eb
Bibliotheek Proefstation Naaldwijk
A
05 ON VOOR DE GROENTEN- EN FRUITTEELT ONDER GLAS, 2 2
-JK.
Het gebruik v.d.fluorescenUe-Mcroseoop i.v.n,. stulftneelkie.,!ng en de bevruchting van de tomaat.
door :
W.van Ravestijn
Naaldwijk,1969.
Het (sbrulk van de fluorescentie-mieroseoopin verband «it de stuifmeel klomlnf jRiii€f ubyrf^^|^| van do toaaat.
Berste oriënterende proeven 1909 • Project C 4« BI 3 ! ! Q T H r~ F K Proof;.! ;l;on voor de Groenten- en J ^ g j 4 | * F r u i t t e e l t o n d e r G l a s t e N a a l d w i j k .
OH op korte termijn lets over de vruohtsetting te weten te kernen si ja ia de loop der jaren proeven genomen net het bepalen van de stulfmeelkie-ming op de stempel. Hiervoor werden de stempels op een bepaalde msnlsr voorbehaadeld, waarna onder een licht-microscoop hst aanta1 korrels ge- ' teld lm worden en ook het verschil tussen wel en Biet gekiende korrels zichtbaar was.
Hoewel «sa een goede bevruchting MS goede bestuiving «ai stuifmeelkieming vooraf gaan, «as het tot op heden niet mogelijk mi
s. de groei van de pollenbulsen in de stijl te vervolgen; en b. de bevruchting vast te stellen.
In de literatuur wordt al een tijdlang melding gemaakt van het gebruik van een U.V.microscoop of fluorsseentlemieroseoop
m
dit vast to stellen. Aangezien hiervoor een speciaal -f^hakelapparaat, oen hoge-druk kwik-lamp, een serie filters en eon condensor van hogs apertuur nodig sijn(een lage apertuur houdt de U.V.strelen tegen), heeft hst een pa«* Jaar geduurd voordat tot aanschaf hiervan ken worden overgegaan.
In dit verslag worden de allereerste ervaringen set dsss apertuur be schreven. Voordat hiertoe wordt overgegaan volgsn hieronder eerst enkels algemene opmerkingen betreffende ds fluorescentie-microscoop,
lij ds fluereseentlcHNleroseoop ligt hst gebruikte liefet tussen 5.000 sn 4.000 A°. Gewone objectglaasjes vsn 1.0 • 1.2 m lijn bruUtoasr.
Bij gebruikmaking van lnwnsie-olie, een spsolsls niet fluorescerende olis gebruiken seals Mieroil van Zsiss. Ben gewone microscoop is bruikbaar* maar ssn condensor »st «mi apertuur vsn 1.3 of 1.4 is een vsreists. Een kwarts-optlsch systeem is niet atrikt nssdsskslijk als het gebruikte optiek-glas voldoends lieht doorlaat* Het is nmmslljk sleohts een kwestie van siehtbaar lioht waarnemen, die door de objecten* welke ast U.V.licht bestraald worden, gaan fluoresceren» Dem sichtbare fluorescentie is het liebt» dat wordt wsargeiMMen.
Sst blâogisoh materiaal kan self fluoresceren (primaire fluorescentie) fffift« deze fluorescentie is altijd jit minder dan de fluorescentie geproduceerd doer de geïspregneei^kleurstoffen (f *icr chromen). Oese moedwillige fluereseentie wordt secundaire fluoreseentie genoemd. De flunchromen kunnen al dsn niet gekleurde stoffen sijn In het gewone sichtbare lieht. In U.V. lieht laten se weefsels of eellen of eeldelen
Wi.t «ifUililaM 11 tlf r> aldua "nkliwit* MHFttoD »lit of nSUWe-lijks gekleurd t« lijn. Dt beelden «et de fluoreseentie-«ioros-ooop verkregen zijn erg helder en beter van contrast dan «et de gewone lieht-alcrosooop verkregen. Oadat de geproduceerde hoeveel heid licht vrij zwak 1«« de fluoreaoentie-mieroeooop in een niet al te sterk verlichte ruiste gebruiken.
froefopzet
In eerste instantie is het volgende nagegaan«
1. In hoeverre het bestaande raeept voor de tasaat gesehikt is; an S* HM lang na da beetuiving da bevruchting plaatavindt.
Punt 1» da «athodlek.
Als leidraad werd «en werkwijze gebruikt, dia in Euphytiea, Neth. af Plant Br.I.V.T.Vol.17 Hö.2 ©kt.1968 bis. 298-30® voor tomaat beschreven staat. Aangezien liet goad «ogelijk «as* dat da «aoeratie (hydrolyaatie) en kleurtijd niet voor ons aateriaal geschikt waren, ward dit eerst nagegaan*
Begonnen werd «et hst oorspronkelijke reoept (sis bijlage 1.). Hiertoe warden op 24-3-1969 onbest oven bloeaen en bloeoen dia 2 war* 5 uw* 1 dag en 2 dagen van te veren waren bestoven, ge* hydrolyseerd in 1 II Ma 0 H gedurende 1 uur bij ksaerteaperatuur (van 9-10 uur). Daarna ward het «atariaal degelijk uitgewassen (Sx en in da 3e wassing laten staan). €a 12 ttur «fard voor da 4a
«aal eehoon water gegeven en on 16 uur voor de 5e en laatste «aal. Bij elke verversing ward het «atariaal voersleMlg oage-sohud. Steeds werd aqua dest gebruikt
m
da Ka&H uit te spoelen. 0« 17 mir (24-3-1969) werd liet water varvangen door da kleurstof. Op 25-3-1969 werden vanaf 3.30 uur preparaten genaakt. Desa kwa-«en als volgt tat stand* De stijlhet vruchtbeginsel verwijderd an daarna «vergebraaht in aan druppel glycerine op een objeotglas, geplat en bekeken. Bet vruehtbeginael werd daarna onder aan prepareer*ierosooop bevrijd van de vruchtwand en da saadknoppen «arden zoveel «ogelijk
op
hst objeetglaa los geprepareerd van da zaadlijsten. Dit ging nooitvoor 100JÉ. Da van da saadlijstsn
«et zaadknoppen werden in glycerine verdeeld* «at een dekglas mjPMMJH» «II §t|p*9» «rSArBft Hfl gPS*•©* BÜVKSh aio» wwuVß« »OW het uitprepareren werd een vergroting van 16K af 20* gebruikt. Bet resultaat was goad* A?ï* 4 filterooabinaties waren bruik baar, mar CMtoinatie II leek toch bat basta ta voldaan.
Het gegeven reoept mui dus gesd
m
vsrelsts geen veranderingen.Wsl leek het nuttig on het volgende nog na te gaan.
