Massive deep-frozen bone allografts : contamination, immunogenicity and clinical use

Hele tekst

(1)Massive deep-frozen bone allografts : contamination, immunogenicity and clinical use Deijkers, Ruud. Citation Deijkers, R. (2005, January 18). Massive deep-frozen bone allografts : contamination, immunogenicity and clinical use. Retrieved from https://hdl.handle.net/1887/3765 Version:. Corrected Publisher’s Version. License:. Licence agreement concerning inclusion of doctoral thesis in the Institutional Repository of the University of Leiden. Downloaded from:. https://hdl.handle.net/1887/3765. Note: To cite this publication please use the final published version (if applicable)..

(2) . *OHW[LY. /\THUIVULHSSVNYHM[ZJHUPUK\JL ;JLSSZ^P[OOPNOHMÄUP[`MVYKVUVY HU[PNLUZ. 3-.%FJKLFST (+#PVNBp &.8WBOEFS.FFS1SJOTp 1&)VZTNBOT ").5BNJOJBV ')+$MBBTp 'SPN-FJEFO6OJWFSTJUZ.FEJDBM$FOUFS -FJEFO ǲF/FUIFSMBOET p. %FQBSUNFOUPG0SUIPQBFEJD4VSHFSZ -FJEFO6OJWFSTJUZ.FEJDBM$FOUFS %FQBSUNFOUPG*NNVOPIBFNBUPMPHZBOE#MPPE#BOL -FJEFO6OJWFSTJUZ.FEJDBM$FOUFS. +PVSOBMPG#POFBOE+PJOU4VSHFSZ #S ðøøø÷ð#ôò÷óó.

(3) òñ$IBQUFSò. #POFBMMPHSBGUTJOEVDFIJHIBċOJUZ5DFMMT. !"342!#4. ).42/$5#4)/.. 8FBOBMZTFEUIFDFMMVMBSJNNVOFSFTQPOTFJOUFOUSBOTQMBOUBUJPOTPGEJG GFSFOUNBTTJWFCPOFBMMPHSBGUT PGXIJDImWFIBEBQPPSDMJOJDBMPVUDPNF $ZUPUPYJD5MZNQIPDZUFT $5- BOE5IFMQFSMZNQIPDZUFTBHBJOTUNJT NBUDIFEEPOPSBOUJHFOTXFSFGPVOEJOBMMQBUJFOUT.PSFJNQPSUBOUMZ $5-XJUIBIJHIBċOJUZGPSEPOPSBOUJHFOTXFSFGPVOEJOmWFDBTFT )JHIBċOJUZ$5-OFFEOP$%÷NPMFDVMFUPTUBCJMJTFUIFBOUJHFOCJOE JOHBOEBSFTUSPOHMZBTTPDJBUFEXJUISFKFDUJPOPGIFBSUBOEDPSOFBMUSBOT QMBOUT&WFOBGUFSSFNPWBMPGNPTUPGUIFCPOFNBSSPXDFMMT XFGPVOE IJHIBċOJUZ$5-BOEIJHI5)GSFRVFODJFTɨJT5DFMMSFTQPOTFDPVME CFEFUFDUFEPWFSBQFSJPEPGZFBST 8FDPODMVEFUIBUGSP[FOCPOFBMMPHSBGUTDBOJOEVDFIJHIBċOJUZ EPOPSTQFDJmD$5-ɨFQSFTFOUBTTBZBMMPXTRVBMJmDBUJPOBOERVBOUJm DBUJPOPGUIFMFWFMTPG$5-BOE5)JOUIFCMPPEɨJTBQQSPBDINBZCF IFMQGVMJOTUVEZJOHUIFFĊFDUPGUIFJNNVOFSFTQPOTFPOUIFPVUDPNFPG UIFHSBGU. 'SP[FOCPOFBMMPHSBGUTBSFVTFEXJUIPVU)-"NBUDIJOHPSJNNVOP TVQQSFTTJWFESVHT%FFQGSFF[JOHLJMMTNPTUCPOFDFMMTBOESFEVDFTUIF JNNVOPHFOJDJUZTJHOJmDBOUMZ CVUGSP[FOCPOFBMMPHSBGUTNBZTUJMMFWPLF BOJNNVOFSFTQPOTF ðöɨFQSFDJTFNFDIBOJTNPGUIJTBOEJUTFĊFDUPO JODPSQPSBUJPOPGUIFHSBGUBSFQPPSMZVOEFSTUPPE %POPSTQFDJmDBOUJCPEJFTBOEDFMMNFEJBUFEJNNVOJUZIBWFCFFO GPVOEBGUFSUSBOTQMBOUBUJPOPGGSP[FOCPOFBMMPHSBGUT ò ô÷BTIBWFIJTUPMPHJ DBMTJHOTTVHHFTUJWFPGJNNVOPMPHJDBMSFKFDUJPO ô ø"OJNBMTUVEJFTIBWF TIPXOBCFOFmDJBMFĊFDUPGIJTUPDPNQBUJCJMJUZNBUDIJOHBOEUIFVTFPG JNNVOPTVQQSFTTJWFESVHTPOUIFJODPSQPSBUJPOPGGSP[FOBMMPHSBGUT ðï ðð CVUJONBOUIFSFBSFTUJMMEJċDVMUJFTJODPSSFMBUJOHUIFJNNVOPMPHJDBM SFTQPOTFXJUIUIFPVUDPNFPGUIFHSBGUô ö ÷ $ISPOJDSFKFDUJPOPGBMMPHSBGUTJTDPOTJEFSFEUPCFNFEJBUFEQSJNBS JMZCZ5DFMMTSBUIFSUIBOBOUJCPEJFT ðñðôɨFSFGPSFUIFNPTUEJSFDUXBZ UPBTTFTTUIFJNQPSUBODFPGUIFJNNVOFSFTQPOTFJOUSBOTQMBOUBUJPOPG BCPOFHSBGUJTUPBOBMZTF5DFMMDIBSBDUFSJTUJDTBOEJODPSQPSBUJPOPGUIF HSBGUɨJTIZQPUIFTJTJTTVQQPSUFECZUIFBDDFQUFEDFOUSBMSPMFPG5DFMMT BOEUIFJSTFDSFUFEDZUPLJOFTJOUIFSFHVMBUJPOPGCPOFSFNPEFMMJOH ó ðõ 5DFMMTDBOCFEJWJEFEJOUPUXPTVCTFUTXJUIEJTUJODUJWFGVODUJPOT DZUPUPYJD5MZNQIPDZUFT $5- XIJDISFDPHOJTF)-"DMBTT*BOUJHFOT BOE5IFMQFSMZNQIPDZUFT 5) XIJDISFDPHOJTF)-"DMBTT**BOUJHFOT ɨFNBKPSGVODUJPOPGUIF$5-JOUIFBMMPHSBGUSFTQPOTFJTQSFTVNBCMZUP BDUBTDZUPUPYJDFĊFDUPSDFMMTDBVTJOHUJTTVFEBNBHF0OFPGUIFGVODUJPOT PG5)DFMMTJTUPIFMQJOUIFNBUVSBUJPOPG$5-#JOEJOHPGGPSFJHOBOUJ HFOUPUIF5DFMMSFDFQUPSJTTUBCJMJTFECZUIF$%÷NPMFDVMFPOUIF$5- BOECZUIF$%óNPMFDVMFPOUIF5) 4UJNVMBUJPOJOWJWPXJUIEPOPSBOUJHFOT QSJNJOH MFBETUPUIFEFWFM PQNFOUPG$5-SFTJTUBOUUPJOIJCJUJPOCZNPOPDMPOBMBOUJCPEJFTBHBJOTU $%÷ BOUJ$%÷ ðöðø*ODPOUSBTUUPOBÕWF$5- UIFTFQSJNFE$5-BQQFBS UPIBWFBIJHIBċOJUZGPSEPOPSBOUJHFOTTJODFUIFSFJTOPOFFEGPS$%÷ NPMFDVMFTUPTUBCJMJTFBOUJHFOCJOEJOH ðö*OIFBSUBOEDPSOFBMUSBOTQMBOUT UIFQSFTFODFPGIJHIBċOJUZ$5-JOUIFQFSJQIFSBMCMPPEIBTCFFOTUSPOHMZ DPSSFMBUFEXJUIJNNVOPMPHJDBMSFKFDUJPO ð÷ñï *ODSFBTFEGSFRVFODJFTPGDJS DVMBUJOHEPOPSTQFDJmD5)IBWFBMTPCFFOBTTPDJBUFEXJUIJNNVOPMPHJDBM SFKFDUJPOPGIFBSUUSBOTQMBOUT ñð. òò.

