Massaspectrometrische analyse van enkele beta-agonisten

Rapport 90.08 Februari 1990

Massaspectrametrische analyse van enkele ~-agonisten

H.A. Traag, ing. P.G.M. Kienhuis, ir L.G.M.Th. Tuinstra

Mede,.,erker: E. 0. van Bennekom

Goedgekeurd door: dr F.A. Huf

Rijks-K,.,aliteitsinstituut voor land- en tuinbou,.,produkten (RIKILT) Bornsesteeg 45, 6708 PO Wageningen

Postbus 230, 6700 AE Wageningen Telefoon 08370-19110

Telex 75180 RIKIL Telefax 08370-17717

VERZENDLIJST

INTERN: directeur sectorhoofden

produktco3rdinator dierlijke prodokten afdeling Organische Contaminanten afdeling Riofarmaceutische Analyse afdeling Diergeneesmiddelen

programmabeheer en informatieverzorging circulatie

bibliotheek

EXTERN:

Dienst Landbouwkundig Onderzoek Directie 'ofetenschap en Technologie

Directie Voedings- en K\olaliteitsaangelegenheden, mr P. Ritsema, dhr H.J. Hol

Directie Veehouderij en Zuivel, ir R. Houd st ra, ir T. van Ingen Directie Rijksdienst voor de keuring van Vee en Vlees

Centraal Laboratorium van de Rijksdienst voor de keuring van Vee en Vlees (2x)

Rijksinstituut voor Volksgezondheid en MilieuhygH!ne, dr R.,v. Stephany Agralin

ABSTRACT

Massaspectrametrische analyse van enkele B-agonisten.

Massspectrometric analysis of some B-agonists (in Dutch).

Report 90.08 February 1990

\~.A. Traag, P.G.M. Kienhuis, L.G.M.Th. Tuinstra

State Institute for Quality Control of Agricultural Products (RIKILT) P.O. Box 230, 6700 AE Hageningen, the Netherlands

30 figures, 2 annexes, 4 references

Six B-agonists have been tested as THS-derivates tolith gaschromatogra -phy/massspectrometry in both the Electron Impact (EI) and Chemical Tonization (CI)-mode.

After selection of diagnostic ions for each ionization mode the coef-ficient of variatien (n=7) at a level of 1 ng/~1 and the linearity at a range of 0,1-10 ng/~1 have been measured. The coefficient of varla-tion of each compound meets the confirmatien demands (retenvarla-tion time and mass ratio versus the base peak) for each mode. In the EI-mode the linearity decreased significantly beneath the 2 ng/~1. In de Cl mode the linearity \-las acceptable over the tolhole range.

Based on repeatability and intensity four ions have been selected for confirmatien purposes for each compound. Combination of EI and Cl pro-veded to be necessary for confirmatien of B-agonists in urine and feedstuffs at the ~g/kg range to fullfil EC demands.

INHOUD ABSTRACT SMorENVATTING 1 INLEIDING 2 DEFINITIES EN STRUCTUURFORHULES 3 ONDERZOEK EN DISCUSSIE 3.1 Spectrale informatie 3.2 Herhaalbaarheid en lineairHeit 3.3 Herhaalbaarheid en lineairiteit 3.4 Fragmentatie 3.5 Selectie fragmentionen 4 CONCLUSIE LITERATUUR BIJLAGEN A FIGUREN EN TABELLEN

B HETHODE "BAGO" VOOR DE HP-NSD

EI-meting Cl-meting blz 1 5 7 8 10 10 10 12 14 15 16

17

SAMENVATTING

Zes ~-agonisten (isoproterenol, clenbuterol, cimaterol, terbutaline, salbutamol en fenoterol) zijn als TMS-derivaten onderzocht op hun GeMS-eigenschappen in zowel de Electron Impact (EI) als positieve Chemische Ionisatie mode (Cl).

Tevens is clenbuterol-hexyl onderzocht. Deze component is geschikt om als interne standaard te fungeren.