1, Kan het eensaal in kleurstof geplaatste Materiaal hierin langer blijven ataan; en
2. Kizi een eenmaal gemakt preparaat ei» een later tijdstip nog m gateld wospden.
Oese 2 punten sijn van belaag la verband ait Mm soepel verloop van Het werk. Waren de preparaten en Int gekleurde wateriaal Coed te bewaren» dan kan altijd ten klein surplus gekleurd worden voor «en
tijd ami dag ot later beksksn wedM«
Bén «reek later (1-4-1969) werd dit nagegaan. Zowel de een mek mite preparaten als- de gedurende een week gekleurde bloem® gaven beelden dis volkeasn identiek waren net de beelden van te preparaten ynlsena bet resent.
Op 1-4-1969 mant tevens nagegaan o£ vers bereite preparaten bstsp in glyoerine dan wel in kleuretof gemaakt kunnen worden. Dit werd gedaan bij bleemn* dis 2|» 3 en 4 dagen na bet bestuiven
saren gefixeerd. Als ssstarsls warden nog onbestoven bi ruinen van dezelfde ouderdos sis ds 4 dagen na de bestuiving gefixeerde
blo—en gebruikt. Dit laatste to verband net te fluorescentie van saters tel«» van te bloes dan stuifwoel of kiesbulsen. Bet versehll tussen in kleurstof of in glycerine ingesloten
pre-psrettsn wss onbelangrijk. Wel blssk dst preparaten in glyoerine langer goed bisten* In kleurstof {separaten
Opgemerkt dient neg te worden* dst bij te flataÉis van l| .dst as te bestuiving te blssssn "slispsn* hoewel het liebt nog brandde# Vanaf ds Ja dsg van te )eilnlilif sag w* ftTMHimn groei op te voedingsbodews* BIJ ds laatste flsxtls waren
vrushtbsgln-bruin gekleurd door dsss seblNeelgrssi. Dsrgslljks bruins
fiiMtlm Maften niet cafisantl.
Zowel op 25-J sis op 1-4 wsrdsn foto'a en dia's iwult van te
vsrkrsgen beelden. Afdnklwi hiervan *f J» in 3npj;<ininnnn Bess preparaten wsrdsn ne« »ist geteld« Asngsslsn het van ts voren vaststond, dat snksls bloesen verloren souden gaan s»t Iast soeken naar een goeds «ethodlsk wsrdsn steeds 15 à 20 bloeden gefixeerd. Op «en later tijdstip sijn vsn slks behandeling 10
bloemn gebruikt en bet stulftoeel te tellen en te bevrushtlng
Saasnvattlng aethodlek
Aan de besebreven methodiek behoefde niet gedokterd te werden* Het recept kan «IJS volgt luid««,
fixeren Iß F.A.A.50 gedurende «lasten* 2% voor by kaaperteauwratuur. Hrdrolyseren in lI<iiCR gedurende 1 van* flrnnun'tiwir > ) es deerne
goed ultvsssen set aqua dest. Kleuren I» een kleurstof bestaande uit 0»l£ anilineblauw in 0,111 K^ K3^ gedurende 1 naeht. Hit materiaal ken linier in de kleurstof verblijven «äs dit ast het werk beter uitkant» De vers bereide kleurstof is blMSi sur dese is binnen enkele uren ontkleurd tot liohtgroen-blauw.
Prepereten aaksn onder «Mm blneeulair (vergr. 16* ef 20x),
Stijl apart insluiten, Zssdkneppsn soveel aoaelijk los prepareren sa de overtollige ble—melen (seals vrusttwand) seveel eogelijk verwijderen» Insluiten in glyeerine. in kleurstof insluiten is ook aocelijk, stasr hierbij drogen de preparaten sneller uit.
De genaakte preparaten sijs» enige tijd bij kaaerteap. houdbaar (• 1 *^k).
Bij het tellen vergrotingen van 12.5 x * of 12.5 x 10 naar keus gebruiken. Alle filtereoabinatles voldoen goed, »aar eoabinatle 2 lijkt toeh tast «eest geschikt. Voor het tellen lijkt een oculair* nrtiitr lawtsr bet merk te TOreenteudigeiï.
Punt g. bopalln* fixatie-t 1 Jdstippen•
Oit de literatuur wss bekend, dat de bevruchting van de aaadknoppen t 56 uur lts de bestulvi*® plaatsvindt. In dit gedeelte van de proef werd nagegaan:
Ie. In hoeverre dit Juist isj
2e. ef SMit dese sstbods ds stuifseelkieaing beter ls vast te stel»
len 4#** «st de 11 elitist drosooopj
5e. of bet ii de y**<ven de klKruisen te be** palen;
%e. of het sist tast aethodiek eek sogelijk is *sst te stellen in hoeverre de bevruohte ïaadknoppen esterys-sreel te sien geven.
0« dit ns te gaan werden op >»>»19# tussen 9 en 12 uur ruls 200 toaatenbloenen fEeefw+fyt*1!*?- en ep ssn ^Bgahpii gm geplaatst
(saawnstelling# sis bijlage). Op 4/5 «• 11 uur vonden de bested*
vingen plasts« waarna de Moewiin M J 20*C ma *"*8* Iwhtv^rM1* b*^*1 ^
«frais 1101X1«« H9 viOMia 9RiYlS|pl 40 uVar m«HI ftr ytwg
• 5 •
vüVüi
1. Onbestoven bloes»n* gefixeerd op 4/3 on XI uur.
(S^# 3^lfc®ftPNKE(i \tWJS* Süft de bestuiving (4/3 VMXl I3*m - 19*50 uur). 3. Fimvm 5 «w na de beatuiving (4/3 **» K.00 * 16.15 m»)* 4. Fixeren X dag m «|« bestuivlng (5/3 van XI.00 - XX»X3 uur). 3* Mmnr S dagen m de bestuiving (6/5 van 11.00 » XX.X3 wop)* 6. Fixeren S| dag (36 uur) na de bestuiving (4/3 van 19.0O-X9.lSu. ) 7. Fixeren 3 dagen m de bestuiving (7/3 vn XX.30 * XX*43 uur). 8. Fixeren 4 dagen na de bestuiving (fi/3 van XX.X5 * 11.J0 uur)
awfi Am bloemen.
9. Onbeatoven bXo—n gefixeerd op 8/3 •*« 11*30 • 11.45 «air*
ftAhaivtp? iwg x en 9 lijn In ftlt* oeotrolaa op fliutrtMtßUt, wikt niet afkeswtig is van stuifmeel, direkt of' indirekt. Tevens werd
de kieadng in vitro bepaald. Basa Mm» sijn in bijlage 2
De tellingen met da fluoresoentie-mioroaeoop verriebt sijn in bijlage 4 opgenoaen, Omdat het Mar een aerate proef betrof sijs* deze eijfera volledig opgenoiaen.
