƐƚŚĞƌŽůĞŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐŝŶĚŝīĞƌĞŶƚƉƌŽĐĞƐƐĞƐ

ŽĨǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůůŝŶŐ͕ŶĂŵĞůLJĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐĂŶĚĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕;ĂĐĐĞůĞƌĂƚĞĚͿĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐĂŶĚŝŶƟŵĂůŚLJƉĞƌƉůĂƐŝĂ;ƌĞƐƚĞŶŽƐŝƐͿ͘

WĂƌƚ//ĚŝƐĐƵƐƐĞƐƐĞǀĞƌĂů;ƉŽƐƚͿƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶĂůŵĞĐŚĂŶŝƐŵƐƚŚĂƚĐŽƵůĚƌĞŐƵůĂƚĞϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶ͘/ŶWĂƌƚ///͕ŵŝĐƌŽZE

ĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŝŶĂĚŝƉŽƐĞƟƐƐƵĞŽĨĐƌŝƟĐĂůůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂƉĂƟĞŶƚƐŝƐƐƚƵĚŝĞĚĂŶĚƚŚĞƉŽƐƐŝďůĞƵƐĞŽĨϭϰƋϯϮŵŝĐƌŽZEƐĂƐďŝŽŵĂƌŬĞƌĨŽƌ

ŝĚĞŶƟĮĐĂƟŽŶŽĨĐƌŝƟĐĂůůŝŵďŝƐĐŚĞŵŝĂƉĂƟĞŶƚƐĂƚƌŝƐŬŽĨĂŵƉƵƚĂƟŽŶŝƐĞǀĂůƵĂƚĞĚ͘

14q32 microRNAs in vascular remodelling

arteriogenesis

angiogenesis (accelerated) atherosclerosis

intimal hyperplasia

PART I

PART II

PART III

14q32 microRNAs in adipose tissue

as biomarker

Pri-microRNA

Pre-microRNA

5’

3’

MicroRNA duplex

Mature microRNA

RNA Binding Proteins +/-

+/-

(Post)transcriptional Regulation of 14q32 microRNAs

MicroRNA gene

MEF2A

?

RBPs

22

Reference List

1. 'ŝďďŽŶƐ',͕njĂƵs:͘dŚĞĞŵĞƌŐŝŶŐĐŽŶĐĞƉƚŽĨǀĂƐĐƵůĂƌƌĞŵŽĚĞůŝŶŐ͘N Engl J MedϭϵϵϰDĂLJϭϵ͖ϯϯϬ;ϮϬͿ͗ϭϰϯϭͲϴ͘

2. ZŝƐĂƵt͘DĞĐŚĂŶŝƐŵƐŽĨĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘NatureϭϵϵϳƉƌϭϳ͖ϯϴϲ;ϲϲϮϲͿ͗ϲϳϭͲϰ͘

ϯ͘ ĂƌŵĞůŝĞƚW͘DĞĐŚĂŶŝƐŵƐŽĨĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐĂŶĚĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘Nat MedϮϬϬϬƉƌ͖ϲ;ϰͿ͗ϯϴϵͲϵϱ͘

ϰ͘ ĚĂŵƐZ,͕ůŝƚĂůŽ<͘DŽůĞĐƵůĂƌƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐĂŶĚůLJŵƉŚĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͘Nat Rev Mol Cell BiolϮϬϬϳ:ƵŶ͖ϴ;ϲͿ͗ϰϲϰͲ ϳϴ͘

ϱ͘ &ŽůŬŵĂŶ:͘ŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐŝŶĐĂŶĐĞƌ͕ǀĂƐĐƵůĂƌ͕ƌŚĞƵŵĂƚŽŝĚĂŶĚŽƚŚĞƌĚŝƐĞĂƐĞ͘Nat Medϭϵϵϱ:ĂŶ͖ϭ;ϭͿ͗ϮϳͲϯϭ͘

ϲ͘ DŽƌĞŶŽ WZ͕ WƵƌƵƐŚŽƚŚĂŵĂŶ <Z͕ &ƵƐƚĞƌ s͕ ĐŚĞǀĞƌƌŝ ͕ dƌƵƐnjĐnjLJŶƐŬĂ ,͕ ^ŚĂƌŵĂ ^<͕ Ğƚ Ăů͘ WůĂƋƵĞ ŶĞŽǀĂƐĐƵůĂƌŝnjĂƟŽŶ ŝƐ