Bij cimsterol ontstaat tijdens de derivatisering een mono- en een di-TMS derivaat in wisselende verhoudingen. Beide derivaten zijn mee-genomen in het onderzoek.

De herhaalbaarheid van beide ionisatiemethoden blijkt zodanig te zijn, dat voldaan kan \~orden aan de confirmatie eisen, die aan de verschil-lende modes gesteld zijn door de EEG.

De lineairiteit is onderzocht op een niveau van 0,1-10 ng/ul. In de EI-mode is de lineairiteit goed tot een niveau van 2 ng/ul. Daaronder neemt de lineairiteit sterk af. In de Cl-mode is de lineairiteit minder maar nog steeds acceptabel over het gehele meetbereik.

Per component zijn een aantal fragmentionen die gebruikt moeten worden voor confirmatie geselecteerd op basis van herhaalbaarheid en intensi-teit. Over deze keuze is overleg gevoerd met het Rijksinstituut voor Volksgezondheid en Milieuhygiäne (RIWI).

Voor de HP~lSD (EI-mode) zijn de geselecteerde ionen verwerkt in een methode genaamd "BAGO", '~aarmee monsters automatisch geanalyseerd lwr-den op de aam.,ezigheid van voornoemde componenten. Omdat alleen voor fenoterol voldoende fragmentionen aanwezig zijn, nl. vier, voor een definitieve bevestiging in de EI-mode, moet bij de aam~ezigheid van een van de andere componenten aansluitend een Cl-meting ,.,orden uitge-voerd.

Voor het éénduidig bevestigen van de aamo~ezigheid van een component moeten vier diagnostische ionen geselecteerd lolOrden om te kunnen vol-doen aan de EEG-criteria. De detectiegrens van een component wordt in sterke mate bepaald door het minst intensieve fragmention. Bij de meeste a-agonisten is de intensiteit van dit fragmention een factor 10 tot 20 lager dan die van het meest intensieve fragmention. Dit geldt zowel voor EI als voor Cl.

Toepassing van een combinatie van EI en Cl heeft als resultaat, dat

gekozen kan worden uit een groter aantal fragmentionen. Hierdoor

kun-nen laag intensieve fragmentiokun-nen vermeden worden, hetgeen leidt tot

een verbetering van de detectiegrens met een factor 5 tot 10 voor de

meeste componenten.

Op deze manier komen bevestigingsniveau's van enkele pg/kg in zowel

1 INLEIDING

Voor de gaschromatografische-massaspectrometrische analyse van clenbu -terol in urine en vlees van runderen is een methode ontwikkeld welke is vastgelegd in een intern voorschrift A 546.

Met deze methode zijn in het afgelopen jaar een groot aantal monsters onderzocht.

Naast clenbuterol zouden een aantal andere componenten, met analoge werking, illegaal toegepast kunnen worden bij de veeteelt.

Daar deze componenten nog niet eerder door het RIKILT onderzocht zijn en derhalve niet opgenomen zijn in het desbetreffende voorschrift, is aanvullend GC-HS onderzoek verricht teneinde van deze componenten mas -saspectrametrische criteria op te stellen.

Het onderzoek is verricht met behulp van massaspectrometrie met zowel Electron Impact (EI) als met Chemische Ionisatie (Cl).

Het doel is om per component fragmentionen (uit resp. de EI of Cl-mode of een combinatie ervan) te selecteren om op die manier te kunnen vol-doen aan de confirmatie-eisen van de EEG.

Het niet toepassen van deze eisen verhoogt de kans op vals positieve monsters in sterke mate.

Alvorens de componenten onderzocht werden zijn Trimethylsilyl (TMS) derivaten bereid.

Het onderzoek is uitgevoerd met de volgende componenten: isoprotere-nol, clenbuterol, cimaterol, terbutaline, salbutamol, cimaterol, clen-buterol-hexyl verbinding en fenoterol.