Da teaperatuurgegevens gedurende ét duur van da proef sijn in bijlage 3 vastgelegd.
Da
ϞMKtmm
blaaasn van 4/3 gsven Inderdaad aan seer verspreidean spasrsass fluorescentie. Op de staapei werden scow enkele
"verdwaalde" stulftaeelkorrele gevonden. De fXuereseentie was goed
herkenbaar # 4*1w» van da stsapel of aan ^ne*'>
(sta fata X van bijlage 3). Ook in da stijl ward fluereaeentie
waargenomen. Desa zag «en veelal in banen aan da sijkanten. foeh was dit goad te herkennen ala behorende tat bat stijl-weefsel en saais later sou blijken, hoeft dit gaan verwarring ta gaven «at de «tuiftaeelkieaftiulaen. Sa waargenoaen fluoreaeentie was verwoede«*
Xijk sfkasMtig van de vaatbundela» waarvan da eaXioae in da seef* vaten dit beeld hebben gegeven* (sis fat« 2 van bijlag» 3).
Twee uur na da beutulving sag mm beter dm MJ da Xlabtadaros» ooop bat kiewende atuiffteel op da steapel liggen.
Het versehiX tussen wel en Mat geklemd «as bijsonder duidelijk. Sa waa (95i39() * Se lengte van de kiesibulsen was ««*«< i f jir tt (ie bui sen aanvankelijk voor het vaderland weg seltenen ta groeien «a niât reaht an gerieht waren. Hierdoor was een Xangta aoellijk vaat ta stell«»*
6
In foto 4, 5, 6, 7 «m 8 is hat steapeloppervlak net de kleaende korrels «et de diverse fllter-nogelijkheden te sien, BiJ de
saad-kneppen «erden er sons enkele gevonden, die bevruefat leken. Dit le of een ( kleine) fout ln de netbodlek of het ie bet gevolg
van een "verdwaalde" stuif meelkorrel, die due vroegtijdig op de stenpel terecht was gekonen. Dit laatste lijkt 't «eest waarschijn lijk (sie onbestoven bloenen). Het bevruchtingspercentage bedroeg slechts 1.2JÉ. Dit is echter wel een waarschuwing niet al te ver ontwikkelde bloenen voor dese proeven te gebruiken.
Vijf uur na de bestuiving mui de kiening nog steede uitstekend vaat te stellen. De lengte van de pollen kienbulsen was bij benadering
te neten. De noellijkheid was dat de stenpel een rensellge groei gaf en ook vaak de stenpel door het pletten van de stijl werd afge drukt, ln verband Memede werd de lengte van de pollenbulsen vanaf de overgang stenpel/stijl genoten, waarbij genet«» werd tot ongeveer de langste bulsen. Duidelijk was nu te sien» dat bij het vorderen
van de buisgreel de»» geweldig goed gerieht naar het eentrun van de stijl groeiden en aldaar hun weg recht vervolgden, In foto 9 en 10 sljn gedeelten van de stenpel naar de stijl te sien. In foto 10 kont het versehil ln fluorescentie veroorzaakt door de vaatbundels en de pollenbuizen goed tot uiting. Het klemingspercentage was t.o.v*
2 uur naar willig toegenonen en bedroeg nu 96,1*. Bet aantal bevruchte saadknoppen bedroeg nog geen 1% en de kleabuisen waren ongeveer
79 m* ln de stijl doorgedroegen.
Ein dag na de bestuiving sljn fot4s 11 en 12 genaakt van stenpel-oppervlakten va» dese bloeaen. Het stulffceel is nog goed siohtbaar
en daardoor ook te tellen. Maarsshljnlijk dank slj de gunstige
/centrale teaperatuur waren de pollenbulsen rasend Kiel'gegroeid. De aç&ere
gedeelten van de stijl gsven letterlijk bosjes flueresoereade kien*
bulten te sien. Op foto 15 is goed te sien dat de klenbuiseen niet
gelijknafclg fluoreseeren# mar dat er goed te onderscheiden proppen
in voorkonen, die extra sterk fluoreseeren. Dank slj dese snelle
groei van de kienfeulsen waren al vele bulsen tot in het vruchtbe ginsel doorgedrongen en waren veel bevruehte saadknoppen waar te nonen (sie foto's 1* en 15).
Het kleningspereentage, 24 uur na de bestuiving bepaald, leek iets ninder te sljn dan bij S en 5 uur*
• 7
-Waarschijnlijk lijkt* dat dit het gevolg la van volledig uit» gegroeide pollenbuizen, waardoor de left korrel als sodanig niet meer of »oellijk was waar te nemen en bij het tellen over het hoofd werd geslen.
Bij lagere temperaturen of Juister gesteld bij een minder voer* spoedig verloop van de kissing sal na 24 uur 4« kiening wel foutloos te bepalen zijn. Bevruchting had nu spoediger plaats gevonden dan volgens lit.opgaven. Van de saadknoppen waren er 53.251 bevrucht.
Twee dagen na de bestuiving gaf ongeveer gelijke résultats» als 1 dag na de bestuiving« Aangezien de stijl geheel doorgroeld was
net kteafeuizen kon de lengte van de pollenbuiaen niet geneten worden (had geen zin, de stijllengte was lisilterend geworden). De fluorescentie wss bij de overgang atsapel/stijl minder, veroorzaakt <Un het "weg" groeien in de kiesfcuisen. Bet stuif* weel op de steopel leek nog wel te tellen te sljn. In verband «et de tijd en fesien de resultaten 1 dag na bestuiving verkre gen, werd dit hier achterwege gelaten» De foto*# geven een
indruk vim de "aankcnst* van de kieabuizen MJ list vruchtbeginsel (foto's 17 tn 18). Bevruchting is gefotografeerd bij alle 4 filtaroomblnatles in foto's 18, 19, 20 en SI* In foto 22 is Mn
sterke vergroting van se» juist bevruchte zaadknop te sien. Van het aantal getelde saadknoppen was <55#5^ bevrucht.
