Glucocorticoid control of gene transcription in neural tissue Morsink, M.C.

Hele tekst

(1)Glucocorticoid control of gene transcription in neural tissue Morsink, M.C.. Citation Morsink, M. C. (2007, June 26). Glucocorticoid control of gene transcription in neural tissue. Retrieved from https://hdl.handle.net/1887/12094 Version:. Corrected Publisher’s Version. License:. Licence agreement concerning inclusion of doctoral thesis in the Institutional Repository of the University of Leiden. Downloaded from:. https://hdl.handle.net/1887/12094. Note: To cite this publication please use the final published version (if applicable)..

(2) $IBQUFS 5PXBSETBOJOWJUSPNPEFMUPTUVEZUIF FõFDUTPG(3FOIBODFE-*.,N3/" FYQSFTTJPOPOUIFBDUJODZUPTLFMFUPO. .PSTJOL.$ %F,MPFU&3 +PÑMT. %BUTPO/" . %JWJTJPOPG.FEJDBM1IBSNBDPMPHZ -FJEFO"NTUFSEBN$FOUFSGPS%SVH3FTFBSDI -FJEFO . 5IF/FUIFSMBOET $FOUFSGPS/FVSP4DJFODF 4XBNNFSEBN*OTUJUVUFGPS-JGF4DJFODFT 6OJWFSTJUZPG"NTUFSEBN "NTUFSEBN 5IF/FUIFSMBOET.

(3) $IBQUFS. "#453"$5 1SFWJPVTMZ VTJOHMBSHFTDBMFHFOFFYQSFTTJPOQSPmMJOHQFSGPSNFEJOFYWJWPIJQQPDBNQBM TMJDFT -*.,XBTGPVOEUPCFVQSFHVMBUFEIPVSTBGUFS(3BDUJWBUJPOXIFSFBTDBMDJOFV SJOBOEQSPmMJOXFSFEPXOSFHVMBUFEBUUIJTUJNFQPJOU"MMUISFFQSPUFJOTBDDVNVMBUFJO IJQQPDBNQBMEFOESJUJDTQJOFTBOEQMBZEJõFSFOUSPMFTJOEFOESJUJDTQJOFNPSQIPMPHZCZ EJõFSFOUJBMMZBõFDUJOHBDUJODZUPTLFMFUBMEZOBNJDT 5IF BJN PG UIF DVSSFOU TUVEZ XBT UP GPDVT PO POF PG UIFTF HFOFT JF -*., BOE UP EFWFMPQBOJOWJUSPNPEFMTZTUFNUPUFTUUIFIZQPUIFTJTUIBUBDUJWBUFE(3TDBOJOnVFODF BDUJODZUPTLFMFUBMEZOBNJDTWJBVQSFHVMBUJPOPG-*.,FYQSFTTJPOMFWFMT 'PSUIJTQVSQPTF /(DFMMTXFSFUSFBUFEGPSEBZTXJUIWFIJDMF (3BHPOJTUEFYB NFUIBTPOF D".1PSBDPNCJOBUJPOPGD".1BOEEFYBNFUIBTPOF&BDIEBZ OFVSJUPHFO FTJTXBTNFBTVSFEBTBNBSLFSGPSDIBOHFTJOBDUJODZUPTLFMFUBMDPOmHVSBUJPOBOEUPUBM 3/"XBTJTPMBUFEJOPSEFSUPNFBTVSFUIFFYQSFTTJPOMFWFMTPG-*.,N3/"&YQPTVSFPG UIFTF DFMMT UP WFIJDMF PS EFYBNFUIBTPOF BMPOF EJE OPU JOEVDF OFVSJUPHFOFTJT XIFSFBT FYQPTVSF UP D".1 TJHOJmDBOUMZ JODSFBTFE OFVSJUPHFOFTJT UISPVHIPVU UJNF5IF D".1 NFEJBUFE JODSFBTF JO OFVSJUPHFOFTJT XBT GVSUIFS FOIBODFE CZ DPNCJOFE FYQPTVSF UP EFYBNFUIBTPOF)PXFWFS UIFJODSFBTFJOD".1BOEDPNCJOFED".1EFYBNFUIBTPOF NFEJBUFEOFVSJUPHFOFTJTXBTOPUBTTPDJBUFEXJUI QSFDFEJOH JODSFBTFTJO-*.,N3/" MFWFMT )FODF JOUIFDVSSFOUMZVTFEFYQFSJNFOUBMEFTJHOUIFD".1JOEVDFEDIBOHFTJOBDUJO DZUPTLFMFUBMDPOmHVSBUJPOXIJDIBSFFOIBODFECZEFYBNFUIBTPOFEJEOPUDPSSFMBUFUP BOJODSFBTFJO-*.,N3/"FYQSFTTJPO5IFSFGPSF PUIFSFYQFSJNFOUBMEFTJHOTBOEPS NPEFM TZTUFNT IBWF UP CF DPOTJEFSFE JO PSEFS UP GVSUIFS FYQMPSF UIF IZQPUIFTJT UIBU B (3NFEJBUFE JODSFBTF JO -*., N3/" FYQSFTTJPO JT JOWPMWFE JO NPEJGZJOH UIF BDUJO DZUPTLFMFUPO. .