2 DEFINITIES EN STRUCTUURFORMULES

Naam lsoprot erenol

Brutoforrwle C11 H17 03 N

Molecuulgewicht 211

Molecuulgewicht TMS - derivaat 427

Naam Clenbuterol Brutoforrwle C12 H8 Cl2 N2 0 Molecuulgewicht 276 Molecuulgewicht THS - derivaat 348 Naam ei materol Brutoforrwle C12 H17 N3 0 Molecuulgewicht 219 Molecuulgewicht TMS - derivaat 291 (1 - TMS) 363 (2 - THS) Naam Terbutaline Brutoforrwle C12 H19 03 N Molecuulgewicht 225 Molecuulgewicht THS - derivaat 441 HOO \ CH-CH-NH-1:H 3 I 2 \ - - . OH CH I 3 HO

O

CI CH NH cH-CH-NH-L 3 cH 3 2 I 2

I

OH CH 3 I Cl

0

/H3

NH CH-CH-NH-CH 2 1 2 \ OH CH 3 I CN

O

HO CH-CH-NH-CLH 3 cH I 2

I

3 OH CH 3 HO

I Naam Brutoforrrule Molecuulgewicht Molecuulgewicht TMS • derivaat Salbutamol C13 H21 N 03 239 455

0

CH HO

CH

-CH

-

NH-~CH

I 2

I

3 OH CH 3 c.!H OH 2 Naam Brutoforrrule Molecuulgewicht Molecuulgewicht TMS · derivaat C14 H20 N2 Cl2 0 Clenbuterol Hexylverbinding 302 374

NH

₂

o~

\

CH

1

-

cH-NHO

2 OH I Cl

Naam Fenoterol

Brutoforrrule C17 H21 N 04

Molecuulgewicht 303 Molecuulgewicht TMS · derivaat 591

3 ONDERZOEK EN DISCUSSIE

3.1 Spectrale informatie

Van de te onderzoeken verbindingen zijn standaardoplossingen gemaakt

in methanol met een concentratie van 10 ng/ul.

Van deze standaardoplossing is een aliquot drooggedampt en

gederivati-seerd volgens intern voorschift A 546 \vaarbij TMS derivaten zijn be -reid.

Van het bereide derivaat is 5 ~1 geinjecteerd op de gaschromatograaf

van de HP~1SD voor het verkrijgen van EI spectra. De gaschromatografi-sche condities zijn aangehouden conform intern voorschrift A 546. Het scanbereik van de MS is ingesteld van m/z 40 tot m/z 600.

De aldus verkregen EI spectra zijn gegeven in bijlage A figuur 1 t/m figuur 8. Cimaterol komt daarbij t\veemaal voor, omdat bij de derfvati

-sering ZO\vel een 1-THS als 2-TMS derivaat ontstaat.

Aansluitend zijn de componenten met de Finnigan 4500 massaspectrometer geanalyseerd met Chemisch Ionisatie (Cl) met ammonia als reactiegas

0

met een druk van 0,6 torr en een brontemperatuur van 100 C, waarbij

een scanbereik van m/z 100 tot m/z 615 is ingesteld. De Cl-spectra zijn gegeven in bijlage A figuur 9 t/m 16.

Per component zijn een aantal ionen geselecteerd voor de EI-meting.

Zie tabel 1 (bijlage A). De componenten zijn gerangschikt op basis van de retentietijd op een apolaire kolom (CP-sil 5 CB).

Voor metingen met chemische ionisatie zijn eveneens per component een aantal ionen geselecteerd. Zie tabel 2 (bijlage A).

3.2 Herhaalbaarheid en lineairiteit EI-meting

Nadat uit bovengenoemd onderzoek voor de componenten specifieke ionen

werden verkregen is de herhaalbaarheid van deze ionen bepaald. Een standaardoplossing bestaande uit de voornoemde componenten, ieder met een concentratie van 1 ng/ul werd gederivatiseerd en na droogdampen

werd het residue opgenomen in isooctaan/decaan (4:1 (v/v)). Het oplosmiddel bevat 2 ng/ul PCB 138 als interne standaard.