Twee en een halve dag, dus omstreeks 5© uur na de bestuiving werd een extra fixatie uitgevoerd, oodat volgens lit.opgaaf
omstreeks die tijd bevruchting verwaofat km worden. In feite vond dese fixatie 56 uur na de bestuiving plaats. Be beelden weken niet erg af van de vorige 2 fixaties, naar wel bleek nu# dat het tellen van het stuifmeel op de stenpel hoewel doenlijk,
tooh wel moeilijk wsrd. Veel gekiende korrels net snelle buis»
groei gaven een geringe fluorescentie in de korrel self, waar door dese gemakkelijk over het hoofd werd gesiezt« Met een grote vergroting is so*n korrel dan nog wel te herkennen, naar een geringe scherpte diepte geeft dan toch wei kans dat nen se niet snel giet. Bovendien is in zo'n geval niet altijd net sekerbeld
te seggen of de betreffende korrel leeg gegroeid is of nooit
gevuld is geweest* In het
kstalltftit van het atuiftaMl al bekend was» «peelde dit geen rol» Veel sin heeft echter een stuifneelkieaing bepaling sa 2| dag niet»
«• 8 •
Dus
in
dit geval mama de kieaiing en de buialengte niet te bepalen»Jk
IkfefedB HAM |uui| ^ £ M&j4l ^ %mA> iuAlV^aitMälkltt
QBQiv M giu»9b HUH «InaininV 8U viZflXI KwuVn IlvODtn« nV« bevruebtingspereentage bedroeg 69*7#. Het was dus nog iet« toege-nemen t.o.v. 8 dagen na de bestuiving. Foto's en 2% geven nogenkele beelden, die arterk lijken op de vorige foto1«. Wat hierbij
wil getracht is n&ar voren te brengen* is de nogelijkheid van eabryo- en eixiospersigroei vast te «tellen. Waar de aaadknop in-Mudi* >iM fluoresceren werd aansenoenn. dat het eaforyo of het endosperm in ontwikkeling was*
Drledagen na do bestuiving was hot stuiftaeol niet ««er op do
steopel to tellen. Het fluoresoerende dool van do kiembuiwm was heleaaal uit do stijl gegroeid of bevond sioto onderaan do stijl (oen uitsondering daargelaten). Hit bevruehtingspereentage leek au
lager to lift»** <*•» 2 dagen of 3$ dag na do beatuiving. Dit is natuurlijk niet s»gelljk. Wol aogelijk is« dat do faevmehto saad-knoppen tiiot verder sioh gaan ontwikkelenMaachien geaborteerd
waren« Mogelijk is dit altijd bot geval* oiaar aiasohien aoet do oorzaak in do «othodo gezocht worden en sal dit niot uitgroeien van bevruchte aaadknoppen aan do plant niet of in geringere aate plaatsvinden dan bij bin—sn op een bodoft* Boe het ook sij, do bevruohting bedroeg nu 55*9£» Vel toegenomen was hot percentage cabryo-ontwlkkellng, Dit mi nu 13«?j(» In éo genaakte foto*« is getracht dose veroraterstolide «sfarjro^grooi vast to loggen (sie foto 85« «sar vooral foto f6).
Vier dagen na do beatuiving mis oenselfde trend vast to stellen •Is bij de bleeaen, die 3 dagen na do beatuiving gefixeerd waren,
fifst po^re^nxta^jo s^^adBcaoppo^n ^wnwi io^yj aindor en bedroeg nu 54.5& naar hot
mm
tul eabrjro's look duidelijk too to neaon (66.2#). Bu look filtereoösinatle 4 iets duidelijker beelden togovon (sie foto 28 t.o.v. foto 27).
ta
foto 89 ie een Storker« vergroting van dosolfde saadknop to sien* ®rim
scherp gestold op do liftMMd (is waarschijnlijk het eiferyo) on niot op de «doro-pyle, die desondanks toch ytog to ' #m valt sijdo fluorosoentjie kleabuis, die daar doorheen loopt. Opgewerkt
dient nog to worden« dot do fluore«oentie in de stijl stoods »lin der «ehijnt to woeien bij het vorderen van do tijd* Dit is loglseh en kantœgeselireven worden aan hot nigreren van de inhoud van korrel en b*H« naar lagere regionen*
Tot «lot enkele beelden van onbest oven blooaen aan toet oind van do proof gefixeerd* Foto 30 geeft eon beeld van do seofvsten«
lijk fluoresceren» Ttnitiriiif <rf verwisseling atfet klembuizen lijkt vrijwel uitgesloten.
foto's 51 «n 58 geven zaadknoppen van deze bloemen te sien* Bij de grootste vergroting lijkt de embryozak -qàat te onderscheiden te «< fc| maar fluopemtntie 1b In |*w velden of wegen hier te Ook van 1 week oude preparaten werden nog feto1« gemaakt (van
beh.5 » f dagen na de bestuiving) zoala foto 55 laat sien» was dit preparaat zonder meer t* gebruiken. Foto 5* goeft zaadknoppen to sien (ook van bell* 3) waarvan de bloemen 1 week la de kleur stof bleven. Ook Mm deraeli.1k oreoaraat ia sonder neer bruikbaar. Samenvatting fixatie-tijden
8 uur na de bestuiving 1« da atulfmeelkl eming goed ta bepalen, de lengte van da kieabulzen nog niet*
S uur aa de bestuiving ia da kleming waarschijnlijk *t basta te bepalen. Eveneena meetbaar ia da lengte der pollenbuizen.
1 da« na da iMWtvdvins is da kieming nog vast ta stallen en da bulslengte ta »eten. Tevens (in dit geval?) begin van da bevruch ting.
na da bestuiving is bat atuifmsel soms nog wel op da stenpel te tallen* »aar hat wordt moeilijker. Klesbuisleiigte niet «eer ta meten, bevruchting goed vast te stellen.
3-4 da«en na da bestuiving ia da stuiflaeelklesilng niet of nauwe lijks ta bepalen» Kieaibuislengte niet maar te meten. Bevruchting la vast te stellen» aaar dese lijkt minder dan na 2 dagen! Da eabryo-groei of althans mit daarvoor wordt aangeslen wordt vanaf 5 dagen na da bestuiving slehthaar*
Zoals blijkt# aahijnan niet alle bevruekta saadknoppen embryo's ta pm> Daarom werd —» volgend proefje g opgezet.
Gezien hat fait* dat niet alle bevruahte zaadknoppen schatten uit ta «roeien werd het volaende overwoaen.
1. De waargenomen fluorescentie in da saadknoppen heeft niets »et embryo-groei ta maken*
2* Afsterven van aan daal van da bevrusbte zaadknoppen la een 5* Desa afsterving was list gevolg van da gevolgde — n M e
xo
-Punt 1 zal later onderzocht worden met een andere kleuring.
Punt 2 en 3 werd getracht met onderstaand proefje nader te onderzoeken.
Proefopzet »
Bloemen werden aan de plant gecastreerd, van een etiket voorzien en bestoven (21/4/1969) •
Het fixeren vond plaats na: 1. 5 uur (21/4) 2. 1 dag (22/4) 3. 2 dagen (23/4) 4. 3 dagen (24/4) 5. 4 dagen (25/4) 6. 7 dagen (28/4).
Tevens bleven 10 gemerkte en aldus bestoven bloemen aan de plant* Het lag in de bedoeling na te gaan hoeveel zaden deze bloemen bij uitgroei zouden geven en of er een verband bestond tussen het aantal bevruchte zaadknoppen of het aantal uitgroeiende embryo*« t.o.v. het aantal getelde zaden.