(4) òó$IBQUFSò. #POFBMMPHSBGUTJOEVDFIJHIBċOJUZ5DFMMT. 8FIBWFTUVEJFEXIFUIFSTVDIIJHIBċOJUZDFMMTBSFQSFTFOUJOIVNBO SFDJQJFOUTPGGSP[FOCPOFBMMPHSBGUT BOEJGRVBMJmDBUJPOBOERVBOUJmDBUJPO PGUIFDFMMVMBSJNNVOFSFTQPOTFXFSFQPTTJCMFɨFGSFRVFODJFTPGDJSDV MBUJOH$5-BOE5)DFMMTEJSFDUFEBHBJOTUNJTNBUDIFEEPOPSBOUJHFOT XFSFEFUFSNJOFECZMJNJUJOHEJMVUJPOBOBMZTJT -%" BTTBZTɨFBċOJUZ PGEPOPSTQFDJmD$5-XBTEFUFSNJOFEPOUIFCBTJTPGUIFJSSFTJTUBODFJO WJUSPUPBOUJ$%÷. CFDBVTFPGBGSBDUVSFBOEBOFXHSBGUXBTUSBOTQMBOUFE DBTFð# *OPOF QBUJFOU DBTFô"# BDISPOJDJOGFDUJPOEFWFMPQFEñóNPOUITBGUFSSFmY BUJPOBOEBNQVUBUJPOXBTOFDFTTBSZ/POVOJPOPDDVSSFEJOGPVSQBUJFOUT DBTFTð" ó ô" õ" ɨFZXFSFUSFBUFETVDDFTTGVMMZCZBVUPHFOPVTHSBGU JOHBOESFmYBUJPO. 0!4)%.43!.$-%4(/$3 8FTUVEJFETFWFOQBUJFOUTXIPIBESFDFJWFEBUPUBMPGUFONBTTJWFGSP[FO BMMPHSBGUTBGUFSSFTFDUJPOPGBQSJNBSZCPOFUVNPVS 5BCMF* 3FDJQJFOUT PGEJĊFSFOUTJ[FTBOEUZQFTPGBMMPHSBGUXFSFTFMFDUFEUPFWBMVBUFUIFFĊFDU PGUIFBOUJHFOMPBEPOUIFJNNVOPHFOJDJUZ4JYHSBGUTXFSFPTUFPBSUJDVMBS BOEUXPXFSFBMMPHSBGUQSPTUIFTJTDPNQPTJUFT DBTFTð# õ" 0GUIFMBUUFS UIFDBSUJMBHFBOE NPTU CPOFNBSSPXDFMMTXFSFSFNPWFE5XPmCVMBS BMMPHSBGUTXFSFVTFEGPSJOUSBNFEVMMBSZmYBUJPOPGUIFBMMPHSBGUɨFUXP GFNBMFQBUJFOUTIBEOPUCFFOFYQPTFEUPBMMPBOUJHFOTCZQSFHOBODZ5XP QBUJFOUT DBTFTð# ô# SFDFJWFECMPPEUSBOTGVTJPOTCFGPSFBOEGPVS DBTFT ð" ò ô" õ BGUFSCPOFUSBOTQMBOUBUJPO'PVSIBEIBEDIFNPUIFSBQZCVU UIFJSXIJUFCMPPEDPVOUTXFSFXJUIJOOPSNBMMJNJUTBUUIFUJNFPGUIF TUVEZ "MMHSBGUT /FUIFSMBOET#POFCBOL'PVOEBUJPO /#' -FJEFO ɨF /FUIFSMBOET XFSFQSPDFTTFEVOEFSTUFSJMFDPOEJUJPOTBOETUPSFEBU÷ïP$ XJUIPVUBEEJUJPOBMTUFSJMJTBUJPOɨFBSUJDVMBSDBSUJMBHFXBTQSFTFSWFEXJUI ÷ǷEJNFUIZMTVMQIPYJEFɨFmCVMBSHSBGUTXFSFQSPDFTTFE EFGBUUFEBOE XBTIFEJOø÷ǷFUIBOPMɨFTFMFDUJPOPGUIFHSBGUXBTCBTFEPOBSBEJPMPH JDBMDPNQBSJTPOPGUIFTJ[FPGUIFBMMPHSBGUBOEUIFSFTFDUFECPOF 5BCMF* "MMEPOPSTBOESFDJQJFOUTXFSFUZQFEGPS)-"DMBTT*BOEDMBTT**BOUJHFOT CFGPSFHSBGUJOHVTJOHTUBOEBSETFSPMPHJDBMNFUIPET5SBOTQMBOUBUJPOXBT QFSGPSNFEXJUIPVUBOZSFTQFDUUPUIF)-"NBUDI 5BCMF** ɨFQBUJFOUTXFSFGPMMPXFEGPSNPSFUIBOUISFFZFBST8FFTQFDJBMMZ MPPLFEGPSDPNQMJDBUJPOTXIJDIXFSFQPUFOUJBMMZSFMBUFEUPBOJNNVOF SFTQPOTFBHBJOTUUIFBMMPHSBGU TVDIBTJOBEFRVBUFVOJPO NBTTJWFSFTPSQ UJPO GSBDUVSFTBOEJOGFDUJPOT ññ8FDPOTJEFSFEUIFPVUDPNFPGUIFHSBGUUP CFHPPEJGIPTUHSBGUVOJPOUPPLQMBDFXJUIJOPOFZFBSBOEOPDPNQMJDB UJPOTPDDVSSFE'JWFUSBOTQMBOUBUJPOTIBEBHPPEHSBGUPVUDPNFBOEmWF XFSFQPPS 5BCMF* 0OFBMMPHSBGUXBTSFTFDUFEñ÷NPOUITBGUFSPQFSBUJPO. òô. #OLLECTIONOFBLOODSAMPLESANDISOLATIONOFPERIPHERALBLOOD MONONUCLEARCELLS 4FSBGPSBOUJCPEZEFUFSNJOBUJPOBOENPOPOVDMFBSDFMMTGPSUIF-%"BTTBZ XFSFJTPMBUFEðUPóðNPOUITBGUFSUSBOTQMBOUBUJPO !NTIBODYFORMATION ɨFTFSBGSPNFBDIQBUJFOUXFSFUFTUFEBHBJOTUBQBOFMPGBUMFBTUôï)-" UZQFEMZNQIPDZUFEPOPSTɨFSFBDUJWJUZXBTFYQSFTTFEBTBQFSDFOUBHFPG QBOFMSFBDUJWFBOUJCPEJFT 13" #OMBINEDLIMITINGDILUTIONANALYSIS,$! ASSAY 1SFDVSTPSGSFRVFODJFTPG$5-BOE5)XFSFEFUFSNJOFEJOBDPNCJOFE -%"BTTBZ 'JHð ñò1FSJQIFSBMCMPPENPOPOVDMFBSDFMMTPGQBUJFOUTXFSF VTFEBTSFTQPOEFSDFMMTɨFZXFSFDVMUVSFEJO31.*ðõóï %VUDINPEJ mDBUJPO (JCDP 1BJTMFZ 6, XJUIòO.-HMVUBNJOF (JCDP BOEðïǷ QPPMFEIVNBOTFSVN SFGFSSFEUPBTDPNQMFUFNFEJVN ɨFTFSFTQPOEFS DFMMTXFSFTFUVQJOðñSFQMJDBUFXFMMTBUóïïïïDFMMTQFSXFMMJOôïMPG NFEJVNXJUITFSJBMUXPGPMEEJMVUJPOBDSPTTUXPøõXFMM7CPUUPNQMBUFT (SFJOFS 'SJDLFOIBVTFO (FSNBOZ $PODFOUSBUJPOTPGSFTQPOEFSDFMMT UIFSFGPSFSBOHFEGSPNóïïïïUPõñôDFMMTQFSXFMM$POUSPMXFMMTXFSF QSFQBSFEDPOUBJOJOHOPDFMMT "TTUJNVMBUPSDFMMTXFVTFEDFMMTPCUBJOFEGSPNUIFEPOPSTTQMFFO 8IFOTQMFOJDDFMMTXFSFOPUBWBJMBCMFXFVTFEQFSJQIFSBMCMPPENPOP OVDMFBSDFMMTGSPNIFBMUIZWPMVOUFFSTXIPDBSSJFE)-"BOUJHFOTGPSXIJDI UIFCPOFEPOPSXBTNJTNBUDIFEUPUIFQBUJFOUɨFTUJNVMBUPSDFMMTXFSF JSSBEJBUFEXJUIôï(ZUPQSFWFOUQSPMJGFSBUJPOɨFZXFSFBEEFEUPUIF SFTQPOEFSDFMMTBUôïïïïDFMMTQFSXFMMJOôïMPGDPNQMFUFNFEJVN "GUFSUISFFEBZTPGDVMUVSFBUòöP$JOBIVNJEJmFEBUNPTQIFSFDPOUBJO JOHôǷ$0 ñ UIFTVQFSOBUBOUTXFSFIBSWFTUFE ÷ïMQFSXFMM BOEUSBOT .