(4) $IBQUFS. *O B QSFWJPVTMZ QFSGPSNFE MBSHFTDBMF HFOF FYQSFTTJPO QSPmMJOH FYQFSJNFOU TFWFSBM HFOFTJOWPMWFEJOBDUJODZUPTLFMFUBMDPOmHVSBUJPOXFSFGPVOEUPCFSFHVMBUFEIPVST BGUFS(3BDUJWBUJPOJOFYWJWPIJQQPDBNQBMTMJDFT 5IFTFHFOFTJODMVEFE-*., VQSFH VMBUFE DBMDJOFVSJO EPXOSFHVMBUFE BOEQSPmMJO EPXOSFHVMBUFE )FODF UIFRVFTUJPO XBTSBJTFEXIBUUIFQPTTJCMFDPOTFRVFODFTBSFPG(3NFEJBUFEUSBOTDSJQUJPOBMSFHVMB UJPOPGUIFTFHFOFTGPSIJQQPDBNQBMOFVSPOBMGVODUJPO "MM UISFF HFOFT IBWF CFFO TIPXO UP BDDVNVMBUF BU IJQQPDBNQBM EFOESJUJD TQJOFT QPTUTZOBQUJDTUSVDUVSFTPOXIJDIUIFNBKPSJUZPGTZOBQTFTBSFGPSNFEJOUIFCSBJO 5IFSFIBWFCFFOTUSPOHJOEJDBUJPOTUIBUUIFTFHFOFTQMBZBSPMFJOEFOESJUJDTQJOF NPSQIPMPHZWJBSFHVMBUJPOPGBDUJODZUPTLFMFUBMEZOBNJDT 4QJOFNPSQIPMPHZ JTCFMJFWFEUPCFEFQFOEFOUPOBTUBCMFQPPMPGmMBNFOUPVT ' BDUJOJOUIFTQJOFTDPSF BOEBNPSFEZOBNJDQPPMPG'BDUJOJOUIFTQJOFTQFSJQIFSZBOEJTBCMFUPSBQJEMZDIBOHF JOSFTQPOTFUPNVMUJQMFQIZTJPMPHJDBMTUJNVMJ "EEJUJPOBMMZ DIBOHFTJOIJQQPDBNQBM TQJOFNPSQIPMPHZIBWFCFFOBTTPDJBUFEXJUIDIBOHFTJOTZOBQUJDUSBOTNJTTJPO JFMPOH UFSNQPUFOUJBUJPO -51 'JSTU JOWJUSPTUVEJFTIBWFTIPXOUIBU-*., XIJDIJTBDUJWBUFECZUIF3BD 3IP(51BTF QBUIXBZ QIPTQIPSZMBUFTDPmMJO UIFSFCZJOIJCJUJOHUIFEFQPMZNFSJ[BUJPOPG'BDUJOJOUP NPOPNFSJD ( BDUJO NFEJBUFE CZ VOQIPTQIPSZMBUFE DPmMJO 'VSUIFSNPSF FYBNJOBUJPO PG -*., LOPDLPVU NJDF SFWFBMFE UIBU -*., JT OFDFTTBSZ GPS QSPQFS BD DVNVMBUJPO BOE EJTUSJCVUJPO PG 'BDUJO JO IJQQPDBNQBM EFOESJUJD TQJOFT NBJOUBJOJOH OPSNBM TQJOF NPSQIPMPHZ BOE -51 4FDPOE QSPmMJO JT LOPXO UP JOIJCJU BDUJO QPMZNFSJ[BUJPOBUUIFHSPXJOHFOETPGUIFmMBNFOUTBOE UPCFJOWPMWFEJOBDUJWJUZEF QFOEFOUSFNPEFMJOHPGTZOBQUJDTUSVDUVSFJOIJQQPDBNQBMOFVSPOT 5IJSE DBMDJOFVSJO IBT CFFO TVHHFTUFE UP QMBZ B SPMF JO EFTUBCJMJ[JOH 'BDUJO BOE IJQQPDBNQBM EFOESJUJD TQJOFTUSVDUVSF )PXFWFS TPGBSUIFUBSHFUTGPSDBMDJOFVSJOJOEFOESJUJDTQJOFTIBWF OPUCFFOFMVDJEBUFE *OUIFIJQQPDBNQVT BDUJWBUFE(3TIBWFCFFOTIPXOUPJOIJCJU-51JOBEFMBZFE HF OPNJDGBTIJPO)FODF (3NFEJBUFEUSBOTDSJQUJPOBMSFHVMBUJPOPG-*., DBMDJOFVSJOBOE QSPmMJO QPTTJCMZMFBEJOHUPDIBOHFTJOBDUJODZUPTLFMFUBMEZOBNJDTBOEEFOESJUJDTQJOF NPSQIPMPHZ NBZCFQBSUPGUIFVOEFSMZJOHNPMFDVMBSNFDIBOJTN 5IFSFGPSF UIFPWFSBMMBJNPGUIFDVSSFOUTUVEZXBTUPGPDVTPO-*.,BOEUPBEESFTTUIF IZQPUIFTJTUIBUBDUJWBUFE(3TDBONFEJBUFDIBOHFTJOUIFBDUJODZUPTLFMFUPOWJBUSBOTDSJQ UJPOBMVQSFHVMBUJPOPG-*.,*OPSEFSUPUFTUUIJTIZQPUIFTJT DIPMJOFSHJD/(DFMMT NPVTF OFVSPCMBTUPNB BOE SBU HMJPNB IZCSJEPNB DFMMT NBZ DPOTUJUVUF B WFSZ TVJUBCMF NPEFM TZTUFN5IFTF DFMMT PSJHJOBUF GSPN OFVSBM DFMMT BOE IBWF CFFO TIPXO UP FOEPH FOPVTMZFYQSFTT-*.,QSPUFJO 'VSUIFSNPSF FYQPTVSFUPUIF(3BHPOJTUEFYBNFUIB TPOFSFTVMUTJOUIFJOEVDUJPOPGOFVSJUPHFOFTJTJOUIFTFDFMMT SFTVMUJOHJOUIFEFWFMPQNFOU. . $IBQUFS. */530%6$5*0/.

(5) $IBQUFS. PGMPOHOFVSJUFT 4JODFJOHFOFSBMOFVSJUPHFOFTJTJTEFQFOEFOUPOBDUJODZUPTLFMFUBM EZOBNJDT /(DFMMTUIVTQSPWJEFBDPOWFOJFOUOFVSBMTVCTUSBUFUPTUVEZUIFBTTPDJB UJPOCFUXFFO(3BDUJWBUJPOBOEUIFBDUJODZUPTLFMFUPO"EEJUJPOBMMZ BOJOUFSFTUJOHPC TFSWBUJPOJOUIFTFDFMMTIBTCFFOUIFGBDUUIBUD".1BMTPJOEVDFTOFVSJUPHFOFTJTXIJDIJT BTTPDJBUFEXJUIBOJODSFBTFJO-*.,QSPUFJOMFWFMT 'VSUIFSNPSF UIFD".1JOEVDFE QSPUFJO TZOUIFTJT PG -*., JT JOIJCJUFE CZ BDUJWBUFE DBMDJOFVSJO 'JOBMMZ DPNCJOFE. GR. gene transcription . cAMP. GR. VDCCs. adenylyl cyclase protein synthesis . protein synthesis . Ca2+. gene transcription & protein synthesis . calcineurin. LIMK1. phosphorylation. cofilin active. cofilin slingshot. P. inactive. depolarization. F-actin. G-actin. ? neuritogenesis 'JHVSF4DIFNBUJDPWFSWJFXPGUIFNPEFMPOBDUJOEZOBNJDTJO/(DFMMTQPTUVMBUFECZ5PKJNBFUBMDPNCJOFEXJUIUIFIZQPUIFTJT UIBUBDUJWBUFE(3TBõFDUUIFBDUJODZUPTLFMFUPOWJBUSBOTDSJQUJPOBMSFHVMBUJPOPG-*.,BOEDBMDJOFVSJO5IJTTDIFNFIBTCFFOBEBQUFEGSPN *OUIJTNPEFM BSJTFJOJOUSBDFMMVMBSD".1JODSFBTFTUIFQSPUFJOTZOUIFTJTPG-*.,BOE7%$$T*ODSFBTFE-*.,QSPUFJOJOEVDFTFOIBODFE DPmMJOQIPTQIPSZMBUJPO SFTVMUJOHJOBTNBMMFSBNPVOUPGBDUJWFDPmMJO4VCTFRVFOUMZ NPSF'BDUJOBDDVNVMBUFTJOUIFDFMMT SFTVMUJOHJO JODSFBTFEOFVSJUPHFOFTJT*ODPOUSBTU FOIBODFEFYQSFTTJPOPG7%$$TBMMPXTUIFDFMMTUPBDDVNVMBUFNPSF$B