De gevonden resultaten zijn in bijlage 4 blz. 7 opgenomen. Toch moet dit proefje als mislukt worden beschouwd, omdat door de tuin de meeste vruchten zijn geplukt, zodat het aantal zaden niet kon worden vastgesteld.
Resultaten
Hoewel de kieming goed was, waren de resultaten in deze proef duidelijk minder dan bij de voorgaande proef.
Ten eerste was de bestuiving minder. Dit kan aan de bloemstand gelegen hebben. In "vitro" staan de stempels omhoog gericht en zal dus het stuifmeel niet zo gemakkelijk eraf vallen. In vivo hangen de stempels naar beneden en zal door de zwaartekracht het stulffeeel gemakkelijk naar beneden vallen« Bovendien bleek
uitgroei van de buizen minder «»»1 te verlopen t.o.v. de
; .
eerste proef. Oorzaak! of een minder goede kwaliteit van het stuifmeel (niet waarschijnlijk, zie de kieming) of de gemiddeld
lagere of de afwisselende temperaturen» Vel kan men weer het
zelfde verschijnsel van een afname van hst percentage bevruchte zaadknoppen na langere tijd vaststellen. Na 3 dagen zag men het hoogste bevruchtingspereentage (21.3#), dat bij latere be palingen niet meer bereikt werd. Het aantal zich ontwikkelende embryo's nam hij een latere fixatie wel toe. De bepaling van 4 dagen na de bestuiving waren over de gehele linie niet zo best»
• u
-kan word«n, Bekijkt * — u n — T w w t r t f U i d a n
wtir%
10 geaerkte bloaaea,
7
gezeter § deor de tuin geplukt. 8« ralwnte f wueWMHB 11 an 24 Baden en 5 en SI klein gebleven
m
yfjA %e gtütlat* m hlifff** anige wêwNhi te heehten. Wei Is !»•« toevallig so, det bij de laatate bepaling (7 data» na de beatuiving fiaaran) 3 bloaaen een aleehte bevrueh-tin« te «Sm gaven (bloem |4 en 8). Dit Itaafc overeen aart de 9*» vwdm "aefcttog" in» 7Q5*. Ven het uetal aaden valt niet veel te aaggeiu Wel werd niet 44a kaar bij een bl««i een bevruchting vast 24 + 52 • 76 laafflminppan ®i*aol««u Dit gedeelte van de
<§ng berhaald worden to —w afMntwrUJke
Vergelijk bepaling la vitra en to five« yij|iB n^| ffm to tot kart de
ai 'vericre^ien • fcawala p
galflomrt totaal gekiead
%
ktortyuto lengte par air In vitro 2 nur 244 «56 95.3 5 UMP 178 1«5 96,1 + 79 m,* a» 1 dag 184 198 9M • 5771 u. n 5 uur 86 m 97*0 î 969 19® 1 dag 120 m 90.9 *na» 114 f dagen 105 m 95.5 Î35" 70 nCMMWIMHI VI »at da overgang at*«epel/atijl. to five to da
||f f<i van da bulagrœl tuaaen 5 uw en 84 uur: to vitro 50Qe/uurj to vivo gay/wur#
•tiâtaafliiBm BH> Kl. a $1 *,©• fl t.o.v 1» vitro S uur
2,0
17?.? 1.2 0&
0 S uur 1,3 158.5 0.9 0 0 0 1 dagf$
t0
146,5 53.9 0.7 0*5 0,9 3 dagenim*
3 171.1 65*6 1*1 0*6 1,0 2|dg.<56u.)3 dagen 100,6 144.4 69.7 i.3 1,6 a.3 2|dg.<56u.) 3 dagen 78,6 l4o,6 55.9 10,8 7.7 13.7 4 dagen 77.2 141.6 54.3 5i a 36.1 66.8 .îfijte IS mm «naa
ZM
lïïï«» 0 136*8 0 0 0 0 1 dag 10,0 145.3 6.9 © 0 0 t dagen 13.3 iai,a 11*0 1,0 0,8 7.5 J «iâgen 30,4 148.8 a.3 f.2 1,5 7.Î J «iâgen 9.S 148.1 6.» 1.0 ©,7 10,9 7 dage» 33*9 13®#* 17.? n,8 15,8 91.2* 12 *
St frottait verttfcHlta tija waartchijnliJk aan de buia«rotl tot tt schrijven. OMMMM dient nog te werden, dat dt lengte-«etingen
nooit «xtot «ija door lut IMMÉU va» ét tteapels ta dt aanvan kelijke grillige groei ran da kitafcuisea. Dt stuifueelkiealng Hott mpfjmil overeen. De stuifiaeelbesotting 1« ainder i»ij de %%m«ta ia vivo* 9t grooi it aiot preeies ta vergelijken, doordat
«HP verschillende wijaa geaeten it. Wal ft bot veraehil in groei tutten i uur en 2* uur ta vergelijken. Mi versofail ia «Ml bijson-der groot. Ia dit tijdabaatatl leek hat ttuifaeel in vitro I x
Mtntl tt «rotitn Dit Httt niet ut*«««»« «MI badtakt **»* gedurende deze 19
mm
dt naobt 1« opgenoaen. De twptiPt&isur vt» da ruitte tal Mi dt blawta in vivo < tt immatp <*«*» 80eC ** *wSt bevruehting verliep (daardoor?) Binder voorspoedig ia vivo dan in vitro« Het asa&tl saadknoppen bedroeg • 1*0* bij de bloeaen in vitro gtaiddtld iett hoger, bij dt blotata ia vivo geaiddeld
iett lager. Mittthitn htudt ook dit verband «tt de kmiittit vta dt bloeaen, dit mogelijk bij dt "ia viva»bepalint" minder waa.
De «rifcraMBPMi Wh» I-«*»- beste bekeken worden does* naar het
tateryo't tt Mftw en aaax* litt peroesttgt btrtktad vta Int totaal saadknopptn. Btt gaat er i«sera op lijlwi» dtt at ItffgniPt tijd (* dtgtn) niet «eer bijl «Ut bevruchte saadknoppen dit rast
valt raat tt tttllen. Voor eabryo-groei it do bepaling in vitro «Inder gesehikt, oadat hierbij at 4 dagen athl—sT ui" no t gaat op~ treden» waardttr dt blaitia gaan rotte» ta bruin gaan kleuren. gftavafctlag
Hit dest aerie proef Jee bleek, d«t «tt het gevolgde kleuringsseheaa dt ttiiil fmeatlrt tuf mi dt bai^ppoti mi dt bovrutbtlag goed ff jy* vast tt stellws. M)t7o«po9i lijkt overtuigend. Dit tal «et verdert proeven ondersocht worden.