(5) òõ$IBQUFSò. #POFBMMPHSBGUTJOEVDFIJHIBċOJUZ5DFMMT. GFSSFEUP6CPUUPNøõXFMMQMBUFT $PTUBS $BNCSJEHF .BTTBDIVTFUUT 5PEFUFSNJOF5)GSFRVFODJFT UIFTVQFSOBUBOUTXFSFUFTUFEGPSUIFQSFT FODFPGJOUFSMFVLJOñ *-ñ JOUIF$5--ñCJPBTTBZBTEFTDSJCFECFMPX ɨFSFNBJOJOHDFMMTXFSFUSBOTGFSSFEUP6CPUUPNQMBUFTBOEXFSFDVM UVSFEGPSBOPUIFSTFWFOEBZTBUòöP$JOBIVNJEJmFEBUNPTQIFSFDPOUBJO JOHôǷ$0ñJOUIFQSFTFODFPGñï6NMPG*-ñ IVNBOSFDPNCJOBOU*-ñ $FUVT "NTUFSEBN ɨF/FUIFSMBOET JOñïïMXFMMPGDPNQMFUFNFEJVN 5PEFUFSNJOF$5-GSFRVFODJFT BDFMMNFEJBUFEMZNQIPMZTJT $.- BTTBZ XBTQFSGPSNFEBTEFTDSJCFECFMPX. #4,, BIO ASSAY. òö. 5PEFUFSNJOFUIFBNPVOUPG*-ñQSFTFOUJOUIFTVQFSOBUBOUTXFVTFEBO *-ñEFQFOEFOUNVSJOF$5--ñDFMMMJOFñóɨFTVQFSOBUBOUTXFSFUIBXFE BOE$5--ñDFMMTXIJDIIBECFFODVMUVSFEJO*-ñGSFFNFEJVNGPSñó IPVSTXFSFBEEFEBUòïïïDFMMTXFMMUPUIFQMBUFT"GUFSJODVCBUJPOGPS UISFFEBZTBUòö P$BEEFEMZJOHTUBJOJOHRVFODIJOHNFEJVNDPOUBJOJOH 5SJUPO9ðïï 'MVLB #VDIT 4XJU[FSMBOE JOL -FJU[ 8FU[MBS (FSNBOZ BOEQSPQJEJVNJPEJEF 4JHNB 4U-PVJT .JTTPVSJ JO&%5"CVĊFSɨF QMBUFTXFSFSFBECZBVUPNBUFEnVPSFTDFODFNJDSPTDPQZ -FJDB1BUJNFE 8FU[MBS (FSNBOZ XIJDINFBTVSFTQIPUPNFUFSWBMVFT N7 UPEFUFSNJOF UIFOVNCFSPGQSPQJEJVNJPEJEFTUBJOFEOVDMFBUFEDFMMTBOEUIVTUIFQSP. 4ABLE)$ETAILSOFTHESEVENPATIENTSWHOHADUNDERGONE TRANSPLANTATIONSOFFROZENBONEALLOGRAFTS (SBGUPVUDPNFp $BTF. "HF ZS. (FOEFS. "MMPHSBGUMFOHUI DN. 5JCJBQSPY ǺǻǾ. 5JCJBQSPY ǺǻǾ. 'FNVSEJTU Ȁ. 5JCJBQSPY Ǻǹ. 'FNVSEJTU Ǻȁ. 5JCJBQSPY ǺǾ. 3FDPOTUSVDUJPO. 'JU 'JYBUJPO. "EKVWBOU UIFSBQZ. 6OJPO. $PNQMJDBUJPOT. 4FDPOEBSZQSPDFEVSFT. 'PMMPX VQ NUI. 0TUFPBSUJDVMBS. %JTDSFQBODZ. $5q. /POVOJPO. 'BUJHVFGSBDUVSFHSBGUBUǻȁNUI. ǻȁ. "MMPHSBGUQSPTUIFTJT. (PPE. . ǹǾZS. . "VUPHSBGUBUǺǻNUI /FXHSBGUBUǻȁNUI . 0TUFPBSUJDVMBS. (PPE. . ǺZS. . . Ǿǹ. 0TUFPBSUJDVMBS. %JTDSFQBODZ. $5. ǺZS. $PSSFDUJPOPTUFPUPNZ. ǽǽ. 0TUFPBSUJDVMBS. (PPE. . /POVOJPO. (FOV7BSVNEVFUPTVCDIPOESBM DPMMBQTF . "VUPHSBGUBUȀNUI. ǽǼ. 0TUFPBSUJDVMBS. %JTDSFQBODZ 6OTUBCMF. $5. /POVOJPO. 5SBVNBUJDGSBDUVSFBUǺǺNUI *OGFDUJPOBUǼǾNUI. ǽǺ. Ǻ". ǺǾ. '. Ǻ#. ǺȀ. '. ǻ. ǼǺ. '. Ǽ. ǽǿ. .. ǽ. ǻȂ. .. Ǿ". ǾǼ. .. Ǿ#. Ǿǽ. .. 'JCVMB. *OUSBNFEVMMBSZ. . . ǺZS. *OGFDUJPOBUǻǽNUI. 3FmYBUJPOQMVTmCVMBSBMMP HSBGU JOUSBNFEVMMBSZ. "NQVUBUJPOBUǽǺNUI "NQVUBUJPOBUǼǹNUI. ǿ". ǻǺ. .. "MMPHSBGUQSPTUIFTJT. (PPE. $5. /POVOJPO. 3FTPSQUJPO DPSUJDBMFSPTJPOT. "VUPHSBGUBUǽNUI. ǿ#. ǻǺ. .. )VNFSVT Ǻǻ. 'JCVMB. *OUSBNFEVMMBSZ. . . . . . ǽǹ. Ȁ. ǻǻ. .. 3BEJVTQSPY ȀǾ. 0TUFPBSUJDVMBS. (PPE. . ǺZS. . . ǼȂ. mUJTDPOTJEFSFEHPPEJGEJTDSFQBODZPGBSUJDVMBSTVSGBDFTJTMFTTUIBOóNNBOEUIFHBQBUUIF PTUFPTZOUIFTJTTJUFJTMFTTUIBOðôNN pHSBGUPVUDPNFJTDPOTJEFSFEHPPEJGVOJPOUPPLQMBDFXJUIJOPOFZFBSBOEOPDPNQMJDBUJPOT PDDVSSFE qDIFNPUIFSBQZ. ǼȀ. Ǽǹ.

