Paving the way for pulmonary influenza vaccines
Tomar, Jasmine
IMPORTANT NOTE: You are advised to consult the publisher's version (publisher's PDF) if you wish to cite from it. Please check the document version below.
Document Version
Publisher's PDF, also known as Version of record
Publication date: 2018
Link to publication in University of Groningen/UMCG research database
Citation for published version (APA):
Tomar, J. (2018). Paving the way for pulmonary influenza vaccines: Exploring formulations, models and site of deposition. University of Groningen.
Copyright
Other than for strictly personal use, it is not permitted to download or to forward/distribute the text or part of it without the consent of the author(s) and/or copyright holder(s), unless the work is under an open content license (like Creative Commons).
Take-down policy
If you believe that this document breaches copyright please contact us providing details, and we will remove access to the work immediately and investigate your claim.
Downloaded from the University of Groningen/UMCG research database (Pure): http://www.rug.nl/research/portal. For technical reasons the number of authors shown on this cover page is limited to 10 maximum.
Nederlandse Samenvatting
Curriculum Vitae with List of Publications
Acknowledgements
Nederlandse Samenvatting
Curriculum Vitae with List of Publications
Acknowledgements
Vaccinatie tegen influenza wordt beschouwd als de hoeksteen in de preventie en bestrijding van influenza uitbraken[1,2]. Momenteel worden influenzavaccins, met
uitzondering van Flumist®, toegediend door middel van injectie, hetgeen leidt tot een
suboptimale afweerreactie. Een inhaleerbaar influenzavaccin (pulmonale toediening) zou is dat opzicht voordelig kunnen zijn omdat er in de luchtwegen veel cellen van het immuunsysteem aanwezig zijn. Bovendien zou pulmonale toediening kunnen leiden tot een sterke afweerreactie in de luchtwegen. Dit zou tot een verbeterde bescherming kunnen geven aangezien het influenzavirus het lichaam binnendringt via de luchtwegen[3,4]. Tot nu toe is er echter nog weinig bekend over het toedienen van
vaccins via de longen.
In dit proefschrift hebben we twee verschillende benaderingen onderzocht om afweerreacties na de pulmonale toediening van griepvaccins te verbeteren. Eerst werd onderzocht of de plaats in de luchtwegen waar het vaccin wordt afgezet effect heeft op de afweerreactie. Daarna werd onderzocht of een aantal adjuvantia, materialen die de afweerreactie kunnen versterken, ook werkzaam zijn nadat ze tezamen met het influenza vaccin pulmonaal waren toegediend en of dat leidt tot een verbeterde bescherming tegen het influenza virus.
In hoofdstuk 2 worden recente ontwikkelingen op het gebied van droge (stabiele) griepvaccins besproken. Momenteel zijn influenzavaccins alleen beschikbaar in vloeibare toestand. De vloeibare toestand heeft als nadeel dat deze formuleringen gekoeld moeten worden opgeslagen en gedistribueerd, de zogenaamde ‘’cold-chain’’, om ontleding te voorkomen. Drogen van het influenzavaccin met geschikte hulpstoffen beperkt de moleculaire mobiliteit waardoor de conformatie en chemische integriteit van het vaccin tijdens opslag beter behouden blijft. Een ‘’cold-chain’’ zou daardoor overbodig kunnen worden. Het voordeel daarvan is dat het makkelijker wordt om voorraden van het vaccin aan te leggen wat een snelle toepassing in geval van pandemische uitbraken mogelijk maakt. Droogpoeder influenzavaccins voor (pre)-klinisch onderzoek kunnen worden bereid door middel van sproeidrogen, sproei-vriesdrogen, vriesdrogen, luchtdrogen of vacuümdrogen. Influenzavaccins in de droge toestand hebben als bijkomend voordeel dat ze kunnen worden geformuleerd als niet-parenterale, patiëntvriendelijke toedieningsvormen, bijvoorbeeld poeders voor epidermale, nasale of pulmonale toediening, tabletten voor orale toediening of micronaalden voor transdermale toediening. Bovendien is het aangetoond dat
177 Nederlandse Samenvatting
toediening van droogpoeder influenzavaccins via een aantal van deze alternatieve routes vergelijkbare of zelfs betere afweerreacties induceert dan de traditionele parenterale toediening (Hoofdstuk 2). Droogpoeder influenzavaccins laten dus een verbeterde stabiliteit en vaak een betere werkzaamheid zien en ze zijn gemakkelijker toe te dienen. Daarom zijn deze droogpoeder influenzavaccins een veelbelovend alternatief voor de momenteel beschikbare influenzavaccins; en zijn verdere ontwikkelingen op dit gebied in de nabije toekomst te verwachten.
