Bepalen van de titer, werkverdunning en de specificiteit van de DES antisera RIV H143280, RIV H143281 en RIV H143282

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RAPPORT 83.73 Pr.nr. 505.0620

Ondeno~erp: Bepalen van de ti ter, werkver-dunning en de specificiteit van de DES antisera RIV H143280, RIV 8143281 en RIV H143282.

Verzendlijst: direkteur, direktie VKA, sektorhoofd, afdeling SERH (8x), afdeling Normalisatie (Humme), Projektbeheer, Projekt-leider, direktie RIV

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RAPPORT 83.73 Pr.nr. 505.0620

Projekt: Ontwikkeling methoden naar het aantonen en bepalen van hormonen.

Onderwerp: Bepalen van de titer, werkverdunning en de specificiteit van de DES antisera RIV H143280, RIV H143281 en RIV H143282

Doel:

Enige eigenschappen van de diethylstilbestrol antisera RIV no. H143280, RIV no. H143281 en RIV no. H143282 vast te stellen.

Samenvatting:

Van de drie antisera worden antiserum-titratiecurven gemaakt om de titer en ~'lerkverdunning te bepalen.

Om de specificiteit vast te stellen, werd een reeks verbindingen die mogelijk met de DES antisera zouden kunnen kruisreageren in opklimmen-de concentratie geincubeerd met opklimmen-de drie antisera.

Door de concentratie DES die 50% B/Bo geeft te vergelijken met de con-centratie van die stof die eveneens een % B/Bo geeft van 50, is het percentage kruisreaktie van die stof berekend.

Conclusie:

- De titer van de antisera is voor: RIV no. H143280 1:470

RIV no. H143281 1:520 RIV no. H143282 1:940. - De werkverdunning ligt tussen:

RIV no. H143280 1:470 en 1:750 RIV no. H143281 1:520 en 1:1100 RIV no. H143282 1:940 en 1:1400.

- Het DES antiserum no. H143282 is zeer specifiek voor diethylstilbe-strol. Het kruisreageert voor 1, 4% met hexestrol en <0, 1% met diene-s trol. Antidiene-sera RIV no. H143280 en RIV no. H143281 kruisreageren voor 12 en 12,5% met hexestrol en voor 1,2 en 1,2% met dienestrol. Estradiol, estriol, oestron, trenbolon en zeranol geven geen kruis-reaktie met de genoemde antisera.

Verantwoordelijk: dr \ol.G. de Ruig

CÇ(_

Hedewerkers/samenstellers: H.C.J. Bergt~. s, Th.H.~olman

Projektleider: dr W.G. de Ruig ~ ~

(4)

(5)

1.1 KE_inc.!_p~

Een constante hoeveelheid radio-actief gemerkt antigeen '"ordt

geincu-beerd met oplopende verdunning van het antiserum, '"aarna de gebonden

en de vrij gebleven hormoonfrakties ,.,orden gescheiden.

Het percentage dat gebonden is, wordt uitgezet tegen de

verdunninga-graad van het antiserum.

1. 2 Definitie

Onder de titer van een antiserum lwrd t verstaan de verdunning \vaarbij

50% van de toegevoegde hoeveelheid tracer gebonden lvord t. De werkver

-dunning is die ver-dunning waarbij 40 tot 50% van de toegevoegde

hoe-veelheid tracer gebonden '"ord t, onder de omstandigheden van de later

uit te voeren RIA-bepaling.

1. 3 }i_e.E_k~ij_ z~

De anti-DES sera no. H143280, 143281 en 143282 bevatten elk 0,5 ml

on-verdund serum. Ze worden bewaard bij -20°C.

Verdun 0,05 ml van elk van de onverdunde antisera met 0,02 M

fosfaat-buffer van b.v. 1:2 tot 1:18000.

Neem voor elke verdunning een RIA buisje in duplo en voeg aan elk

buisje 0,025 ml glycolmengsel en 0,05 ml 31-l-DES (+ 20.000 dpru) toe.

Damp droog. Neem de droogrest op in 0,05 ml methanol abs.

Vortex 10 min en voeg 0,375 ml fosfaatbuffer aan de "monsters" toe en

0,425 ml aan ASB's. Vortex gedurende 5 min.