(6) ò÷$IBQUFSò. #POFBMMPHSBGUTJOEVDFIJHIBċOJUZ5DFMMT 2ESPONDER. MJGFSBUJPOPGUIF$5--ñDFMMTɨFQSPMJGFSBUJPOPGUIFMBUUFSJTEFQFOEFOU POUIFBNPVOUPG*-ñQSFTFOUJOUIFTVQFSOBUBOUTBOEJTBNFBTVSFPGUIF OVNCFSPG*-ñTFDSFUJOHDFMMTQSFTFOUJOUIFSFTQPOEFSDFMMGSBDUJPO5) DFMMTBSFDPOTJEFSFEUPCFNBJOMZSFTQPOTJCMFGPSUIFQSPEVDUJPOPG*-ñ ñ. 0ATIENT ,YMPHO CYTE. $BTF Ǻ". " ǻ. # ȁ. %3 Ǽ ǺǾ. Ǻ#. Ǽǻ. ǺȀ. 6OLOPXO. ǻ. Ǽǻ. ǿǺ. ǽ. Ǽ. ǻ. ǽǽ Ǽȁ. ǺǼ Ȁ. ǽ. ǻ ǻǽ. ǽǽ Ǽȁ. Ȁ. Ǿ". ǻǽ ǻǿ. Ǿǹ. /POF. Ǿ#. Ǻ. Ȁ ȁ. ǺǾ ǺȀ. ǿ". Ǻ ǻǽ. Ǻȁ ǼǾ. ǺǾ ǺǺ. ǿ#. ǻȂ Ǽǻ. ǿǺ. ǽ Ȁ. ǻ. Ȁ. ǺǾ. Ȁ. 1BOFM SFBDUJWF 5JNF BOUJ CMPPE

(7) BOUJ$%ó CPEJFT TBNQMF ƧJOIJCJUJPO ǲGSFR Ƨ. NUI p ǻǾȁ Ǻǿ Ǿǹ Ǽǽ ǽ Ȃǻ Ȃ ȁȀ. ǺǽǻǾ ǺǼ Ȃǿ Ǿǹ Ȁ ǹ Ǻǹǹ. /5Ǻ ǹ Ǻǹǹ. ǹ ǽǺ Ǻǽǿ ǺǼ ǾȂ. ǹ Ǽǻ ǽȂǾ ǽǼ ǾǺ. ȁǿ ǼǺ ǾȂȀ ǹ Ǻǹǹ /5sǺ Ǻǻ ȁ ȀǾ. /5sǻ ǺǺǿ ǽǾ. /5s Ǻ ǺǹǾ /5s ȀȀ ǺǺ ȁǾǼ /5s ȀȀ ǺǺ ǺǿȀ ǼǺǼ ǻȀ ǿȀ Ǻǽ Ǻǽǿ ǿǼ Ǻǽǹ ǽȁ. ǾǺ. 5FTUFE)-"NJTNBUDIFT "ǻ #ȁq "ǻq #ȁq %3Ǽ %3ǺǾq #ǺȀ "Ǽǻ #ǿǺ %3ǽf #Ǽȁ #ǽǽ %3ǺǼ %3Ȁf #Ǽȁ #ǽǽ %3Ȁf "ǻǿ "ǻǽ "Ǻ #Ȁ #ȁ %3ǺǾ %3ǺȀf %3ǺǾ %3ǺǺq %3ǽ %3Ȁq "ǻ #Ȁ "ǻ #Ȁ %3ǺǾf. Ǽǽǽ ǼȂ ǻǹ Ǽǻ ȁȀ ȁ Ǽǻ ȁǹ. ǽǼǺ ǼȂǿ ǻȀǺ. GSFRVFODJFTQFSðïõUFTUFEQFSJQIFSBMCMPPEDFMMT pUJNFUIBUIBTFMBQTFECFUXFFOUSBOTQMBOUBUJPOBOECMPPETBNQMJOH qEPOPSTQMFFODFMMTVTFEBTTUJNVMBUPS f%3UZQJOHPGTUJNVMBUPSJTJEFOUJDBMUP%3UZQJOHPGEPOPS s/5OPUUFTUFE/5ð%3EPOPSVOLOPXO/5ñOPQBUJFOUEPOPS%3NJTNBUDIFT. 4(. $5-GSFR BOUJ $%ó Ǽǹȁ ǾǼ ǿǼ. 3TIMULATOR h$ONORv ,YMPHO CYTE. 'Y. #ULTUREDAYS. 4ABLE))&REQUENCIESANDAFlNITYOF4CELLSDIRECTEDAGAINSTMISMATCHEDDONOR(,! ANTIGENS

(8) DETERMINEDBYCOMBINEDLIMITINGDILUTIONANALYSIS(IGH AFlNITY#4,ARE RESISTANTTOINHIBITIONBYANTI #$ .JTNBUDIFEEPOPS )-"BOUJHFOT. òø. 2EMOVE SUPERNATANT. ), -URINECELLS. INSUPERNATANT . #4,, ASSAY. #4,. ANTI #$. ), #ULTUREDAYS. #4,. OR . . 4ARGET. #-, ASSAY. 'ROWTHMURINECELLS. ,YSISOFTARGETCELLS. #ALCULATE FREQUENCYOF4(. #ALCULATE FREQUENCYOF#4,. 'JHVSFì%JBHSBNTIPXJOHUIFDPNCJOFE-%"BTTBZ UPFTUJNBUFUIFGSF RVFODJFTPG$5-BOE5)GSPNUIFQFSJQIFSBMCMPPE#FGPSFUIFBEEJUJPO PGUIFUBSHFUDFMMT IBMGPGUIFDVMUVSFJTJODVCBUFECZBOUJ$%óUPUFTUUIF BĆOJUZPG$5-GPSEPOPSBOUJHFOT.