(6) BGUFSNFNCSBOFEFQPMBSJ[BUJPO MFBEJOHUPFOIBODFETVQQSFTTJPOPG-*.,FYQSFTTJPOCZDBMDJOFVSJO SFTVMUJOHJOUIFJOIJCJUJPOPGOFVSJUPHFOFTJT5IFDVSSFOUIZQPUIFTJTJTUIBU BDUJWBUFE(3TNBZJOUFSGFSFXJUIUIFTFNFDIBOJTNTCZUSBOTDSJQUJPOBMMZVQSFHVMBUF-*.,BOEEPXOSFHVMBUFDBMDJOFVSJO UIFSFCZFOIBODJOH UIFBDDVNVMBUJPOPG'BDUJOBOEOFVSJUPHFOFTJT7%$$WPMUBHFEFQFOEFOU$B

(7) DIBOOFM 1DPmMJOQIPTQIPSZMBUFEDPmMJO 'BDUJOmMBNFOUPVT BDUJO (BDUJOHMPCVMBSBDUJO .

(8) $IBQUFS. USFBUNFOUXJUID".1BOEEFYBNFUIBTPOFIBTCFFOTIPXOUPFOIBODFUIFDIPMJOFSHJD QIFOPUZQFPGUIFTFDFMMT 'JHVSFTVNNBSJ[FTUIFTFmOEJOHTJOBNPMFDVMBSNPEFM QPTUVMBUFECZ JODPNCJOBUJPOXJUIUIFDVSSFOUMZQSPQPTFEIZQPUIFTJT )FODF UIFDVSSFOUHPBMXBTUPmSTUmOEBOBTTPDJBUJPOCFUXFFOEFYBNFUIBTPOFJO EVDFE OFVSJUPHFOFTJT BOE JODSFBTFE -*., USBOTDSJQUJPO JO /( DFMMT5IFSFGPSF UIFDFMMTXFSFFYQPTFEUPWFIJDMF EFYBNFUIBTPOF D".1PSBDPNCJOBUJPOPGD".1BOE EFYBNFUIBTPOFGPSEBZT4VCTFRVFOUMZ FBDIEBZ OFVSJUPHFOFTJTXBTNFBTVSFEBOE UPUBM3/"XBTJTPMBUFEGPSNFBTVSJOH-*.,N3/"FYQSFTTJPOMFWFMT. ."5&3*"-4"/%.&5)0%4. /(DFMMT QBTTBHF XFSFDVMUVSFEJO%.&.NFEJVN NHMHMVDPTF *O WJUSPHFO-JGF5FDIOPMPHJFT $BSMTCBE $" 64" TVCTUJUVUFEXJUI'#4 *OWJUSPHFO-JGF 5FDIOPMPHJFT ¨IZCSJEPNB )"5 NJY *OWJUSPHFO-JGF5FDIOPMPHJFT QFOJDJMMJO 6 NM BOETUSFQUPNZDJO HNM PONN¨NNQMBTUJDDVMUVSFEJTIFT $PSOJOH *ODPSQPSBUFE /: 64" 1SJPSUPUIFFYQFSJNFOU POEBZ DFMMTXFSFUSBOTGFSSFEJOUPXFMMQMBUFT $PSOJOH *ODPSQPSBUFE JO B EFOTJUZ PG DFMMT XFMM 'PS FBDI FYQFSJNFOUBM EBZ UXFMWF XFMMTQMBUFTXFSFVTFEXIJDIXFSFFRVBMMZEJWJEFEPWFSFYQFSJNFOUBMHSPVQTWFIJDMF EFYBNFUIBTPOF D".1BOED".1

(9) EFYBNFUIBTPOF)FODF QFSEBZ FBDIFYQFSJNFOUBM HSPVQDPOTJTUFEPGUISFFXFMMTQMBUFT JFXFMMT 5ISFFIPVSTBGUFSXBSET UIFDFMMTXFSFFYQPTFEUPNFEJVNDPOUBJOJOHWFIJDMF FUIBOPM EFYBNFUIBTPOF . D".1 N. PSEFYBNFUIBTPOF .

(10) D".1 N. BOEMFGUUPTUBOE ¡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

(11) $IBQUFS. .FBTVSJOHOFVSJUPHFOFTJT *O PSEFS UP BTTFTT OFVSJUPHFOFTJT QJDUVSFT XFSF UBLFO GSPN UIF DFMMT VTJOH BO JOWFSUFE QIBTFDPOUSBTUNJDSPTDPQF ;FJTT1"-.-BTFS%JTTFDUJPO.JDSPTDPQF $BSM;FJTT"( (FSNBOZ 5IF/FVSPO+*NBHF4PGUXBSF XBTVTFEUP DPVOUUIFOVNCFSPGOFVSJUFT QFSDFMMBOE NFBTVSFUIFMFOHUIPGUIFOFVSJUFTJOQJYFMTBOE NFBTVSFUIFGSBDUJPO PGDFMMTEJTQMBZJOHOFVSJUFT/FVSJUFTXFSFNFBTVSFEPOMZJGUIFJSMFOHUIFYDFFEFEUIBU PG UIF DFMM CPEZT EJBNFUFS 'VSUIFSNPSF GPS FBDI CSBODIFE OFVSJUF POMZ UIF MPOHFTU CSBODIXBTNFBTVSFE'PSFBDIFYQFSJNFOUBMHSPVQBQQSPYJNBUFMZUIFTBNFOVNCFSPG DFMMTXBTDPVOUFEQFSEBZ "EEJUJPOBMMZ BOBMZTJT PG WBSJBODF "/07" BOE QPTU IPD -4% UFTUT XFSF VTFE UP BTTFTT TUBUJTUJDBMTJHOJmDBODF. 5PUBM3/"JTPMBUJPOBOEQVSJmDBUJPO 0O EBZT BOE UPUBM 3/" XBT JTPMBUFE IPVST BGUFS UIF USFBUNFOU NFEJVN XBT BQQMJFEPSSFOFXFE0OEBZTBOE UPUBM3/"XBTJTPMBUFEIPVSTBGUFSUIFUSFBUNFOU NFEJVNXBTBQQMJFEPSSFOFXFEJOPSEFSUPNJNJDLUIFPSJHJOBMTFUUJOHJOXIJDI-*., N3/"USBOTDSJQUJPOXBTGPVOEUPCF(3SFTQPOTJWF JFIPVSTBGUFS(3BDUJWBUJPO 1FSXFMM DFMMTXFSFIPNPHFOJ[FEJOM53*[PM¥ *OWJUSPHFO-JGF5FDIOPMPHJFT 4VC TFRVFOUMZ DFMMIPNPHFOBUFTXFSFQPPMFEGPSDPOTFDVUJWFXFMMTBOE3/"JTPMBUJPOXBT QFSGPSNFEBDDPSEJOHUPUIFNBOVGBDUVSFSTJOTUSVDUJPOT "EEJUJPOBMMZ BGUFSJTPMBUJPO UPUBM 3/"QVSJmDBUJPOXBTQFSGPSNFEVTJOHUIF2*"(&/ 3/FBTZ¥.JOJ,JU3/"$MFBOVQQSPDFEVSF 2*"(&/*OD7BMFODJB $" 64" . 3FBMUJNFRVBOUJUBUJWF1$3GPS-*.,FYQSFTTJPO -*.,FYQSFTTJPOMFWFMTXFSFNFBTVSFECZVTJOHSFBMUJNFR1$3POB%/"&OHJOF0Q UJDPO¥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ǃM DPOTJTUJOHPGǃM¨1$3.BTUFS.JYXJUI 4:#3¥(SFFO* R1$35.$PSF,JUGPS4:#3¥(SFFO* &630(&/5&$ 4FSBJOH #FMHJVN ǃM ǃ.GPSXBSEQSJNFS ǃMǃ.SFWFSTFQSJNFS ǃMXBUFSBOEQFSQSJNFSQBJSFJUIFS ǃMD%/"TBNQMF 35TBNQMFPSXBUFS OPUFNQMBUFDPOUSPM 5IF1$3DPOEJUJPOTXFSF BTGPMMPXTNJOVUFTBU¡$BOEDZDMFTPGTFDPOETBU¡$