Voeg 50 ~1 antiserum in oplopende verdunning toe.

Incubeer 30 min bij 37°C en 30 min bij 4°C. Breng 0,1 ml van elk

incu-batiemengsel over in een plastic telflesje voor totaaltelling.

Pipetteer bij 4°C in alle buisjes 0,2 ml aktieve koolsuspensie en

vor-tex. Incubeer 5 min bij 4°C. Centrifugeer 10 min bij 3000 rpm in een

gekoelde centrifuge (4°C).

Breng van elk supernatant 0,45 ml over in een plastic telflesje voor

telling van de gebonden fraktie. Pipetteer in alle telflesjes 10 ml

scintillatievloeistof en meet de radio-aktiviteit in een

vloeistof-scintillatieteller.

(6)

-- 2

-1. 4 Resultaten

,!abe.!_

.!.•.i•.!.•

Bepaling van de titer en werkverdunning van het RIV antiserum H143280

Antiserum- Totaal- Telling ge- B/T

verdunning telling bonden fraktie

dpm dpm % 1:3 5029 5037 14407 14103 95,7 93,5 1:90 4978 5010 11718 11260 77,8 75, 1 1:360 4930 '•842 9116 9324 61,7 64,3 1:900 4934 5007 6304 6525 42,7 43,5 1:1800 4975 5153 4176 4203 28,0 27,2 1:3600 4900 5229 2704 2614 18,4 16,7 1:4050 5030 4941 2345 2256 15,5 15,3 1:5400 5021 4945 2266 2443 15, 1 16,5 1:6300 5171 4792 1844 1878 11,9 13,1 1:7200 5019 5006 1614 1549 10,7 10,3 1:9100 5079 5016 1490 1275 9,8 8,5 1:10800 _{'•9'•'•} 5028 1309 1211 8,8 8,0 1:12600 4952 5042 1419 1290 9,6 8,5 1:14400 5171 5033 1080 1143 7,0 7,6 1:18200 5048 4947 979 1129 6,5 7,6 ASB 5422 5222 1287 1096 7,9 7,0 (1) (2) (3) ( 4)

(7)

Ta.Ë.e.!.!_·i•l• Bepaling van de titer en werkverdunning van het RIV antiserum 8143281

dpm dpm % 1:3 4926 5083 13893 13684 94' 0 89,7 1:90 '1931 4986 10753 10847 _{72' 7} ₇₂_'₅ 1:360 5024 4933 8649 8723 57,4 58,9 1:900 4779 4989 7215 7082 50,3 47 '3 1:1800 5028 4845 5138 4796 34,1 33

,o

1:3600 4869 4960 3448 3147 23,6 21 '1 1:4050 5081 5075 3038 3036 19,9 19,9 1:5400 5127 4997 2998 2952 19,5 19,7 1:6300 4866 4929 2550 2393 17,5 16,2 1:7200 4963 5010 1843 1826 12,4 _{12' 1} 1:9100 5214 4922 1860 1767 ₁₁_'₉ 12 '0 1:10800 5217 5461 1560 1382 10,0 8,4 1:12600 5126 5150 1621 1682 10,5 10,9 1: 14LIOO 5021 5120 1345 1291 8,9 8,4 1:18200 5060 5082 1489 1289 9,8 8,4 ASB 5171 5098 1239 755 8,0 4,9 (1) (2) (3) (4) 8373.3 - 4

(8)

-- 4

-!_abel:_

.!.•i•l•

Bepaling van de titer en werkverdunning van het RIV

antiserum H143282

dpm dpm % 1:3 4815 4742 13728 13596 ₉₅_'0 _{95' 6} 1:90 4517 4649 10621 10843 _{76' 2} 80,0 1:360 4931 4978 10531 10787 ₇₁_'2 _{72' 2} 1:900 5106 5026 8811 9115 58,4 59,5 1:1800 5170 4969 6158 6306 41,3 40' 7 1:3600 5172 5142 4069 3988 26,2 25,9 1:4050 5190 5127 3665 3326 23,5 21,6 1:5400 5184 5214 2663 2591 17,1 16,6 1:6300 5121 5072 2549 2548 16,6 16,7 1:7200 5045 5448 2550 2308 16,8 14' 1 1:9100 5180 5087 2222 2316 14,3 15,2 1:10800 5025 5114 1827 1837 12' 1 12' 0 1:12600 5128 5036 1524 1618 9,9 10,7 1:14400 5040 5144 1366 1415 9,0 9,2 1:18200 5194 5138 1398 1526 9,0 9,9 ASB 4901 5146 1490 1162 10,1 7,5 (1) (2) (3) (4)