ŝŶĐƌĞĂƐĞĚŝŶƌƵƉƚƵƌĞĚĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƟĐůĞƐŝŽŶƐŽĨŚƵŵĂŶĂŽƌƚĂ͗ŝŵƉůŝĐĂƟŽŶƐĨŽƌƉůĂƋƵĞǀƵůŶĞƌĂďŝůŝƚLJ͘ŝƌĐƵůĂƟŽŶϮϬϬϰKĐƚ

ϱ͖ϭϭϬ;ϭϰͿ͗ϮϬϯϮͲϴ͘

7. /ƚŽt͕ƌƌĂƐD͕^ĐŚŽůnj͕tŝŶŬůĞƌ͕,ƚƵŶW͕^ĐŚĂƉĞƌt͘ŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐďƵƚŶŽƚĐŽůůĂƚĞƌĂůŐƌŽǁƚŚŝƐĂƐƐŽĐŝĂƚĞĚǁŝƚŚŝƐĐŚĞŵŝĂ

ĂŌĞƌĨĞŵŽƌĂůĂƌƚĞƌLJŽĐĐůƵƐŝŽŶ͘Am J Physiolϭϵϵϳ^ĞƉ͖Ϯϳϯ;ϯWƚϮͿ͗,ϭϮϱϱͲ,ϭϮϲϱ͘

ϴ͘ ǀĂŶKŽƐƚƌŽŵD͕ǀĂŶKŽƐƚƌŽŵK͕͘YƵĂdžW,͕sĞƌŚĂĂƌD͕,ŽĞĨĞƌ/͘/ŶƐŝŐŚƚƐŝŶƚŽŵĞĐŚĂŶŝƐŵƐďĞŚŝŶĚĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͗ǁŚĂƚ

ĚŽĞƐƚŚĞĨƵƚƵƌĞŚŽůĚ͍J Leukoc BiolϮϬϬϴĞĐ͖ϴϰ;ϲͿ͗ϭϯϳϵͲϵϭ͘

ϵ͘ ƵƐĐŚŵĂŶŶ/͕^ĐŚĂƉĞƌt͘ƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐsĞƌƐƵƐŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͗dǁŽDĞĐŚĂŶŝƐŵƐŽĨsĞƐƐĞů'ƌŽǁƚŚ͘News Physiol Sciϭϵϵϵ

:ƵŶ͖ϭϰ͗ϭϮϭͲϱ͘

10. ǀĂŶtĞĞů͕s͕dŽĞƐZ͕^ĞŐŚĞƌƐ>͕ĞĐŬĞƌƐDD͕ĚĞsƌŝĞƐDZ͕ŝůĞƌƐW,͕ĞƚĂů͘EĂƚƵƌĂůŬŝůůĞƌĐĞůůƐĂŶĚϰнdͲĐĞůůƐŵŽĚƵůĂƚĞ

ĐŽůůĂƚĞƌĂůĂƌƚĞƌLJĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚ͘Arterioscler Thromb Vasc BiolϮϬϬϳEŽǀ͖Ϯϳ;ϭϭͿ͗ϮϯϭϬͲϴ͘

11. ,ĂŶƐƐŽŶ'<͘/ŶŇĂŵŵĂƟŽŶ͕ĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͕ĂŶĚĐŽƌŽŶĂƌLJĂƌƚĞƌLJĚŝƐĞĂƐĞ͘N Engl J MedϮϬϬϱƉƌϮϭ͖ϯϱϮ;ϭϲͿ͗ϭϲϴϱͲϵϱ͘

12. 'ĂůŬŝŶĂ͕>ĞLJ<͘/ŵŵƵŶĞĂŶĚŝŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJŵĞĐŚĂŶŝƐŵƐŽĨĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ;ΎͿ͘Annu Rev ImmunolϮϬϬϵ͖Ϯϳ͗ϭϲϱͲϵϳ͘

ϭϯ͘ Žƚ/͕ĚĞ:ĂŐĞƌ^͕ĞƌŶĞĐŬĞ͕>ŝŶĚƐƚĞĚƚ<͕ǀĂŶĞƌŬĞůd:͕tĞďĞƌ͕ĞƚĂů͘WĞƌŝǀĂƐĐƵůĂƌŵĂƐƚĐĞůůƐƉƌŽŵŽƚĞĂƚŚĞƌŽŐĞŶĞƐŝƐĂŶĚ

ŝŶĚƵĐĞƉůĂƋƵĞĚĞƐƚĂďŝůŝnjĂƟŽŶŝŶĂƉŽůŝƉŽƉƌŽƚĞŝŶͲĚĞĮĐŝĞŶƚŵŝĐĞ͘ŝƌĐƵůĂƟŽŶϮϬϬϳDĂLJϭϱ͖ϭϭϱ;ϭϵͿ͗ϮϱϭϲͲϮϱ͘