(12) NJOVUFBU¡$ GPS. .

(13) $IBQUFS. CPUIBOOFBMJOHBOEFYUFOTJPO "GUFSXBSET UIFUFNQFSBUVSFXBTHSBEVBMMZJODSFBTFEUP ¡$JOPSEFSUPNBLFEJTTPDJBUJPODVSWFT %JTTPDJBUJPODVSWFTXFSFVTFEUPDPOUSPMGPSUIFTQFDJmDJUZPGUIFSFBDUJPOBOEHFOPNJD DPOUBNJOBUJPOXIFSFBTUIFTUBOEBSEDVSWFTXFSFVTFEUPRVBOUJGZUIFFYQSFTTJPOEJõFS FODFT&YQSFTTJPOMFWFMTPGUIFUBSHFUHFOFTXFSFOPSNBMJ[FEUPUIFFYQSFTTJPOMFWFMTPG 4SJCPTPNBM3/"TJODFUIJTUSBOTDSJQUEJTQMBZTWFSZIJHIBOETUBCMFFYQSFTTJPOMFWFMT 'JOBMMZ BOBMZTJTPGWBSJBODF "/07" BOEQPTUIPD-4%UFTUTXFSFVTFEUPBTTFTTTUBUJTUJ DBMTJHOJmDBODF 5IFGPMMPXJOHQSJNFSTXFSFVTFEGPS-*., GPSXBSE("("("((5$$"(5$$$"5(5( SF WFSTF(($555("5$"(("""5("("5( BOE4SJCPTPNBM3/" GPSXBSE$$$5($$$555 (5"$"$"$$ SFWFSTF$("5$$("((($$5$"$5" . 3&46-54 /FVSJUPHFOFTJT. control. cAMP. dex. cAMP + dex. $IBQUFS. *OUIJTTUVEZUISFFEJõFSFOUQBSBNFUFSTXFSFVTFEUPBTTFTTUIFMFWFMPGOFVSJUPHFOFTJT JF UIFBWFSBHFOVNCFSPGOFVSJUFTQFSDFMM UIFBWFSBHFOFVSJUFMFOHUIBOE UIF GSBDUJPOPGDFMMTXJUIOFVSJUFT*O'JHVSFBOFYBNQMFPG/(DFMMTJOEJõFSFOUFY QFSJNFOUBMHSPVQTBUEBZJTEJTQMBZFE 6OFYQFDUFEMZ UIF OVNCFS PG OFVSJUFT QFS DFMM EJE OPU JODSFBTF UISPVHIPVU UJNF JO UIFEFYBNFUIBTPOFUSFBUFEHSPVQDPNQBSFEUPUIFDPOUSPMHSPVQ 'JHVSF *ODPOUSBTU UIFOVNCFSPGOFVSJUFTQFSDFMMTJHOJmDBOUMZJODSFBTFEJOUIFD".1USFBUFEHSPVQT4USJL. 'JHVSF*NBHFTPGDFMMTPOEBZFYQPTFEUPWFIJDMF DPOUSPM D".1 EFYBNFUIBTPOFPSD".1

(14) EFYBNFUIBTPOF .

(15) day 5. day 4 day 3. *. day 2. *. day 1. 0.00. 0.05. 0.10. 0.15. 0.20. day 1. *. day 2. *. day 3. * #$ * #. day 4. *#. day 5. 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0. * #$ * #$ 0.25. fraction of cells with neurites. day 2 day 1 0.00. 0.05. 0.10. 0.15. 0.20. 0.25. 0.30. 0.35. LIMK1 mRNA expression. day 4 day 3 0. day 3. * *#. *. #$. *#. day 4. *#. day 5. 10. 20. 30. 40. 50. * #$. number of neurites / cell. * #$. 60. #. day 1. day 2. *. *. * #$. neurite length. * #$. day 5. * #$. control dex cAMP cAMP + dex. $IBQUFS. 'JHVSF2VBOUJmDBUJPOPG OVNCFSPGOFVSJUFTQFSDFMM OFVSJUFMFOHUIJOQJYFMT GSBDUJPOPGDFMMTXJUIOFVSJUFTBOE -*.,N3/" FYQSFTTJPOOPSNBMJTFEUP4S3/"0OEBZT BOE-*.,FYQSFTTJPOXBTNFBTVSFEIPVSTBGUFSUSFBUNFOUNFEJVNSFOFXBMPOEBZT BOESFTQFDUJWFMZ0OEBZTBOE -*.,XBTNFBTVSFEIPVSTBGUFSUSFBUNFOUNFEJVNSFOFXBM QDPNQBSFEUPEBZDPVOUFSQBSU QDPNQBSFEUPDPOUSPMQDPNQBSFEUPD".1 .