(9)

2. Berekening (3) x 600 x 500

%

B/T

₌

450 400 x 100 (2) x 500 100 (3) x 600 x 500 ASB x 600 x 500 % B/T gec

₌

450 400 x 100 450 400 x 100 (2) x 500 ASB x 500 100 100 hierin is:

(3) telling gebonden fraktie (dpm)

600 volume v66r afname gebonden fraktie (~1)

450 afname gebonden fraktie

ASB telling gebonden fraktie van de aspecifieke binding (dpm)

(2) telling opbrengstfraktie (dpru)

500 volume v66r afname opbrengstfraktie (~1)

400 volume ná afname opbrengstfraktie (~1)

100 afname opbrengstfraktie (~1)

ASB telling opbrengstfraktie van de specifieke binding (dpm).

3. Conclusie

Uit de figuren 1, 2 en 3 blijkt dat de titer van de antisera RIV

H143280, RIV H143281 en RIV H143282 resp. zijn: 1:470, 1:520 en 1:940.

De werkverdunningen van deze antisera liggen tusen: 1:470 en1:750 (RIV

H143280), 1:520 en 1:1100 (RIV H143281), 1:940 en 1:1400 (RIV H143282).

Figuur 1: Antiserum-titratiecurve d.d. 1983-06-10 voor RIV Hl43280

Figuur 2: Antiserum-titratiecurve d.d. 1983-06-10 voor RIV H143281

Figuur 3: Antiserum-titratiecurve d.d. 1983-06-10 voor RIV H143282.

(10)

-- 6

-4. Het bepalen van de kruisreaktiviteit van andere stoffen dan DES met

de DES antisera RIV no. H143280, H143281 en H143282

4.1 Princ..!_pe

Een reeks verbindingen, die mogelijk met de DES antisera een binding

zouden kunnen aangaan, worden in opklimmende concentraties geincubeerd

met de DES antisera. Van deze stoffen \vorden de % B/Bo berekend en

vergeleken met % B/Bo van een DES standaardcurve.

4.2 Definitie

Onder kruisreaktie wordt verstaan in hoeverre het antiserum een bin

-ding aangaat met andere verbindingen dan het eigen antigeen.

4. 3 !!,erk~i.J.. z~

Maak voor elk antiserum duplo standaardreeksen van DES, Dienestrol,

Hexestrol, Estradiol, Estriol, Oestron, Trenbolon en Zeranol in

con-centraties van 20-50-100-250-500-1000 pg/0,1 ml ethanol p.a. Neem bij

iedere standaardreeks een nulpunt "Bo" en een blanco "ASB" mee.

Pipetteer van deze standaardoplossingen 0,1 ml in een glazen RIA

buis-je en voeg 0,05 ml 3H-DES (in ethanol p.a.,

+

20.000 dpm) en 0,025 ml

glycolmengsel toe. Voor de Bo en ASB worden in eenzelfde buisjes even

-eens 0,05 ml 3H-DES en 0,025 ml glycolmengsel gepipetteerd en i.p.v.

0,1 rul standaardoplossing, 0,1 ml ethanol p.a. Pipetteer eveneens in 5

plastic telpotjes 0,05 ml 3H-DES voor de totaaltellingen.

Damp de buisjes droog en voeg aan alle buisjes 0,05 ml methanol toe.

JJ.Il

Vortex 10 min. Voeg toe aan Bo en~tandaardpunten 0,375 ml RIA-buffer

en aan de ASB 0,425 ml. Vortex alle buisjes 5 min.

Voeg aan de Bo en standaardpunten 0,05 ml antiserum toe, vertex en

in-cubeer 30 min bij 37°C en 30 min bij 4°C.