Het standaardmengsel werd zeven maal geanalyseerd op de HP~ISD onder de volgende analyse omstandigheden:

-Kolom: CP silS CB: 1

=

25 m; ID

=

0,22 mm;

filmdikte 0,12 urn (Chrompack, Middelburg)

- Temperatuurprogramma:

80oC (2 min • ). 80oC (SoC/min).,180oC (30oC/min)• 300oC.

- Automatische injectie met een injectievolume van 5 ul. De resultaten zijn vermeld in de tabellen 3, 4 en 5.

Voor een reconstructed ion chromatogram (RIC) zie bijlage A figuur 17. Vervolgens werd op een identieke manier een mengstandaard

gederivati-seerd en verdund met de isooctaan/decaan (4 1)

+

2 ng/ul PCB 138

op-lossing tot een ijkreeks van 0,1- 10 ng/ul.

De ijkreeks is vanuit één gederivatiseerd standaardmengsel aangemaakt om op deze manier de lineairiteit van de derivatisering te scheiden

van de lineairiteit van de GCMS-analyse.

De ijkreeks is geanalyseerd op de HP~ISD onder voornoemde

analyseom-standigheden. De resultaten zijn weergegeven in bijlage A figuur 18 en 19.

De meetwaarden in de figuren zijn gecorrigeerd voor variaties in het injectievolume door de respons van de basepeak van elke component te

delen door de respons van de interne standaard (PCB 138, m/z 360).

Uit de uitgevoerde experimenten blijkt, dat de herhaalbaarheid van de retentietijd (bijlage A tabel 3) uitstekend is.

De herhaalbaarheid van de respons (bijlage A tabel 4) vertoont een

duidelijk grotere variatie. De herhaalbaarheid van PCB 138 en daarmee

het injectievolume is goed. De meeste componenten vertonen een grotere variatiecoëfficient met cimaterol-2 TMS en fenoterol als uitschieters. Opvallend is dat de beide laatstgenoemde componenten een oplopende respons vertonen gedurende de analysereeks.

Desondanks is de herhaalbaarheid voor alle componenten voldoende om op dit niveau een kwalitatief goede meting te waarborgen. Kwantitatief zal de analyse minder betrouwbaar zijn.

De herhaalbaarheid van de fragmentatie (bijlage A, tabel 5) blijkt op

enkele laag intensieve massa's na goed te zijn. Bij bevestiging van

criterium, dat bij EI-metingen de relatieve intensiteiten van vier

ionen, uitgedrukt als een percentage van de intensiteit van het ion

met de hoogste intensiteit (basepeak), gelijk moeten zijn aan de

waarden verkregen bij de overeenkomstige standaard binnen een marge

van+ 10% (EEG; De Ruig).

Uit ervaring is gebleken, dat bij de analyse van monsters op een laag

niveau fragmentionen met een verhouding van minder .dan 10% ten

opzichte van de basepeak vaak niet aan deze eis voldoen door de invloed van de matrix.

Op grond daarvan is het niet zinvol om deze laag intensieve

fragment-ionen in een routineprocedure op te nemen en deze fragment-ionen zijn dan ook uit de methode verwijderd. De resterende ionen zijn in bijlage A tabel 6 vermeld.

De lineairiteit van de EI meeting (bijlage A, figuur 18 en 19) blijkt bij alle componenten met een concentratie lager dan 2 ng/ul matig tot slecht te zijn.

3.3 Herhaalbaarheid en lineairiteit Cl-meting

Evenals bij de EI-meting is ook voor de Cl-meting een

herhaalbaar-heids- en lineairiteitstest uitgevoerd met de geselecteerde ion (tabel

2).