ϭϰ͘ ,ĂŶƐƐŽŶ'<͘/ŶŇĂŵŵĂƚŽƌLJŵĞĐŚĂŶŝƐŵƐŝŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͘J Thromb HaemostϮϬϬϵ:Ƶů͖ϳ^ƵƉƉůϭ͗ϯϮϴͲϯϭ͘

ϭϱ͘ 'ŽŵĞnj͕KǁĞŶƐ'<͘^ŵŽŽƚŚŵƵƐĐůĞĐĞůůƉŚĞŶŽƚLJƉŝĐƐǁŝƚĐŚŝŶŐŝŶĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͘Cardiovasc ResϮϬϭϮ:Ƶůϭϱ͖ϵϱ;ϮͿ͗ϭϱϲͲϲϰ͘

ϭϲ͘ &ŝŶŶs͕EĂŬĂŶŽD͕EĂƌƵůĂ:͕<ŽůŽĚŐŝĞ&͕sŝƌŵĂŶŝZ͘ŽŶĐĞƉƚŽĨǀƵůŶĞƌĂďůĞͬƵŶƐƚĂďůĞƉůĂƋƵĞ͘Arterioscler Thromb Vasc Biol ϮϬϭϬ:Ƶů͖ϯϬ;ϳͿ͗ϭϮϴϮͲϵϮ͘

17. ĞŶƚnjŽŶ:&͕KƚƐƵŬĂ&͕sŝƌŵĂŶŝZ͕&ĂůŬ͘DĞĐŚĂŶŝƐŵƐŽĨƉůĂƋƵĞĨŽƌŵĂƟŽŶĂŶĚƌƵƉƚƵƌĞ͘Circ ResϮϬϭϰ:ƵŶϲ͖ϭϭϰ;ϭϮͿ͗ϭϴϱϮͲϲϲ͘

ϭϴ͘ ĞŶŶĞƩ DZ͘ /ŶͲƐƚĞŶƚ ƐƚĞŶŽƐŝƐ͗ ƉĂƚŚŽůŽŐLJ ĂŶĚ ŝŵƉůŝĐĂƟŽŶƐ ĨŽƌ ƚŚĞ ĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚ ŽĨ ĚƌƵŐ ĞůƵƟŶŐ ƐƚĞŶƚƐ͘ Heart ϮϬϬϯ

&Ğď͖ϴϵ;ϮͿ͗ϮϭϴͲϮϰ͘

ϭϵ͘ ůŝĂ>͕ŽŶĚŽƌĞůůŝ'͘ZE;ƉŝͿŐĞŶĞƟĐƐŝŶĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌĚŝƐĞĂƐĞƐ͘J Mol Cell CardiolϮϬϭϱ:ƵůϮϬ͘

20. ĂƌƚĞůW͘DŝĐƌŽZEƐ͗ŐĞŶŽŵŝĐƐ͕ďŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ŵĞĐŚĂŶŝƐŵ͕ĂŶĚĨƵŶĐƟŽŶ͘CellϮϬϬϰ:ĂŶϮϯ͖ϭϭϲ;ϮͿ͗ϮϴϭͲϵϳ͘

21. >ĞĞz͕<ŝŵD͕,ĂŶ:͕zĞŽŵ<,͕>ĞĞ^͕ĂĞŬ^,͕ĞƚĂů͘DŝĐƌŽZEŐĞŶĞƐĂƌĞƚƌĂŶƐĐƌŝďĞĚďLJZEƉŽůLJŵĞƌĂƐĞ//͘EMBO JϮϬϬϰ

KĐƚϭϯ͖Ϯϯ;ϮϬͿ͗ϰϬϱϭͲϲϬ͘

22. >ĞĞz͕ŚŶ͕,ĂŶ:͕ŚŽŝ,͕<ŝŵ:͕zŝŵ:͕ĞƚĂů͘dŚĞŶƵĐůĞĂƌZEĂƐĞ///ƌŽƐŚĂŝŶŝƟĂƚĞƐŵŝĐƌŽZEƉƌŽĐĞƐƐŝŶŐ͘NatureϮϬϬϯ^ĞƉ