Breng 0,1 ml van elk incubatiemengsel over in een plastic telflesje

(opbrengsttelling).

Pipetteer bij 4°C in alle buisjes 0,2 ml aktieve koolsuspensie en vor

-tex. Incubeer 5 min bij 4°C. Centrifugeer 10 min bij 3000 rpm in een

gekoelde centrifuge (4°C).

Pipetteer van elk supernatant 0,45 ml in een plastic telflesje (bound

-telling). Pipetteer in alle telflesjes 10 ml scintillatievloeistof en

(11)

I

4.4 Resultaten

Tabel 4.4.1. DES standaardlijn met DES antiserum RIV no. H143280

Toegevoegde Totaal- Opbrengst Telling ge- Gebonden B/Bo Opbrengst

hoeveelheid telling bonden fraktie fraktie toegevoegde

DES hoeveelheid pg/lUU ~1 _dpm % dpm % % pg/100 ~1 Bo 3701 - 38S1 86 - 89 6799 - 6868 61,0 - S9,2 100

-20 4029 - 3904 93 - 91 S988 - S742 49,3 - 48,8 79,6

-

78,7 19 - 18

so

3899 - 3968 90 - 92 5269 - 4836 44,9 - 40,5 71,1

-

62,8 4S - 46 100 3930 - 4076 91 - 94 3614 - 3486 30,5 - 28,4 44,0

-

40,0 91 - 94 2SO 331S - 4298 77 - 99 22S8 - 2792 22,6 - 21,6 29,0

-

27,0 192 - 249 500 3882 - 3988 90 - 92 1658 - 1939 14,2 - 16,1 13,0

-

16,7 450 - 460 1000 4072 - 3995 9'• - 93 1509 - 1461 12,3 - 12, 1 9,5

-

9,2 940 - 930 ASB 3863 - 3968 90 - 92 730 - 988 6,2 - 8,3

-

-Tabel 4.4.2. De standaardlijn met DES antiserum RIV no. H143280

DES hoeveelheid pg/lOO ~1 dpm % dpm %

-r.

pg/100 ~1 Bo 3792 - 38SO 88 - 89 6733 - 6806 S8,9 - S8,7

-

-20 3S24 - 3738 82 - 87 6725 - 6827 63,4 - 60,6 >100 >100 16 - 17

so

3848 - 3931 89 - 91 6932 - 6898 S9,8 - S8,3 >100 99,0 44 - 46 100 3862 - 388S 90 - 90 6S2S - 6S30 56,1 - S5,8 94,6 - 94,0 90 - 90 2SO 3877 - 3822 90 - 89 6202 - 6328 53,1

-

ss

,0 88,7 - 92,4 22S - 222

soo

3870 - 3904 90 - 91 S831 - 5942

so

,

o

-

so

,

s

82,5 - 83,5 4SO - 4S5 1000 3801 - 3864 88 - 90 5696 - S5S5 49,8 - 47,7 82,1- 78,0 880 - 900 ASB 3937 - 3881 91 - 90 982 - 1006 8,3 - 8,6

-

-... abel 4.4.3. HEX standaardlijn met DES antiserum RIV no. H143280

DES hoeveelheid pg/lUU ~1 _dpm % dpm % % pg/100 ~1 Bo 3905 - 3684 91 - 85 6624 - 6665 56,3 - 60,1

-

-20 3508 - 3647 81 - 85 6305 - 6415 60,0 - _{58, '•} 89,3 - 87,1 16 - 17 50 3750 - 3845 87 - 89 6203 - 6080 54,9 - 52,5 81,1 - 77

,o

43 - 45 100 3717 - 3632 86 - 84 5813 - 5798 51,9 - 53,0 76,0 - 77,8 86 - 84 250 3718 - 3832 86 - 89 5151 - 5098 46,0 - 44,2 6S,8 - 62,7 215 - 222 500 3708 - 3880 86 - 90 4426 - 4622 39,6 - 39,5 52,7 - 54,7 430 - 450 1000 3792 - 3810 88 - 88 4168 - 4379 36,5 - 38,2 49,S - 52,3 880 - 880 ASB 3899 - 3944 90 - 91 861 - 957 7,3- 8,1

-

-De stoffen estron, estradiol, estriol, trenbolon en zeranol vertonen geen enkele

bindingsnelging met bovengenoemd antiserum.