Voor de bepaling van de stuiftseelkieaing lijkt ten fixtUt van 2 ta $ uur at dt bestuiving pHNhUct« Tote de hwt ffgyiH'f "fHUmya ai Ja fititlés vta 3 en 84 uup ne de bettuiviac kniikbair «tt voor de bnnthUaii fixaties 2 en 3 dagen na dt bestuiving. Mavyo»«poti lijkt 4*7 dtgta m dt btstuiving# tflitiiirtlljlr van dt ctwtandigbeden vast tt tttllMi tt «< J»- Dit is« reeds bleek Ota btttjt
4vtitmt btptling* Wol litudt Imigf» ffif, det
j*** 13
-^•NVMpSjS Hlï QU8 at UtfiMiGllPOVID IU0^UC ftttXS^pMMMfl VOPwl#
1» fixaties sullen 5 uur en 1, 1 «n J dagen na de bestuiving uitge voerd worden voor proeven ta vitro. Bij proeven in vivo
lam
bovendien neg Mn extra fixait« 7 dagen na de bestuiving Hfwmgl worden, De flucti* 2 uur na de bestuiving «& voorlopig ia verband s*t detijdas-besparing achterwege gelaten werden.
De proefneeawter, VU *,RsMtMJn«
Miltam 1»
Oorapronkelljk recept volgen» Khof Y.O. m Bate, S* uit Euphyt lea,
Neth.Journ. ef Plaat Breeding I.V.T. Tel 1?» Me. 8 okt. 1968 bis« 298-502.
ObitFVl&I muttrnm tubM h* «pan» at flttSCMaailfia«
Vera of geflxaord materiaal gebruiken. Fixeren aet P.A.A. Macareren afhankelijk van to aUJldlite «xi de eonaiateiïUe.
Voor t—aat wuttmmm gedurende 1 uur ia In.NaOH. Uitvasten. Klauren la een ^ilawlwi van 0,1# aniline v.i, la 0*1 n.l^ P0^ gedurende 1 nacht. Uitdrukken en bekijken la éa kleuratof of la glycerine.
Bill— g»
Kloning to vitro ingeset • 11*15 uur bij 82 - 25°C. 0«t«ld m 16.15 uur. Ol« Mtrtf void In van Tiegha»cell«m plut«. Het kiemlnga«ediu«
bevtond «1% 7% «ulker «n 0,007$ S^BO^ ill «qua dost. Kl«slf*s in 6-voud bepaald, R««ultaaffes 1 » 1 e t i t i w l # k i « a b u i *«n laag 2« 17% * id«a 3. 1^ " Id«« 4, 16# " idea 5* v*rdm|l« drupfwl
6* 17Jf goklcod* kUribulMo in^|
till AM J HkM *% Eäx tiifcjafcJki fliakMlk 4 «M MW J Al — jfc HIAkM (Kwifwoxa« juMXiig i>cp# n0Xgp<Ki *08P ^WMiire m Tiwo tMipaaxd |Oca nag
Bijlage 3 bis. 1
Pot o 1
Onbestoven, stempelopper-vlak. Beginproef gefixeerd. Filtere orabinatie 2»
Vergr. 125«
Poto 2.
Onbestoven, stijldeel. Begin proef gefixeerd. Piltereombinatie 2, Vergr. 125*.
Bijlage 3 bla. 2
Foto 3. Onbestoven. Zaadknoppen. Begin proef gefixeerd. Piltercorabinatie 2, Vergr. 5Qx.
Bijlage 3, biz. J
Foto 4. Stempel, 2 uur na de bestuiving Filtercombinatie 2.
Bijlage J» biz. 4
Foto 5. Stempel» 2 uur na de bestuiving. Filtercombinatie 1 Vergr. 125x
Foto 6. Stempel 2 uur na de bestuiving.
Filtercombinatie 2. Vergr. 125x.
Bijlage 3, biz. 5
Poto 7. Stempel, 2 uur na de bestuiving.
Piltercombinatie 3 Vergr. 125 x
Poto 8. Stempel 2 uur na de bestuiving.
Filtereombinatie 4 Vergr. 125 x.
Bijlade 5# bis# 6
Foto 9« Steapel + iets stijl 5 uur na de bestuiving
Pi 11ere omb lnat ie 2 Vergr. 50*.
~—s
Foto 10. Overgang stetapel-stljl 5 uur na de bestuiving Filteroombinatie 2 Vergr. 50 x.
Bijlage 3, bla. 7
Foto il. Stempel 1 dag na de bestuiving.
Piltercombinatie 2. Vergr. 50 x.
Foto 12. Stempel, 1 dag na de bestuiving.
Piltercombinatie 2. Vergr. 125 x.
Bijlage 3. biz. 8
Poto 13. Deel van de stijl 1 dag na de bestuiving. Xiembuizen met eallose-ppopjes.
Fllterccmbinatie 2 Vergp. 50 x.
Bijlage J, biz. 9. Foto 14. Zaadknoppen, 1 dag na de bestuiving. Filtereorablnatie 2. Vergr. 5Qx. Foto 15. Zaadknoppen, 1 dag na de bestuiving. Filtercombinatie 2. Verg. 125x.
O
— - „ «I t* Bijlage 3, blz. 10. Foto 16 Stijlelnde, 2 dagen na de bestulYing. Filtereorabinatie 2. Vergr. 50 x.Bijlage 3, biz. 11
Foto 18. Zaadknoppen 2 da gen na de bestuiving* Filtercombinatie 1, Vergr. 50 x. Foto 19. Zaadknoppen 2 dagen na de bestuiving. Filtercorabinatie 2. Vergr. 50x.
Bijlage 3, bis. 12 Foto 20. Zaadknoppen, 2 dagen na de bestulging* Filtere orebinatie 3 Vergr. 5Qx. Foto 21. Zaadknoppen 2 dagen na de bestuiving. Filtereorafoinatie 4. Vergr. 5Qx.
Bijlage 5, bis. IJ
Foto 22. Zaadknop 2 dagen na de bestuiving. Bulsengroeien van de kiembuis in de zaadknop. Duidelijk verschil tussen het gedeelte van de buis buiten en binnen de zaadknop. Filtereombinatie 2.
Bijlage 3, bis, 14
PotO 23.
Zaad knoppen, 56uur na de bestulYing. Filtereaobina-tle 2.
Vergr. 50x
Foto 24.
Zaadknop, 56 uur na de beatulvlng. Embryo ont wikkeling?
Filterocwbinatie 2. vergr. 125x*
Bijlage 3, biz. 15 Foto 25. Zaadknoppen J dagen na de bestuiving, Filtercorabinatie 2 Vergr. 5Qx. Foto 26. Zaadknop 5 dagen na de bestuiving Qabryo-ontwikke-ling? Filtercorabinatie 2. Vergr. 125x.