(9) óï$IBQUFSò. #POFBMMPHSBGUTJOEVDFIJHIBċOJUZ5DFMMT. #-,%UROPIUMRELEASEASSAY. ** ɨFTFWBSJFEGSPN÷UPóòðDFMMTQFSNJMMJPOQFSJQIFSBMCMPPEDFMMT"T FYQFDUFE UIFGSFRVFODJFTPG$5-BHBJOTUJOEJWJEVBM)-"BOUJHFOTXFSF MPXFSUIBOUIPTFBHBJOTUBHSPVQPGNJTNBDIUFE)-"BOUJHFOT DBTFTð" ö 'SFRVFODJFTPG$5-JOQBUJFOUTXJUIHPPEBOEQPPSHSBGUPVUDPNF XFSFXJUIJOUIFTBNFSBOHF. ɨFUBSHFUDFMMTXIJDIXFVTFEXFSFPCUBJOFEGSPNUIFEPOPSTTQMFFO PS XIFOOPUBWBJMBCMF QFSJQIFSBMCMPPENPOPOVDMFBSDFMMTGSPNIFBMUIZ WPMVOUFFSTXIJDIXFSFDPNQMFUFMZNJTNBUDIFEXJUIUIFTUJNVMBUPSDFMMT FYDFQUGPSUIF)-"BOUJHFOTXIJDIUIFTUJNVMBUPSDFMMTTIBSFEXJUIUIF CPOFEPOPSɨFTF)-"BOUJHFOTBSFJOEJDBUFEBTAUFTUFE)-"NJT NBUDIFTJO5BCMF** #FGPSFBEEJUJPOPGUIFUBSHFUDFMMT UIFDVMUVSFTXFSFEJWJEFEJOUPUXP HSPVQT)BMGPGUIFXFMMTXFSFJODVCBUFEXJUIBNPOPDMPOBMBOUJCPEZ BHBJOTU$%÷ BOUJ$%÷ ',ð÷',POJOH".VMEFS -FJEFO 6OJWFSTJUZ .FEJDBM$FOUFS ɨF/FUIFSMBOET ɨF&VSPQJVNSFMFBTFBTTBZXBTQFSGPSNFEBTEFTDSJCFECZ#PVNB FUBM ñõ&VSPQJVNMBCFMMFEUBSHFUDFMMTXFSFBEEFEBUôïïïDFMMTQFSXFMM UPUIFSFTQPOEFSTUJNVMBUPSDPNCJOBUJPOT&BDIXFMMXBTUFTUFEGPSDZUP MZUJDBDUJWJUZBHBJOTU&VSPQJVNMBCFMMFEUBSHFUDFMMTJOBGPVSIPVSBTTBZ BUòö P$JOBIVNJEJmFEBUNPTQIFSFDPOUBJOJOHôǷ$0 ñ4VQFSOBUBOUT XFSFIBSWFTUFEBOEnVPSFTDFODFPGUIFSFMFBTFE&VSPQJVN EVFUPUBSHFU DFMMDZUPMZTJT XBTNFBTVSFEJOBUJNFSFTPMWFEnVPSPNFUFS "SDVTðñòó 8BMMBD 5VSLV 'JOMBOE . óð. &REQUENCIESOF#4,WITHHIGHAFlNITY "GUFSBEEJUJPOPGBOUJ$%÷JOUIFDZUPUPYJDQIBTF UIFJOIJCJUJPOPG$5- GSFRVFODJFTWBSJFEGSPNïǷUPðïïǷ 5BCMF** ɨF$5-XFSFJOIJCJUFE MFTTJGSFBDUJWJUZXBTUFTUFEBHBJOTUBHSPVQPGNJTNBUDIFE)-"BOUJHFOT BTDPNQBSFEXJUIJOEJWJEVBMNJTNBUDIFE)-"BOUJHFOT DBTFTð" ö *O mWFQBUJFOUT DBTFTð" ò ó ô# ö UIF$5-EFNPOTUSBUFEJOIJCJUJPOPG MFTTUIBOõïǷ TIPXJOHUIBUBDPOTJEFSBCMFQSPQPSUJPOPGUIF$5-IBE BIJHIBċOJUZGPSEPOPS)-"BOUJHFOT5XPPGUIFTFQBUJFOUTIBEOFWFS CFFOFYQPTFEUPBMMPBOUJHFOTCZCMPPEUSBOTGVTJPOTPSQSFHOBODZ"MMCVU POFPGUIFQBUJFOUTXJUIBOUJ$%÷SFTJTUBOU$5-IBEBQPPSHSBGUPVU DPNF 5BCMF* 0GUIFUISFFQBUJFOUT DBTFTð# ñ ô" XJUI$5-SFTQPOTFT XIJDIDPVMECFJOIJCJUFECZBOUJ$%÷XIFOUFTUFEBHBJOTUTJOHMF)-" BOUJHFOT UXPIBEBHPPEHSBGUPVUDPNF. %VALUATIONOFIMMUNOLOGICALDATA. &REQUENCIESOF4(. 'PS$5-BOE5)GSFRVFODJFTUIFNFBODPVOUTQFSTFDPOE $5- PS QIPUPNFUFSWBMVFT 5) BOEUIFTUBOEBSEEFWJBUJPO 4% PGUIFXFMMT JOXIJDIPOMZTUJNVMBUPSDFMMTXFSFQSFTFOUXFSFDBMDVMBUFE8FMMTXFSF TDPSFEBTQPTJUJWFJGUIFDPVOUTPSQIPUPNFUFSWBMVFTJOUIFXFMMFYDFFEFE UIFNFBOQMVTò4%PGUIFXFMMTJOXIJDIPOMZTUJNVMBUPSDFMMTXFSFQSFT FOU-%"QSFEJDUT BDDPSEJOHUPB1PJTTPOEJTUSJCVUJPO UIBUJGòöǷPGUIF UFTUFEXFMMTBSFOFHBUJWFUIFOGPSUIBUHJWFODPODFOUSBUJPOPGSFTQPOEFS DFMMTUIFSFJTBWFSBHFPGPOF$5-PS5)QSFDVSTPSDFMMQFSXFMM ñö 2%35,43. ɨF5)GSFRVFODJFTXFSFPOMZEFUFSNJOFEJOQBUJFOUEPOPSDPNCJOBUJPOT XJUIBUMFBTUPOF)-"%3NJTNBUDI 5BCMF** *OUISFFQBUJFOUT DBTFT ð" õ" õ# EPOPSTQMFFODFMMT JOTUFBEPGQFSJQIFSBMCMPPENPOPOVDMFBS DFMMTXIJDIDBSSJFEUIF)-"%3BOUJHFOTPGUIFEPOPS IBECFFOVTFEBT TUJNVMBUPS5)GSFRVFODJFTBHBJOTUNJTNBUDIFEEPOPS)-"DMBTT**BOUJ HFOTXFSFEFUFDUFEJOBMMUFTUFEQBUJFOUTɨF5)GSFRVFODJFTWBSJFEGSPN ôðUPðóñôQFSNJMMJPOQFSJQIFSBMCMPPEDFMMTɨFGPVSIJHIFTUGSFRVFODJFT XFSFGPVOEJOUIFQBUJFOUTXJUIQPPSHSBGUPVUDPNF DBTFTð" ò ó õ" 3FMBUJWFMZMPXGSFRVFODJFTPG5)XFSFGPVOEBHBJOTUEPOPS)-"BOUJHFOT PGUIFEFGBUUFEmCVMBF DBTFTô# õ# . &REQUENCIESOF#4,. !NTIBODIES. *OBMMQBUJFOUTXIPSFDFJWFEBCPOFBMMPHSBGU $5-GSFRVFODJFTEJSFDUFE BHBJOTUNJTNBUDIFEEPOPS)-"DMBTT*BOUJHFOTXFSFEFUFDUBCMF 5BCMF. 1BOFMSFBDUJWFBOUJCPEJFTXFSFGPVOEJOGPVSQBUJFOUT DBTFTð ó õ ö 5BCMF** "MMIBEBOUJCPEJFTBHBJOTUEPOPS)-""PS)-"#BOUJHFOT.