(12)

-- 8

-Tabel 4.4.4. DES standaardlijn met DES antiserum RIV no. H143281

DES hoeveelheid

pg/100 ).11 dpm % dpm % % pg/100 )Jl Bo 3628 - 3690 84 - 86 6589 - 6348 60,5 - 57,3

-

-20 3742 - 3961 87 - 92 5590 - 5967 49,8 - 50,2 82,5 - 83,3 17 - 18 50 3928 - 3824 91 - 87 5137 - 5044 43,6 - 44,0 70,7 - 71,4 46 - 44 100 3935 - 4063 91 - 94 3942 - 4023 33,4 - 33,0 51,2 - 50,5 91 - 94 250 3893 - 3896 90 - 90 2438 - 2451 20,9 - 21,0 27,3 - 27,5 225 - 225 500 3960 - 3997 92 - 93 1954 - 2031 16,4 - 16,9 18,8 - 19,8 460 - 465 1000 3908 - 3946 91 - 91 1649 - 1582 lll, 1 - 13,4 14,3 - 13,0 910 - 910 ASB 3801 - 3907 88 - 91 763 - 758 6,7 - 6,5

-

roegevoegde Totaal- Opbrengst Telling ge- Gebonden B/Bo Opbrengst

DES hoeveelheid pg/100 }.11" dpm % dpm % % pg/100 }.11 Bo 3690 - 3858 86 - 89 6184 - 6509 55,7 - 56,0

-

-20 3876 - 3818 90 - 89 6685 - 6260 57,2 - 54,4 >100 - 96,5 18 - 18 50 3798 - 3753 88 - 87 6371 - 6176 55,7 - 54,6 99,1 - 96,9 44 - 44 100 3871 - 3839 88 - 89 6214 - 6365 53,3 - 55,0 94,1 - 97,7 88 - 89 250 3824 - 3772 89 - 87 5937 - 6176 51,5 - 54,4 90,5 - 96,3 222 - 218 500 3831 - 3975 89 -92 5910 - 5494 51,2 - 45,9 89,8 - 78,7 445 - 460 1000 3948 - 3828 92 - 89 5352 - 5579 45,0 - 48,4 76,9 - 83,9 920 - 890 ASB 3786 - 3788 88 - 88 968 - 831 8,5 - 7,3

-

-Tabel 4.4.6. HEX standaardlijn met DES antiserum RIV no. H143281

~'oegevoegde _Totaal- _{Opbrengst Telling}_ge- _Gebonden _B/Bo _Opbrengst

ooeveelheid telling bonden fraktie fraktie toegevoegde

DES hoeveelheid pg/lUU }.11 dpm % dpm % % pg/100 }.11 Bo 3747 - 3789 87 - 88 6447 - 6430 57, 3' - 56,5

-

-20 3860 - 3823 89 - 89 6206 - 6340 53,4 - 55,1 93,1 - 96,5 18 - 18 50 3844 - 3864 89 - 90 5831 - 6006 50,4 - 51,6 86,8 - 89,4 45 - 45 100 3627 - 3716 84 - 86 5587 - 5961 51,1 - 53,2 88,4 - 92,8 84 - 86 250 3661 - 3729 85 - 86 5009 - 513LI 45,4 - 45,7 76,6 - 77,2 212 - 216 500 3799 - 3753 88 - 87 4256 - 4304 37,2 - 38,1 59,6 - 61,4 440 - 435 1000 3653 - 3899 85 - 90 3632 - 3511 33,0 - 29,9 50,9 - 44,5 850 - 900 ASB 3612 - 3766 84 - 87 914 - 940 8,4 - 8,3

-

-De stoffen estron, estradiol, estriol, trenbolon en zeranol vertonen geen enkele bindingsnelging met bovengenoemd antiserum.