In Hoofdstuk 3 werd in een katoenratten model de pulmonale toediening van een droogpoeder influenzavaccin vergeleken met een vloeibaar vaccin. Hierbij werd gebruik gemaakt van een influenzavaccin dat werd gemaakt door het influenzavirus op chemische wijze te inactiveren (whole inactivated influenza virus vaccine; WIV). De plaats van depositie in de luchtwegen, de afweerreactie en de mate van bescherming tegen het virus werd onderzocht. Sproei-vriesdrogen werd gebruikt om een droogpoeder te produceren met een deeltjesgrootte die geschikt is voor inhalatie (1-5 mm). Ondanks het feit dat de poederdeeltjes de geschikte grootte hadden, werden ze voornamelijk werd afgezet in de luchtpijp van de dieren, terwijl de vloeibare formulering in de gehele long werd afgezet. Afzetting van het poeder in de luchtpijp werd toegeschreven aan: a) de slechte deagglomererende eigenschappen van het apparaat waarmee het poeder werd toegediend, de Penn-Century insufflator. Hierdoor werd het poeder toegediend als agglomeraten, die door hun grote diameter de lagere delen van de longen niet konden bereiken; en b) het relatief grote volume van de lucht dat nodig was om het poeder te vernevelen. Dit leidde namelijk tot een verhoogde uitademing van lucht die ook poederdeeltjes bevat. Depositie van de vloeibare formulering in de lagere delen van de longen werd hoogstwaarschijnlijk veroorzaakt doordat de vloeistof eenvoudigweg de longen in kon stromen. Hoewel het vloeibare influenzavaccin significant sterkere afweerreacties induceerde dan de droogpoederformulering, bleek de beschermende werkzaamheid van beide formuleringen tegen een klinische isolaat van levend virus vergelijkbaar te zijn. De verschillen in afweerreacties konden worden toegeschreven aan een onvolledige dosering van de droogpoederformulering in plaats van de verschillen in de plaats van depositie van het poeder. Behalve dat de dieren een deel van het poeder uitademden, bleek ook dat een deel van het poeder in de insufflator achterbleef. Geconcludeerd werd dat katoenratten geschikt zijn als een model voor pulmonale vaccinatie en dat
de plaats van depositie van het influenzavaccin van weinig betekenis lijkt te zijn voor het induceren van bescherming tegen het virus.
Vanwege de beperkingen van de insufflator die zijn beschreven in hoofdstuk 3, werd een ander doseringsapparaat ontwikkeld, een aerosolgenerator, waarmee het droogpoeder vaccin wel laag in de longen kon worden afgezet. Naast influenzavaccin hebben we in hoofdstuk 4 onderzocht of de locatie van depositie in de longen ook van minder belang is voor vaccins tegen een virus dat niet via de luchtwegen worden verspreid, namelijk hepatitis B. Als vaccin werden voor zowel influenza als hepatitis B gezuiverde membraaneiwitten (subunit vaccines) gebruikt. Gesproeidroogde vaccinformuleringen werden afgezet in de luchtpijp / centrale luchtwegen of in de lagere delen van de longen van muizen door gebruik te maken van respectievelijk de insufflator en de aerosolgenerator. De studies toonden aan dat het voor de afweerreactie tegen het influenzavaccin niet uitmaakte of de depositie in de luchtpijp / centrale luchtwegen of in de lagere delen van de longen plaatsvond. Voor influenza spelen siaalzuur-receptoren, aanwezig in het bovenste deel van de luchtwegen, mogelijk een rol bij de opname van het vaccin om een afweerreactie te induceren, waardoor de klaring van het vaccin door trilhaarepitheel wordt omzeild. Voor het hepatitis B-vaccin leidde echter alleen afzetting in de lagere delen van de longen tot de inductie van aanzienlijke afweerreacties, terwijl depositie in luchtpijp / centrale luchtwegen niet leidde tot een afweerreactie. Bekend is dat er geen hepatitis-B-specifieke receptoren in enig deel van de luchtwegen aanwezig zijn. Als gevolg hiervan is het waarschijnlijk dat het hepatitis B-vaccin dat in de luchtpijp / centrale luchtwegen was afgezet verwijderd werd door trilhaarepitheel. Gespeculeerd werd dat depositie van het hepatitis B-vaccin in de lagere delen van de longen leidde tot een langere verblijftijd waardoor diffusie van het vaccin naar de lymfeklieren kon plaatsvinden en aldaar interacties kon aangaan met afweercellen. Geconcludeerd werd dat afhankelijk van het type vaccin er rekening moet worden gehouden dat de plaats van afzetting in de longen effect kan hebben op afweerreactie en daarmee op de beschermende werkzaamheid van het vaccin.