Ϯϱ͖ϰϮϱ;ϲϵϱϲͿ͗ϰϭϱͲϵ͘

Ϯϯ͘ <ƌŽů:͕>ŽĞĚŝŐĞ/͕&ŝůŝƉŽǁŝĐnjt͘dŚĞǁŝĚĞƐƉƌĞĂĚƌĞŐƵůĂƟŽŶŽĨŵŝĐƌŽZEďŝŽŐĞŶĞƐŝƐ͕ĨƵŶĐƟŽŶĂŶĚĚĞĐĂLJ͘Nat Rev Genet 2010

^ĞƉ͖ϭϭ;ϵͿ͗ϱϵϳͲϲϭϬ͘

Ϯϰ͘ zĂŶŐy͕Ƶtt͕>ŝ,͕>ŝƵ&͕<ŚŽƌƐŚŝĚŝ͕ZƵƚŶĂŵ:͕ĞƚĂů͘ŽƚŚŵĂƚƵƌĞŵŝZͲϭϳͲϱƉĂŶĚƉĂƐƐĞŶŐĞƌƐƚƌĂŶĚŵŝZͲϭϳͲϯƉƚĂƌŐĞƚ

d/DWϯĂŶĚŝŶĚƵĐĞƉƌŽƐƚĂƚĞƚƵŵŽƌŐƌŽǁƚŚĂŶĚŝŶǀĂƐŝŽŶ͘Nucleic Acids ResϮϬϭϯEŽǀ͖ϰϭ;ϮϭͿ͗ϵϲϴϴͲϳϬϰ͘

Ϯϱ͘ ^ĐŚŽďĞƌ͕EĂnjĂƌŝͲ:ĂŚĂŶƟŐŚD͕tĞŝz͕ŝĚnjŚĞŬŽǀ<͕'ƌĞŵƐĞ&͕'ƌŽŵŵĞƐ:͕ĞƚĂů͘DŝĐƌŽZEͲϭϮϲͲϱƉƉƌŽŵŽƚĞƐĞŶĚŽƚŚĞůŝĂů

ƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶĂŶĚůŝŵŝƚƐĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐďLJƐƵƉƉƌĞƐƐŝŶŐůŬϭ͘Nat MedϮϬϭϰƉƌ͖ϮϬ;ϰͿ͗ϯϲϴͲϳϲ͘

Ϯϲ͘ ŽĞŶĐŚ:'͕^ŚĂƌƉW͘^ƉĞĐŝĮĐŝƚLJŽĨŵŝĐƌŽZEƚĂƌŐĞƚƐĞůĞĐƟŽŶŝŶƚƌĂŶƐůĂƟŽŶĂůƌĞƉƌĞƐƐŝŽŶ͘Genes DevϮϬϬϰDĂƌϭ͖ϭϴ;ϱͿ͗ϱϬϰͲ 11.

27. tŝĞŶŚŽůĚƐ͕<ůŽŽƐƚĞƌŵĂŶtW͕DŝƐŬĂ͕ůǀĂƌĞnjͲ^ĂĂǀĞĚƌĂ͕ĞƌĞnjŝŬŽǀ͕ĚĞ͕ĞƚĂů͘DŝĐƌŽZEĞdžƉƌĞƐƐŝŽŶŝŶnjĞďƌĂĮƐŚ

ĞŵďƌLJŽŶŝĐĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚ͘ScienceϮϬϬϱ:Ƶůϴ͖ϯϬϵ;ϱϳϯϮͿ͗ϯϭϬͲϭ͘

Ϯϴ͘ :ĂŵĂůƵĚĚŝŶD^͕tĞĂŬůĞLJ^D͕ŚĂŶŐ>͕<ŽƵŐŝĂƐW͕>ŝŶW,͕zĂŽY͕ĞƚĂů͘ŵŝZEƐ͗ƌŽůĞƐĂŶĚĐůŝŶŝĐĂůĂƉƉůŝĐĂƟŽŶƐŝŶǀĂƐĐƵůĂƌ

ĚŝƐĞĂƐĞ͘Expert Rev Mol DiagnϮϬϭϭ:ĂŶ͖ϭϭ;ϭͿ͗ϳϵͲϴϵ͘

Ϯϵ͘ ZĂLJŶĞƌ<:͕^ŚĞĞĚLJ&:͕ƐĂƵ͕,ƵƐƐĂŝŶ&E͕dĞŵĞůZ͕WĂƌĂƚŚĂƚŚ^͕ĞƚĂů͘ŶƚĂŐŽŶŝƐŵŽĨŵŝZͲϯϯŝŶŵŝĐĞƉƌŽŵŽƚĞƐƌĞǀĞƌƐĞ