(13)

Tabel 4.4.7. DES standaardlijn met DES antiserum RIV no. H143282

DES hoeveelheid pg/100 Jll dpm % dpm % % pg/100 ~1 Bo 3916 - 3916 91 - 91 7762 - 7366 66,1 - 62,7

-

-20 3882 - 3985 90 - 92 6639 - 6413 57,0- 53,6 86,3 - 80,1 18 - 18 50 3956 - 3822 92 - 89 5367 - 5287 45,2 - 46,1 64,4 - 66,1 46 - 45 100 3828 - 3921 89 - 91 3886 - 3839 33,8 - 32,6 43,3 - 41,1 89 - 91 250 3848 - 3741 89 - 87 2623 - 2561 22,7 - 22,8 22,7 - 22,8 222 - 218 500 3986 - 3986 92 -92 1862 - 2036 15,6 - 17,0 9,4 - 12,1 460 - 460 1000 4121 - 3894 96 - 90 1593 - 1556 12,9 - 13,3 4,4 - 5,2 960 - 900 ASB 4204 - 3815 97 - 88 1250 - 1272 9,9 - 11,1

-

DES hoeveelheid pg/100 ~1 dpm % dpm % % pg/100 ~1 Bo 3840 - 3928 89 - 91 7136 - 7148 61,9 - 60,6

-

-20 3822 - 3791 89 - 88 7183 - 7304 62,4 - 64,0 >100 - >100 18 - 18 50 3833 - 3464 89 - 80 7021 - 6864 60,8 - 65,8 99,2 - >100 44 - 41 100 3599 - 3556 83 - 82 6505 - 6389 60,0 - 59,6 97,6- 96,8 83 - 82 250 3600 - 3680 83 - 85 6340 - 6696 58,5 - 60,4 94,6 - 98,4 208 - 213 500 3676 - 3972 85 - 89 6192 - 6407 55,9 - 53,4 89,4 - 84,4 426 - 445 1000 3835 - 3755 89 - 87 6661 - 6736 57,7 - 60,0 93,0 - 97,6 890 - 870 ASB 4065 - 3882 94 - 90 1330 - 1327 10,9 - 11,4

-

-Tabel 4.4.9. HEX standaardlijn met DES antiserum RIV no. H143282

T

L

6evoegde Totaal- Opbrengst Telling ge- Gebonden B/Bo Opbrengst

DES hoeveelheid pg/100 ~1 dpm % dpm % % pg/100 ~1 Bo 3778 88 7264 64

-

-20 3469

-

3617 80

-

84 7063 - 7380 67,6- 67,7 >100 - >100 16 - 17 50 3486

-

3930 81

-

91 6687 - 7396 63,7 - 62,5 99,8 - 97,6 40 - 46 100 3631

-

3755 84

-

87 6401 - 6803 58,5 - 60,1 90,3 - 93,3 84 - 87 250 3791

-

3795 88

-

88 6355

-

6399 55,7 - 56,0 85,0 - 85,6 220 - 220 500 3854

-

3759 89

-

87 6044

-

6197 52,1 - 54,7 78,4 - 83,3 445 - 435 1000 3779

-

3726 88

-

86 5676

-

5655 49,9 - 41,5 74,4 - 75,3 880 - 860 ASB 3870

-

3864 90

-

90 1082 - 1089 9,3 - 9,4

-

-I

I

De stoffen estron, estradiol, estriol , trenbolon en zeranol vertonen geen enkele

bindingsnelging met bovengenoemd antiserum

8373.9 - 10

(14)

5. Berekening

% opbrengst

10

-5 x tellingopbrengst x 100% totaaltelling

( totaaltelling 21580 dpm) (kolom 3 tabellen 4.4.1 t/m 4.4.9).

% b

toegevoegde hoeveelheid x • op rengst

100 _(kolom₇ _{tabellen 4.4.1 t/m 4.4.9)}

% B

=

telling gebonden fraktie x 600 x 500

450 400

- - - x 100%

% B/BO

telling opbrengst fraktie x 500

100

% Bs - % Basb

=

x 100%

% Bbo - %Basb _{(kolom 6 tabellen 4.4.1 t/m 4.4.9)}

hierin zijn:

600/450, 500/400 en 500/100

=

korrektietaktoren voor volume-afname

% B percentage "gebonden" fraktie

% Bs

₌

percentage "gebonden" fraktie standaardpunt

% Basb

₌

.percentage "gebonden" fraktie blanco % Bbo

₌

percentage "gebonden" fraktie nulpunt

% B/Bo percentage "gebonden" fraktie t.o.v. het nulpunt.