In Hoofdstuk 5 hebben we een tweede benadering gebruikt om de afweerreactie te verbeteren na pulmonale toediening van influenzavaccin (in dit geval WIV); namelijk door gebruik te maken van adjuvantia. In deze studie werd Advax™, een delta-isovorm van inuline, als adjuvans toegepast. Vloeibare of droogpoeder
179 Nederlandse Samenvatting
influenzavaccinformuleringen met en zonder Advax werden via de intranasale of pulmonale route toegediend bij muizen. De droogpoeder formuleringen werden geproduceerd door middel van sproeivriesdrogen. Zowel tijdens het mengen van Advax met het influenzavaccin als tijdens sproeivriesdrogen bleven de fysische en biologische eigenschappen van influenzavaccin en Advax behouden. In vivo studies lieten zien dat toevoeging van Advax aan het vaccin leidde tot een verbetering van zowel de humorale (systemische en mucosale) als de cellulaire afweerreacties. Dit werd gevonden na zowel intranasale als pulmonale toediening van het vloeibare of droogpoeder influenzavaccin. Bovendien leidde pulmonaire toediening van het Advax-geadjuveerde influenzavaccin tot een aanzienlijke toename van het aantal B-geheugencellen en de expressie van longlocalisatiefactoren. Enige verbetering t.o.v. niet geadjuvanteerd vaccin werd ook waargenomen in het aantal T-geheugencellen evenals het percentage van lokalisatiefactoren op deze T-geheugencellen. Ten slotte werd gevonden dat een enkele dosis van het Advax-geadjuveerde influenzavaccin de muizen beschermde tegen een normaliter dodelijke dosis levend virus en waren klinische symptomen van de ziekte niet waarneembaar. Muizen geïmmuniseerd met influenzavaccin zonder Advax, daarentegen, moesten 8–9 dagen na de blootstelling aan het virus worden geëuthanaseerd vanwege een ernstige progressie van de infectie. Geconcludeerd werd dat Advax een veelbelovend adjuvant is voor de pulmonale toediening van het influenzavaccin.