ĐŚŽůĞƐƚĞƌŽůƚƌĂŶƐƉŽƌƚĂŶĚƌĞŐƌĞƐƐŝŽŶŽĨĂƚŚĞƌŽƐĐůĞƌŽƐŝƐ͘J Clin InvestϮϬϭϭ:Ƶů͖ϭϮϭ;ϳͿ͗ϮϵϮϭͲϯϭ͘

ϯϬ͘ ŽŶĂƵĞƌ ͕ ĂƌŵŽŶĂ '͕ /ǁĂƐĂŬŝ D͕ DŝŽŶĞ D͕ <ŽLJĂŶĂŐŝ D͕ &ŝƐĐŚĞƌ ͕ Ğƚ Ăů͘ DŝĐƌŽZEͲϵϮĂ ĐŽŶƚƌŽůƐ ĂŶŐŝŽŐĞŶĞƐŝƐ ĂŶĚ

ĨƵŶĐƟŽŶĂůƌĞĐŽǀĞƌLJŽĨŝƐĐŚĞŵŝĐƟƐƐƵĞƐŝŶŵŝĐĞ͘ScienceϮϬϬϵ:ƵŶϮϲ͖ϯϮϰ;ϱϵϯϱͿ͗ϭϳϭϬͲϯ͘

ϯϭ͘ >ĂŶĚƐŬƌŽŶĞƌͲŝŐĞƌ^͕YŝƵ͕WĞƌƌŽƩĂW͕^ŝƌĂŐƵƐĂD͕>ĞĞDz͕hůƌŝĐŚs͕ĞƚĂů͘ŶĚŽƚŚĞůŝĂů ŵŝZͲϭϳĂƉƉƌŽdžŝŵĂƚĞůLJϵϮĐůƵƐƚĞƌ

ŶĞŐĂƟǀĞůLJƌĞŐƵůĂƚĞƐĂƌƚĞƌŝŽŐĞŶĞƐŝƐǀŝĂŵŝZEͲϭϵƌĞƉƌĞƐƐŝŽŶŽĨtEdƐŝŐŶĂůŝŶŐ͘Proc Natl Acad SciϮϬϭϱKĐƚϭϯ͖ϭϭϮ;ϰϭͿ͗ϭϮϴϭϮͲ 7.

ϯϮ͘ tƵt͕yŝĂŽ,͕>ĂŐƵŶĂͲ&ĞƌŶĂŶĚĞnj͕sŝůůĂƌƌĞĂů'͕:ƌ͕͘tĂŶŐ<͕'ĞĂƌLJ''͕ĞƚĂů͘&ůŽǁͲĞƉĞŶĚĞŶƚZĞŐƵůĂƟŽŶŽĨ<ƌƵƉƉĞůͲ>ŝŬĞ

&ĂĐƚŽƌϮ/ƐDĞĚŝĂƚĞĚďLJDŝĐƌŽZEͲϵϮĂ͘ŝƌĐƵůĂƟŽŶϮϬϭϭƵŐϮ͖ϭϮϰ;ϱͿ͗ϲϯϯͲϰϭ͘

ϯϯ͘ /ĂĐŽŶĞƫ͕WŽůŝŵĞŶŝ͕^ŽƌƌĞŶƟŶŽ^͕^ĂďĂƟŶŽ:͕WŝƌŽŶƟ'͕ƐƉŽƐŝƚŽ'͕ĞƚĂů͘/ŶŚŝďŝƟŽŶŽĨŵŝZͲϵϮĂŝŶĐƌĞĂƐĞƐĞŶĚŽƚŚĞůŝĂů

ƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶĂŶĚŵŝŐƌĂƟŽŶŝŶǀŝƚƌŽĂƐǁĞůůĂƐƌĞĚƵĐĞƐŶĞŽŝŶƟŵĂůƉƌŽůŝĨĞƌĂƟŽŶŝŶǀŝǀŽĂŌĞƌǀĂƐĐƵůĂƌŝŶũƵƌLJ͘Basic Res Cardiol ϮϬϭϮ^ĞƉ͖ϭϬϳ;ϱͿ͗Ϯϵϲ͘

ϯϰ͘ ZŝnjŬŝ'͕ŽLJĞƌ>͘>ŶĐŝŶŐĞƉŝŐĞŶĞƟĐĐŽŶƚƌŽůŽĨƚƌĂŶƐĐƌŝƉƟŽŶƚŽĐĂƌĚŝŽǀĂƐĐƵůĂƌĚĞǀĞůŽƉŵĞŶƚĂŶĚĚŝƐĞĂƐĞ͘Circ ResϮϬϭϱ:Ƶů

ϯ͖ϭϭϳ;ϮͿ͗ϭϵϮͲϮϬϲ͘