5.4 Uitzetten standaardcurven

Zet op logitlogpapier tegen elkaar uit, de concentratie van de

terug-gevonden hoeveelheid DES in pg/100 ~1 (x-as) en het % B/Bo (y-as).

(15)

5. 5 !e.E_ekening_% _ kru.!_s.E_eakti~

Het percentage kruisreaktie van een stof wordt berekend door de

con-centratie DES die 50% B/Bo geeft te vergelijken met de concentratie

van die stof die eveneens een % B/Bo geeft van 50.

concentratie DES bij 50% B/Bo x 100%

concentratie X bij 50% B/Bo

X stelt één van de gemeten verbindingen voor.

Tabel 5.5.1. Percentage kruisreaktie

Verbinding Concentratie bij Kru:f.sreaktie met AS

50% B/Bo met AS H143280 H143281 H143282 H143280 H143281 H143282 pg/100 }.11 % % % Diethylstilbestrol (DES) 84 100 78 100 100 100 Diënestrol (DE) 7200 8600

«

1,2 1,2 <0, 1 Hexestrol (HEX) 700 800 5400 12 12,5 1,4 Estradial (Ez)

»

<0, 1 <0, 1 <0, 1 Estrial (E3 )

»

<0, 1 <0, 1 <O, 1 Oestron (Ö)

»

<0, 1 <0, 1 <0, 1 Trenbolon (TBOH)

»

<0, 1 <0, 1 <0, 1 Zeranol (Z)

»

<0, 1 <0, 1 <0, 1 8373.11 - 12

(16)

-- 12

-In tabel 5.5.2 ~.;rorden enige anti-DES sera met elkaar vergeleken. Zo is

van elk antiserum de specificiteit ten opzichte van enkele sterolden

~.;reergegeven.

De antisera 0646/0647, H 143280, H143281 en H143282 zijn afkomstig van

het RIV en aldaar ook opgewekt.

Antiserum Ru 25L• is afkomstig van de firma Roussel Uclaf. Het % kruis-reaktie van dit antiserum zoals vermeld, is volgens een opgave van de

leverancier.

Nadere gegevens over het RIV 0646/0647 antiserum staan vermeld in RIKILT verslag 82.78 (bepalen van de titer, werkverdunning en de

spe-cificiteit van het DES antiserum RIV 0646/0647).

Uit de tabel blijkt dat het nieu~.;re RIV antiserum no. H143282 zéér spe -cifiek is voor Diethylstilbestrol.

(17)

~

Verbinding Concentratie bij 50% B/Bo

RIV 0646/0647** Di ethylstil bestrol Dienestrol Rexestrol Estradiol Estriol Oestron Trenbolon Zeranol

* opgave van leverancier

** RIKILT verslag 82.78 8373.13 31 800 230

>>

Antiserum RIV RIV H143280 H143281 84 100 7200 8600 700 800

>>

RIV H143282 78

>>

5400

>>

Kruisreaktie Antiserum

RIV RIV RIV

0646/0647** H143280 H143281 100 100 100 3,9 1,2 1,2 13,5 12 12,5 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 RIV H143282 100 <0,1 1,4 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 RU* 254 100 4 9 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 <0,1 I I ~ VJ

(18)

- 14

-6. Conclusies

- Het RIV DES antiserum H143280 kruisreageert voor 1,2% met dienestrol

en voor 12% met hexestrol.

- Het RIV DES antiserum H143281 kruisreageert voor 1,2% met dienestrol

en voor 12,5% met hexestrol.

- Het RIV DES antiserum H143282 kruisreageert voor <0,1% met diene

-strol en voor 1,4% met hexestrol.

De overige bepaalde stoffen geven geen kruisreaktie met de drie

antisera.

- Uit tabel 5.5.2 blijkt dat het RIV antiserum H143282 zeer specifiek

is voor diethylstilbestrol.

Figuur 4: Kruisreaktie met RIV As H143280

Figuur 5: Kruisreaktie met RIV As H143281

(19)

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