In Hoofdstuk 6 werd onderzocht of kippen kunnen worden beschermd tegen een dodelijke dosis van levend aviaire influenzavirus door ze pulmonaal te vaccineren met een droogpoeder influenzavaccin en of adjuvantia daarbij een rol kunnen spelen. Hierbij werd WIV als influenzavaccin gebruikt en werden Advax en door een zuurbehandeling geïnactiveerde Lactococcus lactis bacteriën (bacterium-like particles; BLP) als adjuvantia toegepast. Sproei-vriesdrogen werd gebruikt voor de productie van geadjuveerde en niet-geadjuvanteerde droogpoederdeeltjes. Hierbij bleek dat de fysische en biologische eigenschappen van het influenzavaccin en beide adjuvantia behouden bleven tijdens het sproeivriesdroogproces. Om het potentie van de adjuvantia in een kippenmodel te onderzoeken, werden de droogpoederformuleringen eerst pulmonaal aan kippen toegediend met behulp van de insufflator (actieve inhalatie). Deze inhalatiestudies gaven aan dat Advax en BLP ofwel systemische of mucosale afweerreacties ofwel beide stimuleren. In een tweede reeks experimenten werden kippen geplaatst in een doos waarin het droogpoeder influenzavaccin
werd geblazen. De kippen ademden vervolgens gedurende een bepaalde tijd deze poederdeeltjes in (passieve inhalatie). Toevoeging van de adjuvantia aan het droogpoeder influenzavaccin leidde tot aanzienlijk sterkere systemische afweerreacties. Bovendien resulteerde passieve toediening van vaccinformuleringen met en zonder adjuvans tot volledige bescherming bij kippen, zoals bleek uit hun overleving na blootstelling aan een normaliter dodelijke dosis van levend influenzavirus. Bovendien kon er geen levend virus worden gedetecteerd in de gevaccineerde dieren behalve in twee van de zes dieren van de met Advax geadjuveerde groep. Kortom, passieve inhalatie lijkt een haalbare en effectieve methode voor massavaccinatie van kippen met de potentie om ze te beschermen tegen de morbiditeit en mortaliteit van het aviaire influenzavirus.
References
[1] Houser K, Subbarao K. Influenza vaccines: Challenges and solutions. Cell Host Microbe. 2015; 17: 295–300.
[2] Jennings LC, Monto AS, Chan PK, et al. Stockpiling prepandemic influenza vaccines: a new cornerstone of pandemic preparedness plans. Lancet Infect. Dis. 2008; 8: 650–658.
[3] Amorij JP, Hinrichs WLJ, Frijlink HW, et al. Needle-free influenza vaccination. Lancet Infect. Dis. 2010; 10: 699–711.
[4] Tomar J, Born PA, Frijlink HW, et al. Dry influenza vaccines: towards a stable, effective and convenient alternative to conventional parenteral influenza vaccination. Expert Rev. Vaccines. 2016; 15: 1431–1447.
Nederlandse Samenvatting
Curriculum Vitae with List of Publications
Acknowledgements
183 Curriculum Vitae
Jasmine Tomar
Department of Pharmaceutical Technology and Biopharmacy, Antonius Deusinglaan 1
9713 AV, Groningen University of Groningen (RuG) The Netherlands +31 619929681 +31 50 36 33290 j.tomar@rug.nl; tomarjasmine@gmail.com https://www.linkedin.com/in/jasmine-tomar-0760bb88/
Current Position
Sep 2018–Present Postdoctoral researcher, Department of Pharmaceutical Technology and Biopharmacy, University of Groningen, Groningen, The Netherlands
Academic Credential
2014–2018 PhD in Pharmaceutical Sciences, Department of Pharmaceutical
Technology and Biopharmacy, University of Groningen, Groningen, The Netherlands
2013–2014 Industry Programme in Pharma Regulatory Affairs, Bioinformatics
Institute of India, Noida (U.P.), India
2011–2013 Masters in Biopharmaceutical Sciences, University of Leiden,
Leiden, The Netherlands
2007–2011 Bachelor in Pharmacy, Delhi Institute of Pharmaceutical Sciences
and Research, University of Delhi, New Delhi, India
Academic Accomplishments/Awards
2018 Nominated for FIGON Dutch Medicine Days selection, University of Groningen, Groningen, The Netherlands
2016 Best presentation award, Pharmacy Day at Groningen
Research Institute of Pharmacy, University of Groningen, Groningen, The Netherlands
2011–2013 Awarded Leiden Excellence Scholarship (covering tuition fees),
2007 Merit Certificate for scoring highest marks in Physics (96%) and
English (96%) in Pre-university exam at All India Level
2007 Brilliant student 2007 for attaining highest marks in medical
stream (92.4%) in Kaithal district, India
Research Experience
2018–Present Postdoctoral fellow, Department of Pharmaceutical Technology and Biopharmacy, University of Groningen, The Netherlands Supervisors: Prof. dr. H.W. Frijlink, Dr. W.L.J. Hinrichs and Prof. P. Olinga Project: Establishing precision-cut lung slices as an ex-vivo model for
screening of adjuvanted formulations