(10) óñ$IBQUFSò. #POFBMMPHSBGUTJOEVDFIJHIBċOJUZ5DFMMT. ɨFSFXBTOPDMFBSSFMBUJPOTIJQCFUXFFO$5-BOE5)DIBSBDUFSJTUJDTBOE UIFQSFTFODFPSBCTFODFPGBOBOUJCPEZSFTQPOTF. JOHDFMMT"GUFSUSBOTQMBOUBUJPOPGOPOWJBCMFGSP[FOCPOFBMMPHSBGUT BOUJ HFOTBSFNPTUMJLFMZQSFTFOUFECZUIFJOEJSFDUSPVUFBOEIFSFCZQSJNBS JMZBDUJWBUF5) ðñɨFBDUJWBUFE5)TFDSFUFDZUPLJOFTXIJDIDBOJOEVDF SFTPSQUJPOPGPTUFPDMBTUJDCPOFBOEGBJMVSFPGHSBGUJODPSQPSBUJPO ó ðõ *OPVSTUVEZ UIFQSFTFODFPG)-"TQFDJmDBOUJCPEJFTEJEOPUBMXBZT DPSSFMBUFXJUI5DFMMDIBSBDUFSJTUJDT'PSFYBNQMF XFGPVOEQSJNFE$5- BOEIJHIGSFRVFODJFTPG5)JOBQBUJFOUXIPEJEOPUEFWFMPQTQFDJmD)-" BOUJCPEJFTɨFDPSSFMBUJPOCFUXFFOUIFIVNPSBMBOEDFMMVMBSSFTQPOTFUP BMMPBOUJHFOTJTOPUDPNQMFUFMZDMFBSñ÷òï 3PFMFOFUBMðø òðGPVOEUIBUUIFQSFT FODFPGIJHIBċOJUZ$5-NBZCFSFMBUFEUPUIFUZQFPG)-"NJTNBUDI BOUUIFJNNVOPHMPCVMJODMBTTPGUIFBOUJCPEJFT4USPOHFUBM öPCTFSWFE GPSNBUJPOPGBOUJCPEJFTJOBCPVUöïǷPGSFDJQJFOUTPGNBTTJWFPTUFPDIPO ESBMBMMPHSBGUT/POFUIFMFTT NPTUTFOTJUJTFEQBUJFOUTIBEBHPPEDMJOJ DBMPVUDPNF0OUIFPUIFSIBOE /FMTPOFUBM ÷IBWFGPVOEBDPSSFMBUJPO CFUXFFOEPOPSTQFDJmD*H(BOUJCPEJFTBOECPOFHSBGUPVUDPNF.BOZ IPXFWFS DPOTJEFS UIFGPSNBUJPOPGBOUJCPEJFTUPCFOPUEJSFDUMZSFMFWBOU UPUIFDISPOJDSFKFDUJPOQSPDFTTPGOPOWJBCMFGSP[FOCPOFBMMPHSBGUT XIJDI JTQSJNBSJMZ5DFMMNFEJBUFE ðñ ðò 8FGPVOEIJHIBċOJUZ$5-BOEIJHI5)GSFRVFODJFTFWFOBGUFS USBOTQMBOUBUJPOPGHSBGUT GSPNXIJDINPTUDFMMTIBECFFOSFNPWFE 1SJNFE$5-XFSFGPVOEBGUFSUSBOTQMBOUBUJPOPGBQSPDFTTFEmCVMBSHSBGU DBTFô# ɨFJOUFSQSFUBUJPOPGUIJT5DFMMSFTQPOTFXBTDPNQMJDBUFECZ UIFEFWFMPQNFOUPGBOJOGFDUJPO XIJDIXBTOPUJDFEDMJOJDBMMZNPOUIT BGUFSUIFJNNVOPMPHJDBMUFTUJOH"MUIPVHIBOJOGFDUJPOXJMMDBVTFNBTTJWF JOmMUSBUJPOPGUIFHSBGUXJUIJNNVOFDFMMT ðõUIFQSFTFODFPGIJHIBċOJUZ EPOPSTQFDJmD$5-JTDMFBSMZUIFSFTVMUPGBTQFDJmDJNNVOFSFTQPOTF" IJHIGSFRVFODZPG5)XBTEFUFDUFEBGUFSUSBOTQMBOUBUJPOPGBHSBGUGSPN XIJDINPTUCPOFNBSSPXDFMMTBOEDBSUJMBHFIBECFFOSFNPWFE DBTFõ" *OUIFTFDBTFT UIFDFMMVMBSJNNVOFSFTQPOTFNBZCFFWPLFECZUIFSFNBJO JOHDFMMTJOUIFFOEPTUFBMTVSGBDFPSQFSIBQTCZOPODFMMVMBSBOUJHFOTTVDI BTDPMMBHFOBOENBUSJYQSPUFJOT ðõ òñ òò ɨFDFMMVMBSSFTQPOTFDPVMECFNFBTVSFEPWFSBMPOHQFSJPE8FGPVOE IJHIBċOJUZ$5-BOEIJHIGSFRVFODJFTPG5)NPSFUIBOUXPZFBSTBGUFS USBOTQMBOUBUJPO"NBTTJWFCPOFBMMPHSBGUJTBTPDBMMFEEFQPUPGBOUJHFO XIJDINBZQSPWJEFBTMPXCVUDPOUJOVPVTSFMFBTFPGBOUJHFOTPWFSBMPOH QFSJPEPGUJNF QSPCBCMZGBDJMJUBUFECZMPXHSBEF QFSTJTUFOUSFTPSQUJPOòï ɨFJOUFSQSFUBUJPOPGPVSEBUBPOUIFJOEVDUJPOPGBOJNNVOFSFTQPOTF CZGSP[FOCPOFBMMPHSBGUTJTDPNQMJDBUFECZUIFFYQPTVSFPGTPNFQBUJFOUT. $)3#533)/. 8FIBWFJOWFTUJHBUFEUIFGSFRVFODJFTBOEBċOJUZPGDZUPUPYJD5MZNQIP DZUFT $5- BOE5IFMQFSMZNQIPDZUFT 5) EJSFDUFEBHBJOTUNJTNBU DIFEEPOPS)-"BOUJHFOTJOUIFQFSJQIFSBMCMPPEPGSFDJQJFOUTPGGSP[FO CPOFBMMPHSBGUT4JHOJmDBOUGSFRVFODJFTPG$5-BOE5)XFSFGPVOEJO BMMSFDJQJFOUTɨJTBHSFFTXJUIUIFmOEJOHTPG4UFWFOTPO õBOE.VTDVMP FUBM ô XIPGPVOEBDFMMNFEJBUFEJNNVOFSFTQPOTFBGUFSUSBOTQMBOUBUJPO PGGSP[FOCPOFBMMPHSBGUT.PSFJNQPSUBOUMZ XFEFUFDUFE$5-XJUIIJHI BċOJUZGPSEPOPSTQFDJmD)-"BOUJHFOTXIJDIXFSFSFTJTUBOUUPJOIJCJ UJPOCZNPOPDMPOBMBOUJCPEJFTBHBJOTU$%÷ BOUJ$%÷ 8FGPVOEUIBUUIF$5-GSFRVFODJFTBGUFSUSBOTQMBOUBUJPOPGGSP[FO CPOFBMMPHSBGUTXFSFJOUIFTBNFSBOHFBTUIPTFBGUFSDPSOFBMUSBOTQMBO UBUJPOñïɨFDMJOJDBMTJHOJmDBODFPGBCTPMVUF$5-GSFRVFODZEFUFSNJOB UJPOTJODVMUVSFTGSPNUIFQFSJQIFSBMCMPPEJTOPUDPNQMFUFMZDMFBS ðø ñ÷ *O NJDF BOJODSFBTFPG$5-GSFRVFODZXBTBTTPDJBUFEXJUIBMMPHSBGUSFKFD UJPO*ONBO UIFQSFTFODFPGIJHIBċOJUZEPOPSTQFDJmD$5- NPSFUIBO BCTPMVUFGSFRVFODJFT IBTCFFODPSSFMBUFEXJUIIFBSUBOEDPSOFBMBMMPHSBGU SFKFDUJPOð÷ ñï *OBCPVUIBMGPGUIFSFDJQJFOUTPGGSP[FOCPOFHSBGUT BDPOTJEFSBCMF QSPQPSUJPOPG$5-DPVMEOPUCFJOIJCJUFECZBOUJ$%÷ɨFPDDVSSFODF PGBOUJ$%÷SFTJTUBOU IJHIBċOJUZ$5-JTVTVBMMZUIFSFTVMUPGBDUJWB UJPOJOWJWPCZEPOPSTQFDJmD)-"DMBTT*BOUJHFOT ðøɨFTFQSJNFE$5- BQQBSFOUMZIBWFBIJHIBċOJUZGPSUIFUBSHFUTJODFUIFSFJTOPOFFEGPSUIF $%÷NPMFDVMFUPTUBCJMJTFBOUJHFOCJOEJOH ðöɨVT PVSSFTVMUTTIPXUIBU GSP[FOIVNBOBMMPHFOJDCPOFDBOQSJNF$5-BOEUIBUUIFTFDFMMTDBOCF GPVOEJOUIFQFSJQIFSBMCMPPE ɨFNBUVSBUJPOPG$5-TUSPOHMZEFQFOETPOUIFQSFTFODFPG*-ñ NBJOMZQSPEVDFECZ5) ñô*OIFBSUUSBOTQMBOUT UIFSFJTBDPSSFMBUJPO CFUXFFOJODSFBTFEGSFRVFODJFTPGDJSDVMBUJOHEPOPSTQFDJmD5)BOEHSBGU SFKFDUJPOñð8FGPVOEUIFIJHIFTU5)GSFRVFODJFTJOUIFQBUJFOUTXJUIB QPPSHSBGUPVUDPNF XIJDINBZTVHHFTUUIBUBIJHI5)GSFRVFODZJTQSF EJDUJWFPGSFKFDUJPOPGCPOFHSBGUɨF5)DBOCFTUJNVMBUFECZUIFEJSFDU QSFTFOUBUJPOPGDMBTT**BOUJHFOTPOTVSWJWJOHEPOPSDFMMT PSCZUIFJOEJSFDU QSFTFOUBUJPOPGEPOPSEFSJWFEBOUJHFOT QFQUJEFT CZIPTUBOUJHFOQSFTFOU. óò.