(16) $IBQUFS. JOHMZ UIFDPNCJOFEUSFBUNFOUPGD".1BOEEFYBNFUIBTPOFFWFOGVSUIFSJODSFBTFEUIF OVNCFSPGOFVSJUFTQFSDFMMDPNQBSFEUPUIFD".1HSPVQTJOBOBEEJUJWFNBOOFS )PXFWFS XJUISFTQFDUUPOFVSJUFMFOHUI BEJõFSFOUQBUUFSOXBTPCTFSWFE 'JHVSF 0OEBZUIFD".1HSPVQTIPXFETJHOJmDBOUMZIJHIFSOFVSJUFMFOHUIDPNQBSFEUPBMMUIF PUIFSHSPVQTXIFSFBTPOEBZUIJTFõFDUIBEEJTBQQFBSFE'SPNEBZUJMMEBZPOMZUIF DPNCJOFEUSFBUNFOUHSPVQPGD".1BOEEFYBNFUIBTPOFTIPXFEBTJHOJmDBOUMZIJHIFS OFVSJUFMFOHUIXIJDITFFNFEUPEFDSFBTFUPXBSETEBZ 'JOBMMZ UIF GSBDUJPO PG DFMMT DPOUBJOJOH OFVSJUFT NPSF PS MFTT NJNJDLFE UIF QBUUFSO PCTFSWFEJOOVNCFSPGOFVSJUFTQFSDFMM TIPXJOHOPFõFDUPGEFYBNFUIBTPOFUSFBUNFOU BMPOFBOEBOJODSFBTJOHFõFDUCZD".1XIJDIXBTTJHOJmDBOUMZFOIBODFECZDPNCJOFE USFBUNFOUXJUIEFYBNFUIBTPOF 'JHVSF )FODF EFYBNFUIBTPOFBMPOFEJEOPUIBWFBOZFõFDUPOUIFOVNCFSPGOFVSJUFTQFS DFMM MFOHUIPGOFVSJUFTBOEGSBDUJPOPGDFMMTXJUIOFVSJUFTXIFSFBTD".1DMFBSMZJODSFBTFE UIFOVNCFSPGOFVSJUFTQFSDFMMBOEUIFGSBDUJPOPGDFMMTXJUIOFVSJUFT$PNCJOFEUSFBU NFOUPGD".1BOEEFYBNFUIBTPOFFOIBODFEUIFTFFõFDUTBOENBSLFEMZJODSFBTFEUIF MFOHUIPGUIFOFVSJUFTBTXFMM FTQFDJBMMZBUEBZ. -*.,N3/"FYQSFTTJPO 6OGPSUVOBUFMZ OPDMFBSFõFDUPGEFYBNFUIBTPOF D".1PSD".1

(17) EFYBNFUIBTPOFPO -*.,N3/"FYQSFTTJPOXBTGPVOEUISPVHIPVUUJNF 'JHVSF 5IFEJõFSFOUUSFBUNFOU HSPVQTEJEOPUTIPXBOZTJHOJmDBOUEJõFSFODFTXJUIJOUIFEBZT"EEJUJPOBMMZ TPNFTJH OJmDBOUEJõFSFODFTXFSFPCUBJOFECFUXFFOUIFEBZTGPSTFWFSBMHSPVQTBMUIPVHIXJUIPVU BOZ DMFBS QBUUFSO 'VSUIFSNPSF UIF TUBOEBSE FSSPST PG UIF NFBO XFSF SFMBUJWFMZ MBSHF JOEJDBUJOHIJHIMFWFMTPGWBSJBUJPO. 4FWFSBMBTQFDUTPGUIFDVSSFOUMZQFSGPSNFEFYQFSJNFOUBSFJODPOUSBTUUPXIBUIBTCFFO TIPXOCFGPSF 'JSTU UIFSFTFFNTUPCFBEJTDSFQBODZXJUIBSFQPSUCZ,JNFUBM JOXIJDIFYQPTVSF UPEFYBNFUIBTPOFBMPOFGPSIPVSTNBSLFEMZJODSFBTFECPUIOFVSJUFMFOHUIBOEOVN CFSPGOFVSJUFTQFSDFMM*OUIJTTUVEZ BNVDIIJHIFSDPODFOUSBUJPOPGEFYBNFUIBTPOFXBT VTFE . JODPNQBSJTPOUPUIFDVSSFOUTUVEZ . )PXFWFS UIFEJõFSFOUMJHBOE DPODFOUSBUJPOTQSPCBCMZEPOPUVOEFSMJFUIFEJõFSFOUPVUDPNFTTJODFBDPODFOUSBUJPOPG .EFYBNFUIBTPOFIBTCFFOTIPXOUPBMSFBEZGVMMZPDDVQZ(3T 0OUIFPUIFS IBOE EJõFSFODFTJODFMMDVMUVSFDPOEJUJPOTPSQBTTBHFOVNCFSPGUIFDFMMT SFTVMUJOHJO BIJHIWBSJBCJMJUZBNPOH/(DFMMTUISPVHIPVUEJõFSFOUMBCPSBUPSJFT NBZCFUIF DBVTBUJWFGBDUPS. . $IBQUFS. %*4$644*0/.