2014–2018 PhD scholar, Department of Pharmaceutical Technology
and Biopharmacy, University of Groningen, Groningen, The Netherlands
Supervisors: Prof. dr. H.W. Frijlink, Dr. W.L.J. Hinrichs and Prof. A.L.W. Huckriede
Project 1: Identification of the best deposition site within the respiratory tract of different pre-clinical models for the induction of optimal immune responses
Project 2: Development of suitable dry powder adjuvanted influenza formulations to boost immune responses leading to protective immunity in diverse animal models
2011–2013 Master’s research projects, University of Leiden, Leiden, The
Netherlands
Project 1: Chemical modifications of silicon surfaces for the generation of tunable surface isoelectric point (11 months)
Supervisors: Prof. W. Jiskoot and Prof. J. Bouwstra
Project 2: Tailored release of proteins from hot melt extruded polymeric implants by varying the polyethylene glycol content of the polymer (9 months)
185 Curriculum Vitae
List of Publications from this thesis
1) Tomar J, Biel C, de Haan C, Rottier P, Petrovsky N, Frijlink HW,
Huckriede A, Hinrichs WLJ, Peeters B; Passive inhalation of dry powder influenza vaccine formulations completely protects chickens against H5N1 lethal viral challenge. European Journal
of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 2018; 133: 85-95
2) Tomar J, Patil HP, Bracho G, Tonnis WF, Frijlink HW, Petrovsky N, Vanbever R, Huckriede A, Hinrichs WLJ; Advax augments B and T cell responses upon influenza vaccination via the respiratory tract and enables complete protection of mice against lethal influenza virus challenge, J Control Release. 2018 Sep 12;288:199–211 3) Bhide Y*, Tomar J*, Dong W, de Vries-Idema J, Frijlink HW,
Huckriede A, Hinrichs WLJ; Pulmonary delivery of influenza vaccine formulations in cotton rats: site of deposition plays a minor role in the protective efficacy against clinical isolate of H1N1pdm virus, Drug Deliv. 2018 Nov; 25(1): 533–45
4) Tomar J*, Born PA*, Frijlink HW, Hinrichs WLJ; Dry influenza
vaccines: towards a stable, effective and convenient alternative to conventional parenteral influenza vaccination, Expert Rev
Vaccines. 2016 Nov; 15(11): 1431–447
5) Tomar J, Tonnis WF, Patil HP, de Boer AH, Hagedoorn P,
Vanbever R, Frijlink HW, Hinrichs WLJ; Pulmonary Immunization: Deposition Site is of Minor Relevance for Influenza Vaccination but Deep Lung Deposition is Crucial for Hepatitis B Vaccination (Submitted)
* These authors contributed equally.
Other publications
1) Lavelle EC, Tomar J; Mucosal Vaccines, Adjuvants and Delivery 2016-A Meetings Management Conference, Drugs of the Future
2016, 41(11): 689–695
2) Stankovic M, Tomar J, Hiemstra C, Steendam R, Frijlink HW, Hinrichs WLJ; Tailored protein release from biodegradable poly(e-caprolactone-PEG)-b-poly(e-caprolactone) multiblock-copolymer implants, Eur J Pharm Biopharm. 2014 Jul; 87(2): 329–37 3) van der Maaden K, Tomar J, Jiskoot W, Bouwstra J; Chemical
modifications of silicon surfaces for the generation of a tunable surface isoelectric point, Langmuir. 2014 Feb 25;30(7)
Presentations at Conferences/Seminars
11/2018 Poster presentation, Passive inhalation of dry powder
influenza vaccine formulations completely protects chickens against H5N1 lethal challenge, Washington DC,United States of America
11/2016 Oral presentation, Advax augments B and T cell responses
upon influenza vaccination via the respiratory tract, International Biopharmacy Day, Utrecht, The Netherlands
09/2016 Oral presentation, Evaluation of immune responses elicited
by Advax adjuvanted influenz vaccine, Mucosal Vaccines, Adjuvants and Delivery, Lausanne, Switzerland
06/2016 Oral presentation, Role of delta inulin as an adjuvant for
influenza vaccine, Pharmacy Day 2016, Groningen, The
Netherlands
05/2016 Oral presentation, Advax, as a mucosal adjuvant for
influenza vaccine, UNISEC consortium meeting, Berlin,
Germany
11/2015 Poster presentation, Influence of site of deposition of
liquid and powder influenza vaccine formulations in the respiratory tract of cotton rats, Biopharmacy Day, Leuven,
Belgium
10/2015 Poster presentation, Investigation of pulmonary deposition
site of liquid and powder influenza vaccine formulations in cotton rat model, Influenza Vaccines for the World,
Albufeira, Portugal
03/2015 Oral presentation, Influence of site of deposition of
influenza and Hep-B vaccine candidates on immune responses, UNISEC consortium meeting, Copenhagen,
Nederlandse Samenvatting
Curriculum Vitae with List of Publications
Acknowledgements
189 Acknowledgements
All good things come to an end and so must my PhD tenure.