(11) óó$IBQUFSò. #POFBMMPHSBGUTJOEVDFIJHIBċOJUZ5DFMMT. UPBMMPBOUJHFOTCZQSFWJPVTCMPPEUSBOTGVTJPOT)-"NJTNBUDIFECMPPE USBOTGVTJPOTDBOBMTPJOEVDFIJHIBċOJUZ$5-BHBJOTUCMPPEEPOPSTQF DJmDBOUJHFOTòó)PXFWFS DPOTJEFSJOHUIFFOPSNPVTQPMZNPSQIJTNPGUIF )-"TZTUFN UIFQSPCBCJMJUZPGUIFTBNFNJTNBUDICFUXFFOUIFQBUJFOU BOECPOFPSCMPPEEPOPSJTFYUSFNFMZTNBMM0OUIFPUIFSIBOE UIFQSFT FODFPGEPOPSTQFDJmD$5-XJUIIJHIBċOJUZJOUXPNFO DBTFTó ö XIPIBEOFWFSSFDFJWFECMPPEUSBOTGVTJPOT TIPXTDMFBSMZUIFJOEVDUJPOPG IJHIBċOJUZ$5-CZGSP[FOCPOFBMMPHSBGUTɨFTFIJHIBċOJUZEPOPS TQFDJmD$5-BQQFBSBGUFSTUJNVMBUJPOJOWJWP QSJNJOH XJUIEPOPSBOUJ HFOTBOEBSFOPUQSFTFOUCFGPSFUSBOTQMBOUBUJPO ðöðø "MUIPVHIOPUUIFQSJNBSZHPBMPGPVSTUVEZ XFBMTPMPPLFEGPSBDPS SFMBUJPOCFUXFFO5DFMMDIBSBDUFSJTUJDTBOEHSBGUPVUDPNF1BUJFOUTXJUI IJHIGSFRVFODJFTPG5)BOEUIPTFXJUIIJHIBċOJUZ$5-NPSFPGUFO TIPXFEQPPSHSBGUPVUDPNF/PDMFBSSFMBUJPOTIJQXBTGPVOEJOPVSEJWFSTF HSPVQ1PPSmUBOEmYBUJPONBZCFSFTQPOTJCMFGPSTPNFPGPVSPCTFSWFE OPOVOJPOBTNBZUIFBEKVWBOUDIFNPUIFSBQZ òô&BDIDBOMFBEUPGBJMVSF JOUIFBCTFODFPGBDPOTJEFSBCMFJNNVOFSFTQPOTF0OUIFPUIFSIBOE PGUIFUISFFQBUJFOUTXJUIHPPEmUBOEmYBUJPOBOEOPDIFNPUIFSBQZ POMZUIFPOFXJUIIJHIBċOJUZ$5-BOEIJHI5)GSFRVFODZTIPXFEOP JODPSQPSBUJPOPGCPOFHSBGU"NVMUJGBDUPSJBMBOBMZTJTPGBMBSHFSBOENPSF VOJGPSNHSPVQJTOFDFTTBSZUPFTUBCMJTIUIFSPMFPGUIFJNNVOFSFTQPOTF POUIFJODPSQPSBUJPOPGUIFHSBGU ɨFJOWJUSPBTTBZXIJDIXFVTFEBMMPXTUIFRVBOUJmDBUJPOBOERVBMJ mDBUJPOPGUIF5DFMMSFTQPOTFJOSFDJQJFOUTPGGSP[FOCPOFHSBGUTɨFDVS SFOUBQQSPBDIJTBUUSBDUJWFCFDBVTFJUJTOPOJOWBTJWFBOEDBOCFDBSSJFE PVUBTPGUFOBTSFRVJSFE"MUIPVHIUIFHSBGUJUTFMGJTDPOTJEFSFEUPCFUIF NPTUJOGPSNBUJWFTJUFGPSUIFEFUFDUJPOPGDFMMTXIJDIBSFSFMFWBOUGPSSFKFD UJPO ô ð÷ ñ÷ BCPOFUSBOTQMBOUCJPQTZJTEJċDVMUUPPCUBJOBOEUIFDFMMVMBS JOmMUSBUFJTHFOFSBMMZOPUVOJGPSNBOEEJċDVMUUPJOUFSQSFU ø òï *ODPODMVTJPO GSP[FONBTTJWFCPOFBMMPHSBGUTBSFDBQBCMFPGJOEVDJOH $5-XJUIIJHIBċOJUZGPSEPOPSTQFDJmD)-"BOUJHFOT1BSUJDJQBUJPOPG EPOPSTQFDJmD5)JOUIFJNNVOFSFTQPOTFXBTBMTPTIPXOɨFQSFTFOUJO WJUSPBTTBZBMMPXTRVBOUJmDBUJPOBOERVBMJmDBUJPOPGUIFTFEPOPSTQFDJmD $5-BOE5)SFTQPOTFTJOUIFQFSJQIFSBMCMPPE4JODFUIFDISPOJDSFKFD UJPOPGUIFBMMPHSBGUJTDPOTJEFSFEUPCFQSJNBSJMZNFEJBUFECZ5DFMMT ðñðô XJUIBOJNQPSUBOUSPMFGPSIJHIBċOJUZ$5-BOE5) ð÷ ñï ñð PVSBQQSPBDI NBZCFIFMQGVMJOFTUBCMJTIJOHUIFFĊFDUPGUIFJNNVOFSFTQPOTFPOUIF JODPSQPSBUJPOPGCPOFHSBGU. !#+./7,%$'%-%.4. óô. 8FUIBOL1SPGFTTPS%S1$8)PHFOEPPSOBOE%S5)PHFSWPSTU GPS UIFIFMQGVMEJTDVTTJPOBOEDSJUJDBMSFBEJOHPGUIFNBOVTDSJQU 2%&%2%.#%3 4UVEJFTJOUIFUSBOTQMBOUBUJPOPGCPOF7ɨFDBQBDJUZPG GSFTIBOEUSFBUFEIPNPHSBGUTPGCPOFUPFWPLFUSBOTQMBOUBUJPOJNNV OJUZ+#POF+PJOU4VSH<#S>ðøõòóô#ò÷õóïð í&MWFT.8 $FMMNFEJBUFEJNNVOJUZUPBMMPHSBGUTPGGSFTIBOEUSFBUFE CPOF*OU0SUIPQBFEJDTðøö÷ðöðô î'SJFEMBFOEFS(& *NNVOFSFTQPOTFTUPPTUFPDIPOESBMBMMPHSBGUTDVS SFOULOPXMFEHFBOEGVUVSFEJSFDUJPOT $MJO0SUIPQðø÷òðöóô÷õ÷ ï'SJFEMBFOEFS(& )PSPXJU[.$ *NNVOFSFTQPOTFTUPPTUFPDIPOESBM BMMPHSBGUTOBUVSFBOETJHOJmDBODF 0SUIPQBFEJDTðøøñðôððöðô ð.VTDVMP%- "ZFS[B." $BMBCSFTF.& 3FEBM." "SBVKP&4 )VNBO MFVLPDZUFBOUJHFONBUDIJOH SBEJPHSBQIJDTDPSF BOEIJTUPMPHJDmOE JOHTJONBTTJWFGSP[FOCPOFBMMPHSBGUT $MJO0SUIPQðøøõòñõððôñõ ñ4UFWFOTPO4 ɨFJNNVOFSFTQPOTFUPPTUFPDIPOESBMBMMPHSBGUTJOEPHT +#POF+PJOU4VSH<"N>ðø÷öõø"ôöò÷ñ ì#VSXFMM3(. ò4USPOH%. 'SJFEMBFOEFS(& 5PNGPSE88 4QSJOHmFME %4 4IJWFT5$ #VSDIBSEU) &OOFLJOH8' .BOLJO)+ *NNVOPMPHJDSFTQPOTFTJO. IVNBOSFDJQJFOUTPGPTTFPVTBOEPTUFPDIPOESBMBMMPHSBGUT 0SUIPQðøøõòñõðïöðó. $MJO. ó/FMTPO, )PFLFNB+ :BMEPDL8 $IMPVQFL4 #B[[BOP3 4VOEMJOH/" 4USPOH%. $POSBE***&6 )VNPSBMJNNVOJUZUPCPOFBMMPHSBGUT. EFWFMPQNFOUPG*H(UPEPOPSBMMPBOUJHFOTJTBTTPDJBUFEXJUIEFMBZFE VOJPOBOEQPPSGVODUJPO)VN*NNVOPMðøøóóï 4VQQMð ÷ ô &OOFLJOH8' .JOEFMM&3 0CTFSWBUJPOTPONBTTJWFSFUSJFWFEIVNBO BMMPHSBGUT +#POF+PJOU4VSH<"N>ðøøðöò"ððñòóñ ìë4UFWFOTPO4 -J92 .BSUJO# ɨFGBUFPGDBODFMMPVTBOEDPSUJDBMCPOF BGUFSUSBOTQMBOUBUJPOPGGSFTIBOEGSP[FOUJTTVFBOUJHFONBUDIFEBOE NJTNBDIUFEPTUFPDIPOESBMBMMPHSBGUTJOEPHT +#POF+PJOU4VSH<"N> ðøøð"ððóòôõ.