Analyseomstandigheden:

Kolom: CP sil 8 CB; 1 = 25 m; ID 0,22 mm; filmdikte

=

0,12 ~m

- Temperatuurprogramma;

90oC (3 min.) 90oC (30°G/min.) 170oc (12°C/min.)> 270oc

- Injectievolume 4 ~1 (handinjectie).

-MlD-analyse met een descriptor van 22 massa's met een scantijd van

0, 7 sec.

-Cl omstandigheden:

0

bron 100 C; NH

3-gas 0,6 torr; positieve ionen.

Het resultaat van de herhaalbaarheidstest is vermeld in de tabellen 7,

8 en 9 (bijlage A).

Aan de bevestiging van een component met behulp van Cl is een ruimere

eis gesteld dan bij de EI-meting. Het retentiecriterium blijft

on-gewijzigd

(!

5 sec. ten opzichte van de retentietijd van de

stan-daard), maar het massaspectrometrisch criterium is aangepast van 10

naar 20% (EEG; De Ruig).

De herhaalbaarheid van de retentietijd (bijlage A, tabel 7) blijkt ook

nu goed te zijn.

De herhaalbaarheid van de verhoudingen van de fragmentionen ten

op-zichte van de basepeak is echter beduidend slechter dan bij de

EI-me-ting (tabel 8). Door de ruimere eis voor de Cl meting is het echter

ook met deze variatieco~fficient goed mogelijk de identiteit van de

componenten te bevestigen.

De variatiecoëfficient van de intensiteit van de basepeak's van de

di-verse componenten (tabel 9) is globaal gezien een faktor 2 groter dan bij de EI-meting. Opvallend is, dat de interne standaard (PCB 138) nu

een beduidend grotere variatieco~fficient vertoond dan bij de

EI-me-ting. Buiten het feit, dat de test is uitgevoerd met behulp van hand

-injectie zou een mogelijke oorzaak kunnen liggen in de relatief lange

scantijd van 0,7 sec. Dit resulteert in een aantal scans van zes i

zeven per GC-piek in het chromatogram (voor een betrouwbare analyse

zijn tien scans per piek noodzakelijk).

Om een en ander te controleren is het experiment herhaald met een

la-ger aantal geselecteerde massa's, resulterend in een scantijd van 0,35

sec.

Het resultaat hiervan is niet vermeld, omdat ze qua variatie identiek bleek te zijn aan de eerste test. Blijkbaar leidt de combinatie van

handinjectie en Cl-meting tot een grotere variatie in de respons.

Opvallend in de tabellen is de afwezigheid van een respons voor

cima-terol-2 TMS. Deze component bleek bij de uitgevoerde experimenten in

\o~isselende verhoudingen ten opzichte van cimaterol-1

n1s

aamo~ezig te

zijn. De reactie van de t\o~eede TI1S groep vindt plaats met het primaire

amine van cimaterol. Deze verbinding komt over het algemeen moeilijker

tot stand en is ook minder stabiel, dan een overeenkomstige binding

De resultaten van de lineairiteitstest zijn vermeld in de figuren 21 en 22. De meetwaarden in de figuren zijn ook nu gecorrigeerd voor va-riaties in het injectievolume door de respons van de basepeak van elke component te delen door de respons van de interne standaard (PCB 138, m/z 326).

De respons van de Cl-meting blijkt voor alle componenten tot op een niveau van 0,1 ng/ul lineair te blijven. De variatie van de respons over de verschillende niveau's is vrij sterk, maar dat is inherent aan de grote spreiding van de intensiteit bij de herhaalbaarheidstest

(bijlage A, tabel 9).

Bij de EI-meting zijn een aantal fragmenten geselecteerd op basis van de eis, dat een fragmention qua intensiteit niet kleiner mag zijn dan 10% van de basepeak. De Cl-ionen die aan deze eis voldoen zijn in tabel 10 (bijlage A) weergegeven.

3.4 Fragmentatie

In bijlage A, figuur 24 is het fragmentatiepatroon van clenbuterol-THS ( zo\o~el EI als Cl) gegeven.