Four years of PhD seems to be a long period, but I am fortunate to realize it today how fast the time has flown. Undoubtedly, time follows its own natural rhythm but you don’t realize it till you have a healthy environment to work.
A positive ambience is driven by friendly and supportive supervisors and the team lives up to the decorum. In that respect, first and foremost, I would whole heartedly like to express my gratitude to my first promotor, Prof. Henderik Frijlink. I am highly thankful to you for believing in me and offering me a PhD position in your department at the time when I was about to pack my bags for a PhD position in Ireland. It is always great to have your scientific input during work meetings and your words of appreciation for my presentations/publications really meant a lot to me. I truly admire your energy, enthusiasm, supportive and down to earth attitude. In the future, I will always keep myself motivated by thinking of your commonly used phrase ‘’Research is 80% failure’’.
My heartfelt gratitude also goes to my co-promotor, Dr. Wouter Hinrichs. Wouter, I really like the fact that you are easily approachable with your office door always open. I was lucky to have you as my daily supervisor who is open to provide enough research freedom to a PhD candidate and also at the same time tries to keep the best interests of the candidate in mind. Your prompt response on manuscripts and logical suggestions for improvement have led us to nice manuscripts/publications. Besides nurturing me professionally, you and Erik have always supported me on personal front as well.
I extend my acknowledgement to my second promotor Prof. Anke Huckriede. During these four years, the monthly meetings with you were quite productive, giving me enough time and chance to discuss my research projects with you. Your input on my manuscripts has certainly improved their quality and I would like to thank you for that.
Dr. Ben Peeters, I am really thankful to you for supervising the extremely ambitious
‘’passive inhalation’’ chicken project. Though the path was not easy, I am delighted that things worked out in a better way than expected.
I am also grateful to the members of the reading committee, Prof. Gideon Kersten,
Prof. Toos Daemen, and Prof. Dennis Christensen for their efforts in evaluating the
scientific quality of my thesis.
Sincere thanks to all the co-authors of my manuscript for their contribution and support. Philip, together we share the first publication of our PhD. Somehow our projects have always been linked, whether it was ‘’implants project or influenza project’’. I have known you as a helpful, kind and an easy-going person. It is always great to hear your personal advises and experiences with kids. I would like to wish you all the best for wrapping up your PhD work. Yoshita, it was during our extremely expensive cotton-rat project that we got the chance to work together. Though we had quite some difficulties with that project, I am glad it turned out to be all well at the end. You were always around whenever I needed any help related to immunology work. Lots of success in your upcoming post-doctoral research. When I struggled with the approval of animal experiments in Groningen, I got immense support from a group in Belgium. Sincere thanks to Prof. Rita Vanbever for welcoming me in your lab. My heartfelt gratitude also goes to Dr. Harshad Patil for your inputs in experimental design, FACS analysis and of-course your great help with animal experiments together with Bernard Ucakar. Though you had an immensely busy schedule, I really appreciate you could manage to take out time for my animal experiments. I would like to extend this acknowledgement to Dr. Wouter Tonnis for all the scientific help that you provided me during the initial months of my PhD.