(18) $IBQUFS. 4FDPOE QSFWJPVTMZ JU XBT GPVOE UIBU JODSFBTFE -*., QSPUFJO MFWFMT BSF BTTPDJBUFE XJUI JODSFBTFE OFVSJUPHFOFTJT *O UIF DVSSFOU TUVEZ IPXFWFS OP TVDI BTTPDJBUJPO XBTGPVOEXJUI-*.,N3/"*GN3/"QSFEJDUTQSPUFJOMFWFMTBOVNCFSPGJTTVFTNBZFY QMBJOUIFEJTDSFQBODZ%JõFSFODFTJOD".1DPODFOUSBUJPOTCFUXFFOUIFTUVEJFT N. WFSTVTN. NBZVOEFSMJFUIJTEJTDSFQBODZBTXFMMBTEJõFSFOUDVMUVSFDPOEJUJPOTPSDFMM QBTTBHFOVNCFST"EEJUJPOBMMZ UIFJODSFBTFJO-*.,QSPUFJOFYQSFTTJPOXBTPCTFSWFE BGUFSEBZTPGD".1FYQPTVSF JOEJDBUJOHUIBUUIFFYQPTVSFUJNFVTFEJOUIFDVS SFOUTUVEZDPVMEIBWFCFFOUPPTIPSUUPNFBTVSFBOJODSFBTFJO-*.,N3/"FYQSFTTJPO )FODF UIFDVSSFOUEBUBNBZTVHHFTUUIBUUIFD".1NFEJBUFEJODSFBTFJOOFVSJUPHFOFTJT JTJOEFQFOEFOUPGJODSFBTFEMFWFMTPG-*.,N3/"EVSJOHUIFmSTUEBZTPGUSFBUNFOU -*.,N3/"FYQSFTTJPOXBTNFBTVSFEPOEBZT BOEUXFOUZGPVSIPVSTBGUFSUIF USFBUNFOUNFEJVNXBTBQQMJFEPSSFOFXFE0OEBZTBOEUIFFYQSFTTJPOXBTNFB TVSFEUISFFIPVSTBGUFSSFGSFTIJOHUIFUSFBUNFOUNFEJVN UIFSFCZNJNJDLJOHUIFPSJHJOBM FYQFSJNFOUBM EFTJHO JO XIJDI -*., XBT GPVOE UP CF (3SFTQPOTJWF UISFF IPVST BGUFS BQQMJDBUJPOPGBDPSUJDPTUFSPOFQVMTF )PXFWFS EFYBNFUIBTPOFBMPOFPSJODPNCJOB UJPOXJUID".1EJEOPUTIPXBOZDMFBSFõFDUPO-*.,N3/"USBOTDSJQUJPOPOBOZPGUIF EBZT FJUIFSPSIPVSTBGUFSUSFBUNFOUNFEJVNSFOFXBMT 5IJTSFTVMUDPVMEJOEJDBUFUIBUFJUIFS-*.,JTOPU(3SFTQPOTJWFJO/(DFMMTPS UIBUUIFUSBOTDSJQUJPOBMSFTQPOTFUBLFTQMBDFBUBEJõFSFOUUJNFQPJOUJO/(DFMMT DPNQBSFEUPUIFIJQQPDBNQBMTMJDFQSFQBSBUJPO"EEJUJPOBMMZ TJODFEFYBNFUIBTPOFXBT DPOTUBOUMZQSFTFOUJOUIFUSFBUNFOUNFEJVN DISPOJDFYQPTVSFUPEFYBNFUIBTPOFNBZ BõFDUEPXOTUSFBNUSBOTDSJQUJPOBMNFDIBOJTNTXIJDIDPVOUFSBDUUIFJOJUJBM(3NFEJBUFE JODSFBTFJO-*.,N3/"FYQSFTTJPO'VSUIFSNPSF UIFMBDLPGBUSBOTDSJQUJPOBMSFTQPOTFPG -*.,BGUFSEFYBNFUIBTPOFUSFBUNFOUDPVMECFEVFUPBMJHBOETQFDJmDUSBOTDSJQUJPOBM FõFDU PG DPSUJDPTUFSPOF PO -*., N3/" USBOTDSJQUJPO 'JOBMMZ UIF WBSJBCJMJUZ JO -*., HFOFFYQSFTTJPOXBTIJHI SFTVMUJOHJOSFMBUJWFMZMBSHFTUBOEBSEFSSPSTPGUIFNFBO 4&. "O FYQMBOBUJPO GPS UIJT WBSJBCJMJUZ DPVME CF UIF GBDU UIBU -*., N3/" FYQSFTTJPO XBT NFBTVSFEJOUIFUPUBMTFUPGDFMMTQSFTFOUJOUIFXFMMT*OUIFTFXFMMT BMBSHFQSPQPSUJPOPG DFMMTEJEOPUTIPXOFVSJUPHFOFTJTBUBMM BTDBOCFFOTFFOJO'JHVSF UIFMBSHFTUGSBDUJPO PGDFMMTXJUIOFVSJUFTCFJOHTMJHIUMZMFTTUIBOPOEBZXJUID".1BOEEFYBNFUIB TPOF )FODF UIFTFVOEJõFSFOUJBUFEDFMMTNBZDPOTUJUVUFBWFSZWBSJBCMFQPQVMBUJPOXJUI BIJHIMZWBSJBCMFFYQSFTTJPOQBUUFSOPG-*., UIFSFCZJOUFSGFSJOHXJUIUIFDVSSFOUHFOF FYQSFTTJPONFBTVSFNFOUT *OUFSFTUJOHMZ DPNCJOFE XJUI EFYBNFUIBTPOF UIF FõFDUT PG D".1 PO UIF OVNCFS PGOFVSJUFTQFSDFMMBOEUIFGSBDUJPOPGDFMMTXJUIOFVSJUFTXFSFFOIBODFE5IJTJTBWFSZ JOUFSFTUJOH PCTFSWBUJPO TJODF JU JT LOPXO UIBU DPNCJOFE FYQPTVSF UP EFYBNFUIBTPOF FOIBODFT UIF FõFDUT PG D".1 PO UIF DIPMJOFSHJD QIFOPUZQF PG /( DFMMT BT XFMM 5IFSFGPSF BMTPBUUIFMFWFMPGDFMMVMBSNPSQIPMPHZ EFYBNFUIBTPOFBOED".1BDU JODPODFSU FOIBODJOHUIFMFWFMPGUPUBMDFMMVMBSEJõFSFOUJBUJPO. .