(12) óõ$IBQUFSò. #POFBMMPHSBGUTJOEVDFIJHIBċOJUZ5DFMMT. ìì8FMUFS+' 4IBąFS+8 4UFWFOTPOT %BWZ%5 'JFME(" ,MFJO- -J92 ;JLB +. (PMECFSH7. $ZDMPTQPSJO"BOEUJTTVFBOUJHFONBUDIJOHJOCPOF. íí.VSQIFZ.% 4BSUPSJT%+ #SBNCMF+. 3BEJPHSBQIJDBTTFTTNFOUPGCPOF. USBOTQMBOUBUJPOmCVMBSBMMPHSBGUTTUVEJFEJOUIFEPH "DUB0SUIPQ 4DBOEðøøïõðôðöñö ìí$[JUSPN"" ɨFJNNVOFSFTQPOTFUIFBĊFSFOUBSN $MJO0SUIPQ ðøøõòñõððñó ìî)PSPXJU[.$ 'SJFEMBFOEFS(& 2JBO): ɨFJNNVOFSFTQPOTFUIF FĊFSFOUBSN$MJO0SUIPQðøøõòñõñôòó ìï4BZFHI.) 8BUTDIJOHFS# $BSQFOUFS$# .FDIBOJTNPG5DFMMSFDPHOJ UJPOPGBMMPBOUJHFOUIFSPMFPGQFQUJEFT5SBOTQMBOUBUJPOðøøóôöðñøô òïñ ìð5JMOFZ/- ,VQJFD8FHMJOTLJ+8 "EWBODFTJOUIFVOEFSTUBOEJOHPG SFKFDUJPONFDIBOJTN5SBOTQMBOU1SPDðø÷øñððïò ìñ)PSPXJU[.$ 'SJFEMBFOEFS(& ɨFJNNVOFSFTQPOTFUPCPOFHSBGUT *O'SJFEMBFOEFS(& (PMECFSH7. FET#POFBOEDBSUJMBHFBMMPHSBGUT 1BSL3JEHF""04 ðøøð÷ôðïð ìò.BD%POBME)3 ǲJFSOFTTF/ $FSPUUJOJ+$ *OIJCJUJPOPG5DFMMNFEJBUFE DZUPMZTJTCZNPOPDMPOBMBOUJCPEJFTEJSFDUFEBHBJOTU-ZUñIFUFSPHF OFJUZPGJOIJCJUJPOBUUIFDMPOBMMFWFM+*NNVOPMðø÷ððñõðõöðô ìó0VXFIBOE"+ #BBO$$ 3PFMFO%- 7BFTTFO-. #BML") +VUUF/) #PT & $MBBT') 8FJNBS8 ɨFEFUFDUJPOPGDZUPUPYJD5DFMMTXJUIIJHI. BċOJUZSFDFQUPSTGPSEPOPSBOUJHFOTJOUIFUSBOTQMBOUFEIFBSUBTB QSPHOPTUJDGBDUPSGPSHSBGUSFKFDUJPO5SBOTQMBOUBUJPOðøøòôõðññòø ìô3PFMFO% %BUFNB( 7BO#SFF4 ;IBOH- 7BO3PPE+ $MBBT' &WJEFODF UIBUBOUJCPEZGPSNBUJPOBHBJOTUBDFSUBJO)-"BMMPBOUJHFOJTBTTP DJBUFEOPUXJUIBRVBOUJUBUJWFCVUXJUIBRVBMJUBUJWFDIBOHFJOUIF 5SBOTQMBOUBUJPO DZUPUPYJD5DFMMTSFDPHOJ[JOHUIFTBNFBOUJHFO ðøøñôò÷øøøïò íë3PFMFO%- 7BO#FFMFO& 7BO#SFF41 7BO3PPE++ 7ÚMLFS%JFCFO)+ $MBBT ')ɨFQSFTFODFPGBDUJWBUFEEPOPS)-"DMBTT*SFBDUJWF5MZNQIP . DZUFTJTBTTPDJBUFEXJUISFKFDUJPOPGDPSOFBMHSBGUT ðøøôôøðïòøóñ. 5SBOTQMBOUBUJPO. íì%F#SVZOF-" &OTMFZ3% 0MTFO4- 5BZMPS%0 $BSQFOUFS#. )PMMBOE$ 4XBOTPO4 +POFT,8 ,BSXBOEF47 3FOMVOE%( #JTIPQ%, *ODSFBTFE. GSFRVFODZPGBMMPBOUJHFOSFBDUJWFIFMQFS5MZNQIPDZUFTJTBTTPDJBUFE XJUIIVNBODBSEJBDBMMPHSBGUSFKFDUJPO 5SBOTQMBOUBUJPOðøøòôõöññ ö. óö. HSBGUT*O)BCBM.# 3FEEJ") FET #POFHSBGUTBOECPOFTVCTUJUV UFT1IJMBEFMQIJB8#4BVOEFST$PNQBOZ ðøøñøòõ íî#PVNB(+ 7BOEFS.FFS1SJOT&. 7BOEFS8PVEF'+ 7BO3PPE++ $MBBT ') 3FMFWBODFPGQSFUSBOTQMBOUEPOPSTQFDJmD5DFMMBMMPSFQFSUPJSF. GPSIVNBOLJEOFZHSBGUTVSWJWBM 5SBOTQMBOUBUJPOðøøôôøøõøöõ ɨFSFMBUJWFSBEJPSFTJTUBODFPGJOUFSMFVLJOñQSPEVDUJPOCZIVNBO QFSJQIFSBMCMPPEMZNQIPDZUFTDPOTFRVFODFTGPSUIFEFWFMPQNFOUPGB OFXMJNJUJOHEJMVUJPOBTTBZGPSUIFFOVNFSBUJPOPGIFMQFS5MZNQIP DZUFQSFDVSTPSGSFRVFODJFT+*NNVOPM.FUIPETðøøóðõøññðòï íð-JO: -BOHNBO3 $PIO. ɨFQSJNJOHPGDZUPUPYJD5DFMMQSFDVSTPST JTTUSJDUMZIFMQFS5DFMMEFQFOEFOU4DBOE+*NNVOPMðøøñòôõñðõ íñ#PVNB(+ 7BOEFS.FFS1SJOT1. 7BO#SFF'1 7BO3PPE++ $MBBT') %FUFSNJOBUJPOPGDZUPUPYJD5MZNQIPDZUFQSFDVSTPSGSFRVFODJFT VTJOH&VSPQJVNMBCFMJOHBTBOPOSBEJPBDUJWFBMUFSOBUJWFUPMBCFMJOH XJUI$ISPNJVNoôð)VN*NNVOPMðøøñòô÷ôøñ íò4IBSSPDL$& ,BNJOTLJ& .BO4 -JNJUJOHEJMVUJPOBOBMZTJTPGIVNBO 5DFMMTBVTFGVMDMJOJDBMUPPM *NNVOPM5PEBZðøøïððñ÷ðõ íó0SPT[$( ;JOO/& 4JSJOFL- 'FSHVTPO3. *OWJWPNFDIBOJTNTPGBMMP SFBDUJWJUZ*'SFRVFODZPGEPOPSSFBDUJWFDZUPUPYJD5MZNQIPDZUFTJO TQPOHFNBUSJYBMMPHSBGUT 5SBOTQMBOUBUJPOðø÷õóðöô÷ò íô/PTTBM(+ *NNVOPMPHJDUPMFSBODFDPMMBCPSBUJPOCFUXFFOBOUJHFOBOE MZNQIPLJOFT4DJFODFðø÷øñóôðóöôò îë4UFWFOTPO4 )PSPXJU[. $VSSFOUDPODFQUTSFWJFXUIFSFTQPOTFUPCPOF BMMPHSBGUT +#POF+PJOU4VSH<"N>ðøøñöó"øòøôï íï4DIBO[6 3PFMFO%- #SVOJOH+8 ,BSEPM.+ 7BO3PPE++ $MBBT'). îì3PFMFO%- 7BO#SFF+ 8JUWMJFU.% )BCSBLFO* 7BO#FFMFO& 7BOU4BOU 1( %F8BBM-1 7BO3PPE++ $MBBT')*H(BOUJCPEJFTBHBJOTUBO)-". BOUJHFOBSFBTTPDJBUFEXJUIBDUJWBUFEDZUPUPYJD5DFMMTBHBJOTUUIJT BOUJHFO *H.BSFOPU5SBOTQMBOUBUJPOðøøóôöðò÷÷øñ îí$IBNQJPO#3 4FMM4 1PPMF"3 *NNVOJUZUPIPNPMPHPVTDPMMBHFOTBOE DBSUJMBHFQSPUFPHMZDBOTJOSBCCJUT *NNVOPMPHZðø÷òó÷õïôðõ îî5SFOUIBN%& 5PXOFT"4 ,BOH") %BWJE+3 )VNPSBMBOEDFMMVMBS TFOTJUJWJUZUPDPMMBHFOJOUZQF**DPMMBHFOJOEVDFEBSUISJUJTJOSBUT + $MJO*OWFTUðøö÷õð÷øøõ.

(13) ó÷$IBQUFSò îï7BO5XVZWFS& .PPJKBBSU3+ 5FO#FSHF*+ 7BOEFS)PSTU"3 8JMNJOL +. $MBBT') %F8BBM-1 )JHIBċOJUZDZUPUPYJD5MZNQIPDZUFT. BGUFSOPO)-"TIBSJOHCMPPEUSBOTGVTJPOUIFPUIFSTJEFPGUIFDPJO 5SBOTQMBOUBUJPOðøøóôöðñóõôð îð4BO+VMJBO"SBOHVSFO. -FZFT. .PSB( $BOBEFMM+ $POTPMJEBUJPO PGNBTTJWFCPOFBMMPHSBGUTJOMJNCQSFTFSWJOHPQFSBUJPOTGPSCPOF UVNPVST*OU0SUIPQðøøôðøòöö÷ñ.

(14)

No results found