Dr. Anne de Boer, your feedback on my Hep-B manuscript had really helped us to
improve the manuscript further. I am also thankful to Paul for investing the time on aerosol generator and I hope the manuscript to be a nice publication soon. Many of my chapters/publications would not have been possible without the help of many other people. Thank you, Prof. Nikolai Petrovsky, Dr. Gustavo Bracho, Wei Dong,
Jacqueline-de vries Idema, Carin Biel, Prof. Peter Rottier, Dr. Cornelis de Haan for
your contribution to my thesis.
I am thankful to my current and former office-mates, Emma, BT, Tobias, Isabel,
Jasper, and Renee, for sharing such a great time. My heartfelt appreciation also
goes to my other colleagues who have always been helpful and kind in the hour of need. Thank you Max, Senthil, Marcel, Floris, Niels, Anne, Marinella, Doetie,
191 Acknowledgements
Su, Duong. It was great to have you all around. Nia and Mitchel, I came to know
a lot more about you during lung slicing experiments. You both are great to work with. Mitchel, in my upcoming post-doctoral research, I would try to learn from your extreme knowledge on lung slices. Prof. Peter Olinga, thanks for your input in the scientific discussions that we have had during work meetings. Anko and Jan, thank you for all your help with machines and lab stuff during all these years. Sonja, you are such an amazing person who is always willing to help with all the paper-work with a smile on your face. I would also like to thank my students, Carin and Ramy for the work that they did for my project. I am glad that a part of it is published. I am also thankful to Prof. Barbaro Melgert for her inputs in my lung slices project. Sincere thanks to Manoj, Bhagya, and the entire Pharma Pulse team for the formatting/layout of this thesis and help with cover design.
My heartfelt thankfulness also goes to UNISEC consortium for funding this research and providing me an international platform to discuss my research projects.
My appreciation also goes to the staff of Central Animal Facility (CDP). Catherine
and Miriam, thanks for your valuable suggestions regarding 3R’s. I would like to
extend this acknowledgement to the great microsugery team of the CDP, Annemieke,
Michel, and Andre and all the animal care-takers.
I have been lucky to get myself involved in some non-research related matters. Being the president of Groningen Indian Students Association (GISA 2015) has really nurtured my management skills. Thanks to my GISA team, Nilesh, Ketan, Amulya,
Ajay, Hemant, Ashish, and Soma, it was great to organize events time-to time with
you all. I am also thankful to the members of the advisory board, Prof. PK Sharma,
Prof. Tamalika Banerjee, Dr. Padma Rao, and Dr. Anjana Singh. Working as a
member of PhD Day organizing committee (2015) was a great learning experience. Thank you Emilia, for managing it so nicely.
Netherlands would not have been so lovely place to live in without the friendship of many people who were always around to create special memories to last forever. Thanks to all these bhaiyas and bhabhis, Shiva-Ananya, Rajender-Shilpa,
Akshay-Spoorthi, Pramod-Meena, Hasan-Mithila, Ganesh-Shubha, Soumen-Soutri, Abhishek-Anjala, Gaurav-Neha, PK Sharma-Aradhna, Asish-Reema, Shodhan-Chaitanya,
Gopi-Saritha, Amol-Sneha, Sunil-Smitha for sharing such a great time. This
acknowledgement would be incomplete without thanking many other friends,
Arko-Basundhara, Siqi-Tiantian, Pratiksha-Abhilash, Viraj, Justin, Amrita, Sreejita, Bhagwati, Milind, Rama di, Pallavi, Ankita, Vineet, Rajender-Chaitali, Khayum, Suresh, Simar, Gaurav, Ekta, and Varsha for all the happy times that we have had.
