Dimers of Azurin as model systems for electron transfer
Jongh, Thyra Estrid de
Citation
Jongh, T. E. de. (2006, September 12). Dimers of Azurin as model systems for electron
transfer. Retrieved from https://hdl.handle.net/1887/4554
Version:
Corrected Publisher’s Version
License:
Licence agreement concerning inclusion of doctoral thesis in the
Institutional Repository of the University of Leiden
Downloaded from:
https://hdl.handle.net/1887/4554
Proefschrift
ter verkrijging van
de graad van Doctor aan de Universiteit Leiden,
op gezag van de Rector M agnificus Dr.
D.
D.
Breim er,
hoogl
eraar in de facul
teit der W iskunde en
Natuurwetenschappen en die der Geneeskunde,
vol
gens besl
uit van het Col
l
ege voor Prom oties
te verdedigen op dinsdag 12 septem ber 2006
kl
okke 13.
45 uur
door
Thyra Estrid de Jongh geboren te Am ersfoort in 1978
Promotiecommissie
Promotor:
Prof. Dr. G.W. Canters
Co-promotor: Dr. M. Ubbink
Referent:
Prof. Dr. O. Farver
(DFU Kopenhagen)
Overige leden:
Prof. Dr. O. Einsle
(Georg-August Universität Göttingen)
Prof. Dr. M.T.M. Koper
Prof. Dr. J. Brouwer
Thyra de Jongh, Amsterdam 2006
Printed by: PrintPartners Ipskamp B.V., Enschede
Cover: Cartoon representation of a close-up of the interface between two molecules of w ild type azurin (P. aeruginosa). The copper atoms are depicted as dark blue spheres. The sidechains of residues His117 are shown in stick representation. The ordered water molecules in the crystal lattice are indicated by semi-transparent blue spheres. (This picture was generated using PyMol 0.98).
Horizon
Een immer zinvol streven
Een doel dat nooit benaderd worden kon
M ijn horizon
Een lijn zo recht en vast getrokken
G een enkel punt dat hem bepalen kon
M ijn horizon
Z o vaak verborgen achter duist’re wolken
N ooit een die hem verdrijven kon
M ijn horizon
A ltijd aanwezig en niet te bereiken
G een mens die hem begroeten kon
M ijn horizon
G een vaster punt dat steeds beweegt
G een beter doel dat steeds weer vlucht
Ik ga er heen
U it: G edichten van een K leine Z eeman op een G rote Z ee R icor de Jongh
N ow, bring me that horizon!
C aptain Jack Sparrow, Pirates of the C aribbeanAbbreviations
1,5-dip 1,5-di(imidazol-1-yl)pentane 1,6-dih 1,6-di(imidazol-1-yl)hexane azu azurin BMME bis-maleimidomethylether DA donor-acceptor pair DTT dithiotreitol H extinction coefficient E. coli Escherichia coliEPR electron paramagnetic resonance e.s.e. electron self-exchange
ET electron transfer
HSQC heteronuclear single quantum correlation IPTG isopropyl-E-thiogalactopyranoside Kd dissociation constant
kese rate of electron self-exchange kET rate of electron transfer KPi potassium phosphate buffer MES 2-morpholinoethanesulfonic acid NMP N-methylpyrrolidone
NMR nuclear magnetic resonance
ox oxidised
P. aeruginosa Pseudomonas aeruginosa
red reduced
RT room temperature
TCEP tris(carboxyethyl)phosphine UV-Vis ultraviolet and visible spectroscopy
WT wild type
Amino acids
A Ala Alanine M Met Methione
C Cys Cysteine N Asn Asparagine
D Asp Aspartate P Pro Proline
E Glu Glutamate Q Gln Glutamine
F Phe Phenylalanine R Arg Arginine
G Gly Glycine S Ser Serine
H His Histidine T Thr Threonine
I Ile Isoleucine V Val Valine
K Lys Lysine W Trp Tryptophan
Table of contents
Chapter 1:
Introduction to electron transfer in a biological context7
Chapter 2
:
Modelling of interprotein electron transfer by covalent and non-covalentcrosslinking
25
Chapter 3
:
Electron self-exchange in N42C-B MME azurin dimers as a function oftemperature
47
Chapter 4
:
Electron transfer and complex formation in a pH sensitive dimer ofazurin
59
Chapter 5
:
Electron transfer in a crosslinked protein dimer mediated by a hydrogen-bonded network across the interface85
Chapter 6
:
Crystal structure of a non-covalent dimer of H 117G azurin111
Chapter 7
:
H otwiring redox proteins by ligand reconstitution using conductingmolecular wires
131
Chapter 8:
General discussion, conclusions and perspectives159
Summary
170
Samenv
atting
174
Append
ic
es
:
179
Full colour images
180
Curriculum Vitæ
190
6