(19) 5IFFõFDUTPGD".1POOFVSJUPHFOFTJTJO/(DFMMTBSFCFMJFWFEUPPDDVSWJB1," NFEJBUFE QIPTQIPSZMBUJPO PG D".1 SFTQPOTF FMFNFOU CJOEJOH QSPUFJO JF $3&# 8JUISFHBSEUPUIFJOUFSBDUJPOCFUXFFO(3BOEUIFD".1QBUIXBZ JUIBTCFFOTIPXO UIBUBDUJWBUFE(3TDBOFYFSUBOJOIJCJUPSZFõFDUPOUIFBDUJPOTPG$3&# )PXFWFS UIFSFIBWFBMTPCFFOSFQPSUTJOXIJDID".1EFQFOEFOUQSPUFJOLJOBTF 1," IBTCFFO TIPXOUPQIPTQIPSZMBUF(3BOEUPFOIBODF(3EFQFOEFOUUSBOTDSJQUJPO )FODF BENJOJTUSBUJPOPGD".1NBZSFTVMUJOCPUIUIFBDUJWBUJPOPGUIFD".1QBUIXBZBOE JO QBSBMMFM UIFQIPTQIPSZMBUJPOPG(35IJTQIPTQIPSZMBUJPOPG(3NBZDPOTUJUVUFBOFYUSB SFHVMBUPSZTUFQUIBUJTOFDFTTBSZGPS(3UPFYFSUBOFõFDUPOOFVSJUPHFOFTJT QSPWJEJOH BOFYQMBOBUJPOGPSUIFGBDUUIBUBDPNCJOBUJPOPGD".1BOEEFYBNFUIBTPOFFOIBODFT OFVSJUPHFOFTJTXIFSFBTBENJOJTUSBUJPOPGEFYBNFUIBTPOFBMPOFEPFTOPUJOEVDFOFV SJUPHFOFTJT*OUIJTSFTQFDU TDBOOJOHUIFQSPNPUFSTFRVFODFTPGHFOFTJOWPMWFEJOUIF DPOmHVSBUJPOPGUIFBDUJODZUPTLFMFUPOGPSUIFQSFTFODFPG$3&TBOE(3&TXPVMECFPG NBKPSJOUFSFTUUPTFFXIFUIFSUIFJOUFSBDUJPOCFUXFFO(3TBOED".1DPVMECFNFEJBUFE WJBUSBOTDSJQUJPOBMSFHVMBUJPOPGUIFTFHFOFT *O UIF DVSSFOU FYQFSJNFOUBM EFTJHO /( DFMMT FYQPTFE UP D".1 BOEPS EFYB NFUIBTPOF EJE OPU TIPX BO JODSFBTF JO -*., N3/" FYQSFTTJPO MFWFMT "U UIJT QPJOU TFWFSBMPQUJPOTBSFBWBJMBCMFUPGPMMPXVQPOUIFQSFTFOUMZDPOEVDUFETUVEZ/( DFMMT DPVME CF USFBUFE XJUI DPSUJDPTUFSPOF JOTUFBE PG EFYBNFUIBTPOF BOE UIF BOBMZTJT PG -*., N3/" FYQSFTTJPO DPVME CF FYUFOEFE PWFS NVMUJQMF UJNF QPJOUT *O BEEJUJPO -*.,QSPUFJODPVMECFRVBOUJmFE'VSUIFSNPSF JOTUFBEPGDPOUJOVPVTBENJOJTUSBUJPO (3MJHBOEDPVMECFBQQMJFEJOQVMTFT UIFSFCZNJNJDLJOHUIFPSJHJOBMFYQFSJNFOUBMTFUVQ JO IJQQPDBNQBM TMJDFT JO XIJDI -*., XBT GPVOE UP CF USBOTDSJQUJPOBMMZ SFTQPOTJWF UP HMVDPDPSUJDPJET "T NFOUJPOFE CFGPSF UIF EJTDSFQBODJFT CFUXFFO UIF DVSSFOU BOE TFWFSBM QSFWJPVTMZ QFSGPSNFETUVEJFTNBZCFDBVTFECZEJõFSFODFTJOQBTTBHFOVNCFSPGUIFDFMMTCFUXFFO EJõFSFOU MBCPSBUPSJFT5IFSFGPSF TXJUDIJOH UP BOPUIFS CJPMPHJDBM NPEFM TZTUFN UIBU JT MFTTEFQFOEFOUPOUIFBHFPGUIFTVCTUSBUFNBZCFDPOTJEFSFE4JODFUIFPSJHJOBMHFOF FYQSFTTJPOTUVEZJOXIJDI-*., DBMDJOFVSJOBOEQSPmMJOXFSFGPVOEUPCF(3SFTQPOTJWF XBTDPOEVDUFEJOFYWJWPIJQQPDBNQBMTMJDFT PSHBOPUZQJDTMJDFDVMUVSFTNBZDPOTUJUVUF BNPSFTVJUBCMFNPEFMTZTUFN 0SHBOPUZQJDUJTTVFTMJDFTDBOCFDVMUVSFEGPSTFWFSBM XFFLTBGUFSUIFJSJTPMBUJPOBOEBSFFBTJMZNBOJQVMBUFECZXBZPGQIBSNBDPMPHJDBMUSFBU NFOUTBOEPSTJ3/"USBOTGFDUJPOT'VSUIFSNPSF FYQPTVSFPGIJQQPDBNQBMPSHBOPUZQJD TMJDFTUPBO.DPSUJDPTUFSPOFQVMTFIBTCFFOTIPXOUPSFEVDFUIFEFOESJUJDUSFFJOUIF $"TVCSFHJPOJOBEFMBZFENBOOFS +PÑMT VOQVCMJTIFEPCTFSWBUJPO 5IJTFõFDUDPVME CFCMPDLFECZDPUSFBUNFOUXJUI(3BOUBHPOJTU36)FODF XJUISFTQFDUUPBDUJOEZ OBNJDT SFEVDUJPOPGEFOESJUFTJOUIFTFTMJDFTCZBDVUFMZBDUJWBUFE(3TJTBWFSZFYDJUJOH PCTFSWBUJPOXIJDIDPVMECFMJOLFEUP(3NFEJBUFEUSBOTDSJQUJPOBMSFHVMBUJPOPG-*., DBMDJOFVSJOBOEQSPmMJO. . $IBQUFS. $IBQUFS.

(20) $IBQUFS. *O DPODMVTJPO VOGPSUVOBUFMZ OP BTTPDJBUJPO CFUXFFO EFYBNFUIBTPOFFOIBODFE D".1JOEVDFE OFVSJUPHFOFTJT BOE -*., N3/" FYQSFTTJPO XBT GPVOE JO UIF DVSSFOU TUVEZQFSGPSNFEJOOFVSBM/(DFMMT)PXFWFS JOUFSFTUJOHBMUFSOBUJWFFYQFSJNFOUBM EFTJHOTBOECJPMPHJDBMNPEFMTZTUFNTBSFBWBJMBCMFUPGVSUIFSFYQMPSFUIFIZQPUIFTJTUIBU JODSFBTFEN3/"FYQSFTTJPOPG-*.,JTJOWPMWFEJONPEJGZJOHUIFBDUJODZUPTLFMFUPO. .