I am also grateful to Vinay-Chetna, Jai-Ruchi, Hansraj-Sangeeta, Kanchan-Mehul, though we have not had a lot of interaction, however, there are always somethings that can be learnt while talking to you. Kabir bhai and Julian bhabhi, you are one of those people with whom our chemistry clicked instantaneously. Though due to distance issues now, we may not see each other frequently, I am pretty sure our friendship will continue to be the same till we are alive ;). I am whole heartedly thankful to you both and my dear Mairu (Sumaira) for being like our Groningen family. My heartfelt appreciation and gratitude also goes to Vinod uncle and Meena
aunty for treating us as their children. Uncle and aunty, thanks for being our support
system in Groningen, no matter what, we could always ask your help. Vinay, Vinesh
and Nawina, all the best for your upcoming personal and professional life. Neela aunty and Malik uncle, it is so great to know you and have you as our Almere
family. Best wishes for Poorvi, Neha and Aneesh.
This scientific journey began as a Master student, so it would be incomplete without referring to the people who helped me during my Masters. My sincere thanks goes to my Leiden supervisors, Prof. Wim Jiskoot, Prof. Joke Bouwstra and Dr. Koen van
der Maaden for accepting me in Drug Delivery Technology group and introducing
me to the field of research. I would like to thank Twinkle di and Burhan
Bhya-Lubna bhabhi for their support during my Leiden days. I also had great time with
my Master friends: Arnout, Shanti, Huixin, Edward and Anne during my Leiden stay. For my second internship, I moved to Groningen, and met all these interesting people mentioned above. Milica, thanks for being a friend, philosopher and a guide. I am really glad that our implants project was a great success that you could write about.
The time spent in my bachelor college, DIPSAR, will always be close to my heart. I am grateful to my my Indian mentors: Majumdar Sir, Pathak Sir and Mam Suman
Dhanda. Not only my mentors, DIPSAR has given me great friends like Rijuta and Saurabh. No matter how old we grow, we will be friends forever.
193 Acknowledgements
Happiness and contentment comes from family, a person who is contented on personal front also performs better on professional front. My heartfelt gratitude goes to my mother in-law and father in-law who have supported me so much, especially at the time when I was almost in the last phase of my PhD, all alone in Groningen with my son. Without your support, the completion of my PhD would not have been easy. Definitely, your long stay in NL gave me a chance to understand you better. Thanks to my brother-in law Vikas and sister-in law Rashmi for always being a great company during our India visits. A naughty addition to the family, my dear nephew,
Aarav, I wish you lots of success in your upcoming life.
No matter whatever you do, you can never repay for the unconditional love and support that your parents provide you since your birth. I truly believe that we never understand the love of a parent till we become one ourselves. As a kid, I have never said ‘’thank-you’’ to my Mom and Dad, but, I would like to let them know that I sincerely have warm regards for them. Whatsoever, you have always supported me, whether it was about studying in Netherlands or my marriage with Tushar. My deep respect for everything, especially for being in NL at the time of Karnik’s birth and during the writing phase of my PhD. Writing the last chapter of this thesis today is only feasible because you have made me capable to do this by your motivational upbringing and constant encouragement.
My late grandmother, I am thankful for all the help that you could provide my mom in raising me during the initial years of my life. I am also thankful to all my extended family members, uncles, aunts, cousins, nephews and nieces (Sunivya, Shiven and
Aahana) for sharing a great time with me during my India visit.
Tushar, I feel short of words to express my love and gratitude to you. Our relationship
is 10 years old now but it still feels like it’s about “yesterday’’. That’s the charm, I would always like to maintain. During my PhD, you have always been a patient listener of my numerous project/non-project related conversations. It is always great to have a partner who is so interested and involved in your work. I am really thankful for your great innovative ideas starting from the title to cover design to graphical abstracts and much more. Commonly, it is said that ‘’behind every successful man, there is a woman’’, I must twist it around and say that ‘’YOU are the man behind my success’’. Together, we have a life-long project of raising our son, Karnik, with all
the values that we have imbibed. Karnik, since your birth, you are the world to me. You have made a lot of sacrifices to bring me this Dr. title but I am sure the day you understand about it, you will be proud of it. Thanks for being an integral part of my life and the great help that you provide by playing with my USB’s, typing unknown words in my manuscripts, tearing my manuscript pages apart, and the list goes on and on. May your future life be bestowed with good health and lots of success. My deepest gratitude goes to GOD for giving me the strength to cope with my difficult times.
Sincere apologies to all those I have unintentionally missed in this section.