Bijlage J. biz, 16. Foto 28 Zaadknoppen 4 dagen na de bestuiving. Filtereombinatie 4 Vergr, 50x. Foto 27. Zaadknoppen 4 dagen na de bestuiving. Filtercombinatie 2, Vergr. 50x.
Bijlage 3, biz. 17
Foto 29* Zaadknop 4 dagen na de bestuiving. Scherp gesteld op "embryo".
Filtereorablnatie III. Vergr. 125x»
Bijlage 3» biz. l8.
Foto 30. Zeefvaten uit de stijl (afkomstig van bloemen 4 dagen na de bestuiving)* Filtereorabinatie 3.
* Bijlage 3, biz. 19
Foto 51.
Zaaöknoppen van onbestoven bloem bij het eind van de proef.
Filtere otab inatie 2. Vergr. 50x.
Foto 32.
Zaadknoppen van onbestoven bloemen bij het eind van de
proef.
Filtereomhinatie 2. Vergr. 125*.
Bijlage 3, biz. 20,
Foto 3J.
Zaadknoppen 2 dagen na de be stul ving.
Filter-combinatie 2. Vergr. 50x.
Preparaat 1 week oud'.
Foto 34.
Zaadknop 2 dagen na de bestul-ving. Filtercombinatie 2. vergr. 125x.
Materiaal 1 week in de kleur stof I
Bijlage 5a, t»l*. 1.
Enkele technisch« gegevens betreffende de fat*1«.
Oculair 12.5* lé din fil«.
JBWW . Neg.no. Object Lichtmeting *iJd (SM.)
g
i
i
1
s1 H.785*8 10 x •«baal 5 - 75 60 2 8 21.785-3 1® X sehaal 3 - 9© 55 2 5 21.785** * X sehaal 3 - 55 110 2 4 21,785-5 * X schaal 3 • 57 85 2 5 21.785-7 10a «haal 5 - 25 200 1 6 21.785-6 19 X schaal 5 — *0 120 2
?
21.785-8 10 x sohaal 5 - 4e 120 3 8 21.785-9 10 x schaal 3 • 25 200%
9 21.785-IO 4 x sehaal 3 * 95 60 2 10 21.785-11 4 x sehaal 3 * 95 60 2 11 21.785-12 * X schaal 5 • 100 50 2 12 21.785-15 li x sehaal 3 - 95 55 2 13 21.785*1* * X sehaal 3 • 100 50 2 1* 21.785-15 * X sehaal 3 - 70 70 2 15 2I.785-I6 1# X sehaal 3 - 5© 100 2 16 21.785-17 • X achaal 5 - 60 80 2 17 21,785-18 1® X sehaal 3 - 80 60 2 18 21.785-20 * X acnaai. 5 * 55 90 1 19 21.785-19 4x sehaal 3 - 80 60 2 80 21.785-21 * X sohaal 3 * SO 80 3 a 21.785-22 *x sehaal 3 - 35 m 4 22 21.785-25 10 x 5 . 60 80 2Bijlage Ja bis. f
gpgßwm
Ooulalr 12.5x do foto*«.
* V x 155*36# li din.
mo MOB »Mo Obieot Lichtaetinsc Tijd (i t3 21.880-1A 4 X achaal t - 10 50 24 21.880-3A 1 © * SOfaaal 2 •" 50 10 85 21.880-€A 4 X sehaal 2 • 15 40 26 21.8Ö0-9A 10 x aohaal 3 - 60 80
m
21.88Q-10A * X ITFFHFLIFLIL 5 ** 50 120 20 2I.88O-XIA 4X
sofaaal 3-20 250 29 21.880-15A10 x
aohaal 2 • 10 50 3© 21.880-16A 40 x soîaaal 3- 100 5© 51 21.880.17A ix aohaal 2 • 13 4© 3« 21.880-18A 10 X sofaaal 2 - 3 0 20 33 21.880-20A 4 x sofaaal 2 « 10 50 3* 21.880-19A 10 x aohaal 2 » 40 12 Piitereiwblnatia 2 a 2 8Bijlage 4 bis« 1
le Proef Bloeaen op voedingsboden bij * 20ÄC. Stuifroel
tat» lengte zaadknoppen
• tot.
• tot« lengt«
behandeling 1 niet geteld, was oiafceetowti H»h»n<tflHnp 2i fixeren 2 uur na de lx>lu1>tin.
1 «79 2»
ê
1^5 0 2 260 276 0 187 0 3 292 300 0 186 0 4m
m
9 160 0 5m
m
0 135 0 6m
«3 0 173 0 7M
214 0 175 0 8 40? 6 200 0 9 193 1Ö9 5 152 0 10 . jtt 318 0 156 0 fotaal 2,458 #•558" 20 y 1.737 0 0e«. 95*3* 1*2*Be! t 5, fixeren 5 uur n& de beatuiving
1 138 140
î
8e?1 2 151 0 8 224 234 0 148 0 3 221 224i
90 0 199 0 4m
178 •m
85©
148 0 5m
30 •m
10© 0 135 0 6 200 211 + «» 55 4 136 0 7 142 15® • 4» 95 3 155 0 8 184 193 * «• 90 © 135 0 9m
224 •m
90 0 I6l 0 10m
264 * 80 4 157 0 Totaal 1.777 1.850 • 4» 765/9 13 I.525 0 Oen» 96,1* 79^UDfle gMOten vutf gang ate«pel-atijl.
•eer de langste gemeten« Cijfers geven telen van <
__ tenawter weer* dese beuling:
Bijlage 4 bis. 2
le PipMft blosaen OB voediiutebodaa
lengte saatlmoppen e«br. Op«,
te*. * tut.
Se) 5 4* fixeren 2# tua» ne de bestuiving
1 203 205 £ 650" 94 157 0 * Zie op. bij behandeling 5
S
m
378 • en 620 1% 157 13
m
149 î 690 125 0 Nog niet uit stijl gegroeid4
m
172 • 650 96 146 0 Gedeeltelijk uit stijl gegre 5m
326 • 600m
156 4 Volledig uit stijl gegroeid6
m
tîl* m
u
155 0 Ida#7 u& 195 • 606 12f 157 0 Idem 3 166 182 •
m
660 23 140 0 ïfte«9
m
165 •m
600 09 160 0 Tdtw10 79 80 • 620 4§ 152 2 Ide.
a 1.8^7 1.979 6.220 780 1.465 7 Ops. bij bloes 4, somige ko Qrf «s w» /y K_ 0 raäft gaan sterker fluoresceren,
S6>,t35 5,*mA 53*« «aar er sljn mi ook Met-fluorea korrels.