(21) $IBQUFS. . .PSTJOL.$ 4UFFOCFSHFO1+ 7PT+# ,BSTU) +PFMT. EF,MPFU&3 %BUTPO/""DVUFBDUJWBUJPOPG IJQQPDBNQBMHMVDPDPSUJDPJESFDFQUPSTSFTVMUTJOEJõFSFOUXBWFTPGHFOFFYQSFTTJPOUISPVHIPVU UJNF+/FVSPFOEPDSJOPM. . #FSOBSE0 (BOJBUTBT4 ,BOOPVSBLJT( %SJOHFO3,J[ BQSPUFJOXJUI-*.[JODmOHFSBOELJOBTF EPNBJOT JTFYQSFTTFENBJOMZJOOFVSPOT$FMM(SPXUI%JõFS. . )BMQBJO 4 )JQPMJUP " 4BõFS - 3FHVMBUJPO PG 'BDUJO TUBCJMJUZ JO EFOESJUJD TQJOFT CZ HMVUBNBUF SFDFQUPSTBOEDBMDJOFVSJO+/FVSPTDJ. . /FVIPõ) 4BTTPF1PHOFUUP. 1BO[BOFMMJ1 .BBT$ 8JULF8 ,OFVTTFM.5IFBDUJOCJOEJOHQSP UFJOQSPmMJO*JTMPDBMJ[FEBUTZOBQUJDTJUFTJOBOBDUJWJUZSFHVMBUFENBOOFS&VS+/FVSPTDJ . . )BSSJT,.4USVDUVSF EFWFMPQNFOU BOEQMBTUJDJUZPGEFOESJUJDTQJOFT$VSS0QJO/FVSPCJPM . . .BUVT""DUJOCBTFEQMBTUJDJUZJOEFOESJUJDTQJOFT4DJFODF. . 4PSSB,& )BSSJT,.0WFSWJFXPOUIFTUSVDUVSF DPNQPTJUJPO GVODUJPO EFWFMPQNFOU BOEQMBTUJD JUZPGIJQQPDBNQBMEFOESJUJDTQJOFT)JQQPDBNQVT. . -BVUFSNJMDI /+ 4QJU[FS /$ 3FHVMBUJPO PG DBMDJOFVSJO CZ HSPXUI DPOF DBMDJVN XBWFT DPOUSPMT OFVSJUFFYUFOTJPO+/FVSPTDJ. . 4NBSU'. )BMQBJO43FHVMBUJPOPGEFOESJUJDTQJOFTUBCJMJUZ)JQQPDBNQVT. . .FOH: ;IBOH: 5SFHPVCPW7 +BOVT$ $SV[- +BDLTPO. -V8: .BD%POBME+' 8BOH+: 'BMMT%- +JB;"COPSNBMTQJOFNPSQIPMPHZBOEFOIBODFE-51JO-*.,LOPDLPVUNJDF/FVSPO . . "SCFS4 #BSCBZBOOJT'" )BOTFS) 4DIOFJEFS$ 4UBOZPO$" #FSOBSE0 $BSPOJ13FHVMBUJPOPG BDUJOEZOBNJDTUISPVHIQIPTQIPSZMBUJPOPGDPmMJOCZ-*.LJOBTF/BUVSF. . :BOH / )JHVDIJ 0 0IBTIJ , /BHBUB , 8BEB " ,BOHBXB , /JTIJEB & .J[VOP , $PmMJO QIPT QIPSZMBUJPOCZ-*.LJOBTFBOEJUTSPMFJO3BDNFEJBUFEBDUJOSFPSHBOJ[BUJPO/BUVSF . . &EXBSET%$ 4BOEFST-$ #PLPDI(. (JMM(/"DUJWBUJPOPG-*.LJOBTFCZ1BLDPVQMFT3BD$ED (51BTFTJHOBMMJOHUPBDUJODZUPTLFMFUBMEZOBNJDT/BU$FMM#JPM. . 5PKJNB5 5BLBIBTIJ. *UP&%VBMSFHVMBUJPOPG-*.LJOBTFFYQSFTTJPOCZDZDMJD".1BOEDBMDJVN EFUFSNJOFTDPmMJOQIPTQIPSZMBUJPOTUBUFTEVSJOHOFVSJUPHFOFTJTJO/(DFMMT#SBJO3FT . . ,JN)4 4POH. ,JN& 3ZV4) 4VI1(%FYBNFUIBTPOFEJõFSFOUJBUFT/(DFMMTUISPVHI DZDMPPYZHFOBTFJOEVDUJPO&YQ.PM.FE. . %PMF[BM7 -JTB7 %JFCMFS.' ,BTQBSPWB+ 5VDFL4%JõFSFOUJBUJPOPG/(DFMMTJOEVDFECZUIF DPNCJOFEQSFTFODFPGECD".1BOEEFYBNFUIBTPOFCSJOHTBCPVUUIFFYQSFTTJPOPG/BOE12 UZQFTPGDBMDJVNDIBOOFMTBOEUIFJOIJCJUPSZJOnVFODFPGNVTDBSJOJDSFDFQUPSTPODBMDJVNJOnVY #SBJO3FT. . %PMF[BM7 $BTUFMM9 5PNBTJ. %JFCMFS.'4UJNVMJUIBUJOEVDFBDIPMJOFSHJDOFVSPOBMQIFOPUZQF PG/(DFMMTVQSFHVMBUF$I"5BOE7"$I5N3/"TCVUGBJMUPJODSFBTF7"$I5QSPUFJO#SBJO3FT #VMM. . $IBQUFS. 3&'&3&/$&4.

(22) $IBQUFS. . .FJKFSJOH& +BDPC. 4BSSJB+$ 4UFJOFS1 )JSMJOH) 6OTFS.%FTJHOBOEWBMJEBUJPOPGBUPPMGPS OFVSJUFUSBDJOHBOEBOBMZTJTJOnVPSFTDFODFNJDSPTDPQZJNBHFT$ZUPNFUSZ". . )FMMBM-FWZ$ $PVFUUF# 'BHBSU+ 4PVRVF" (PNF[4BODIF[$ 3BGFTUJO0CMJO.4QFDJmDIZESPY ZMBUJPOTEFUFSNJOFTFMFDUJWFDPSUJDPTUFSPJESFDPHOJUJPOCZIVNBOHMVDPDPSUJDPJEBOENJOFSBMP DPSUJDPJESFDFQUPST'&#4-FUU. . 5PKJNB5 *UP & 4JHOBM USBOTEVDUJPO DBTDBEFT VOEFSMZJOH EF OPWP QSPUFJO TZOUIFTJT SFRVJSFE GPS OFVSPOBMNPSQIPHFOFTJTJOEJõFSFOUJBUJOHOFVSPOT1SPH/FVSPCJPM. . %F#PTTDIFS, 7BOEFO#FSHIF8 )BFHFNBO(.FDIBOJTNTPGBOUJJOnBNNBUPSZBDUJPOBOEPG JNNVOPTVQQSFTTJPOCZHMVDPDPSUJDPJETOFHBUJWFJOUFSGFSFODFPGBDUJWBUFEHMVDPDPSUJDPJESFDFQ UPSXJUIUSBOTDSJQUJPOGBDUPST+/FVSPJNNVOPM. . )BTLF5 /BLBP . .PVEHJM7, 1IPTQIPSZMBUJPO PG JNNVOPQVSJmFE SBU MJWFS HMVDPDPSUJDPJE SF DFQUPSCZUIFDBUBMZUJDTVCVOJUPGD".1EFQFOEFOUQSPUFJOLJOBTF.PM$FMM#JPDIFN . . %PVDBT7 4IJ: .JZBNPUP4 8FTU" 7FSNB* &WBOT3.$ZUPQMBTNJDDBUBMZUJDTVCVOJUPGQSPUFJO LJOBTF"NFEJBUFTDSPTTSFQSFTTJPOCZ/'LBQQB#BOEUIFHMVDPDPSUJDPJESFDFQUPS1SPD/BUM"DBE 4DJ64". . #BOLFS( (PTMJO,$VMUVSJOHOFSWFDFMMT#BOLFS (BOE(PTMJO ,5IF.*51SFTT. .

(23)

No results found