Behl imtoi (ng <5. fixen sn 2 dagen na de bestuiving
1 ttuifleeel vol 179 208 1
2 Xamla lij. vol 8l 175 0
3 ten nog vol 12É 156 1
4 telbaar te vol 95 l6l 0
5 sijs niet vol 120 201 0
6 gsdaan i. vol 79 144 1 7 *«*„ tijd vol
m
160 0 8 vol 13* 175 2 9 volm
1493
10 volm
1@2}
taal 1.125uni
11 «M*Kieabuizen tij» ook uit de
stijl gegroeid. Nu »ei «sar
weinig fluorescentie bij de overgang «tempel/stijl. ïn de
Bijlage 4 bis. 3
Xe Proef bloe*en op voedingsbodea.
Stuifmeel lengte zaadknoppen eaibr. Opa.
+ tOt. 4 tot.
Behandeling 6* fixeren 2| dag (« 56 uur) na de bestuiving.
1 21? 296 vol los 157 1 2 vol u% 157 0 3 vol 117 164 0 4 vol 106 151 12 5 vol 89 113 3 6 vol 57 75 0 7 vol 149 167 4 8 vol 107 1?4 0 9 vol 106 l4l 3 10 vol 85 145 0 a 1.006 1.444 23
Stuifmeel lijkt nog wel tel* baar te zijn, maar 't wordt Moeilijker* Bovendien grote re kans op fouten. KieÉbui-zen neten heeft geen zin neer« want stijllengte« bulslengte»
Gem. 69,7
Behandeling 7» fixeren 3 dagen na de bestuiving.
1. Zie op«, bij 110 l40 3 Weinig fluorescentie in de
2. beh. 6 74 149 65 Idea. 3 4 62 58 134 m 11 10
alleen onderaan stijl fluor» «MBU.. Uaa.
5 133 152 4 vrijwel gehele stijl
fluoreso. nog
6 57 137 2 onderste 3/4 deel stijl
fluorese.
7 96 143 4 onderste helft fluoresceert
8 86 155 4 geen fluoreso. in de stijl
9 47 119 2 laatste f deel stijl
fluorese.
10 » il,_ 125 .
, ?.
IdeaTotaal 786 1.406 108
Bijlage 4, biz. 4
le Proef# blœaen op voedinganiveau. Zaadknoppen eabryo
+ tot.
Behandeling fixeren 4 dagen na bet bestuiven
1 10^ 172 95 2 7* 173 50 3 76 128 54 4 42 117 25 5 45 106 18 6 92 13* 84 7 ér 149 58 8 145 218 107 9 7é 119 6 10 50 100 14 Pataal 772 1,416 511 flea. 5^.5
Bijlage 4 blz. 5.
te Proef» bloemen aan de plant. lengte stuifmeel + tot. zaadknoppen + tot. erabr. Opat. Behandeling 1, fixeren 5 uur na de bestuiving.
1 2 25 97 26 100 n.t.ra. 10-57* 0 0 138 125 0 0 3 133 135 5-20 0 135 0 4 106 109 5-35 misvormd vruchtbeginsel 5 95 98 5-15 0 I6O 0 6 56 57 n.t.ra. 0 154 0 7 141 145 5-35 0 178 0 8 18 18 n.t.ra. 0 171 0 9 86 93 5-4G 0 149 0 10 106 109 5-35 0 158 0 m,. j. TOT* 863 890 5-57 0 1368 0 6em. 277/14 989
n.t.ra » niet te «eten
*20 delen« 1000 Öeraeten «et stempel.
geen zaadknoppen
Behandeling 2$ fixeren 24 uur na de bestuiving.
1 109 117 + 200*
m
0 135 0 * 48 « 4002 l6l 167 • 400 38 129 0 hele stijl door kierabuizen 3 155 171 200-25Ô 0 165 0
4 l6 l8 + 250 0 l40 0 vrijwel hele stijl door klembuizen 5 102 133 150-200 0 95 0 slecht vruchtbeginsel
6 156 165 i 500 0 171 0 vrijwel hele stijl door kierabuizen 7 197 205 400-450 35 154 0 hele stijl door kierabuizen
8 58 60 + 200
m
0 145 09 IO3 110 400-450 4 159 0 hele stijl door kienfouizen
10 145 176 + 400
m
25 160 0 vrijwel hele stijl door kierabuizenTot. 1202 1322 150-450 4250/13
100 1*53 0 Gem.
Bijlage 4, bis, 6
2e Proef, bloemen aan de plant
stuifmeel lengte aaadknoppen eafcr. Op».
• tot. • tot.
Behandeling 3» fixeren 2 dagen na het bestuiven
1 95 103 + 450
m
50 104 4 tot vruchtbeginsel 2 123 126 *350 «* 10 92 0 tot vruehtbeg. slechtvruehtbeg.
3 m 180 72* 28 132 6 * in vruchtbeginsel
vanaf 10 delen*440
4 m 109
£
83 5 173 0 tot vruchtbeginsel5 143 166
m
60 0 164 0 nog niet tot vruchtbeginsel6 m 73 • 4M» 70 8 129 0 » H H «
7 140 151 +
«» 89 17 87 0 in vruohtbeginsel
8 SI 25 £ 80 O l4l 0 ff M
9 147 151 £ 70 0 79 0 nog niet in vruchtbeginsel
10 40 42 • 93 15 UI 0 tot vruohtbeginsel
Tot» Oen.
1053 1126 800 + 617 133 10
Behandeling 4, , fixeren 3 dagen na het bestuiven
1 24 113 3 helemaal door stijl ge
groeid 2 19 150 3 idem 3 23 132 2 idem 4 31 145 1 idem 5 21 142 1
tém
6 *2 184 6Mm
7 52 113 0 iden 8 20 148 1 ide» 9 44 153 4 idem 10 28 148 1 idea Tot, 304 1.428 22 idea Gem.Bijlag» * bis* 7
2« Fro##
$
t&MMmmm
d« plant Basdlt&Qppsn Mbrjro• tot#
Behandalinf 5, fixeren % dagen im hat »e«tulT*n
1 1? 1Û 1 15 162 • 3 U 162 1 Ii 151 0 5 1 169 1 6 i 147 t 7 It 127 « 0 $ 146 0 9 I 137 0 10 J1 1*3 3 Tot* 92 1.482 10 Hfl«*
Bahamtellwg 6» fixer«» 7 dagen na Hat feeetuiven.
1 • 13* 1 2 I 131 • 3 2* 136 tl 4 0 116 0
5
m
i*5 *t 6 14 16* Ü 7 ff 178 57 8 3 112 39 3# 1** 36 tMk lijkn er greif saadknoppen ta lijn 4f# siti
10
0
57 fllMNMNIWWßSTot. am
1.38* medm.
Aan de $Uwtf 7 ultpfrMld van da IG* mervan 5 door da tocU geplukt. Reatarende 2
(alet