Uit het EI-spectrum blijkt, dat clenbuterol voornamelijk fragmenteert tot de stabiele ionen m/z 86 en m/z 262.

Deze fragmenten ontstaan door het verbreken van de binding tussen het cl en c2 atoom van clenbuterol.

In alle onderzochte componenten vindt een fragmentatie op dezelfde binding plaats, echter niet in dezelfde verhouding als bij clenbute-rol.

Uit het Cl-spectrum blijkt, dat in de bron door de reactie van NH 4

+

+

met clenbuterol-THS ion m/z 349 ({H+H} ) ontstaat.

Bij alle onderzochte componenten is dit fragment ( {H+H} +), meestal als basepeak, aanwezig.

De fragmentatiepatronen voor de ionen uit tabel 6 en 10 zijn gegeven in figuur 23 tot figuur 30 (bijlage A).

3.5 Selectie fragmentionen

Bij de herhaalbaarheidstesten (3.2 en 3.3) zijn voor zowel de EI als Cl-mode een aantal fragmentionen geselecteerd.

Uit het resultaat (tabel 6 voor El en tabel 11 voor Cl) blijkt, dat alleen voor fenotrol binnen één ionizatiemode het vereiste aantal

fragmentionen aam.;rezig is. Voor de andere componenten levert

combina-tie van de beide moden wel het vereiste aantal fragmentionen op.

Bij enkele (3-agonisten zijn het er zelfs meer dan vier, zodat een

ex-tra selectie kon worden toegepast. Bij deze selectie moet rekening worden gehouden met de volgende parameters:

- De intensiteit ten opzichte van de basepeak. De detectiegrens van een component wordt nl. in sterke mate bepaald door de intensiteit van het minste intensieve fragmention.

- De herhaalbaarheid van een fragmention (tabel 5 en 10).

- De aam.;rezigheid van vier ionen binnen één ionizatiemode ( fenoterol). Dit vereenvoudigt namelijk de be\.;rerkelijkheid van de methode.

Het resultaat staat in een tabel vermeld bij de conclusie (blz. 16).

De geselecteerde ionen van de EI-meting zijn verwerkt in de methode "BAGO" voor de HP-NSD.

Voor een volledig overzicht van de methode, zie bijlage B. De methode

neemt per monster een chromatagram op in de MlD-mode. Vervolgens wordt

het resultaat getest op de aanwezigheid van voornoemde B-agonisten

waarna het resultaat in een rapport wordt uitgeprint.

Indien een of meerdere componenten voldoen aan het retentie- en massa-spectrametrisch criterium moeten ze vervolgens opniem.;r geanalyseerd

worden in de Cl-mode. Hierbij wordt, afhankelijk van de componenten, een MlD-descriptor samengesteld.

Binnen dit kader kan cimaterol een probleem vormen. Door de vorming

van 2 derivaten (1 TMS en 2 TMS) in wisselende verhoudingen (zie

bij-lage A, de tabellen 4 en 9 en de figuren 3 en 6 , 11 en 14, 18 en 19) kunnen er problemen ontstaan bij vooral de quantificering.

Indien dit bij de monsters een probleem blijkt te zijn zal gezocht

moeten worden naar een andere derivatisering. Vooralsnog is dit

ach-ten.;rege gelaten om de be\.;rerkelijkheid van de methode niet te

4 CONCLUSIE

Voor alle onderzochte componenten zijn voldoende fragmentionen aamve-zig voor een eenduidige confirmatie bij een concentratie

<

1 ng/~1,

indien gebruik gemaakt wordt van zowel de EI als Cl-mode. Alleen

fenoterol kan volstaan met een confirmatie in de EI-mode, omdat daar-voor het vereiste aantal ionen aanwezig is. Voor de overige

componen-ten kan het toepassen van alleen EI-detectie leiden tot een verhoogd risico op vals positieve monsters of tot een duidelijke verhoging van de detectiegrens.

Uit de geselecteerde fragmentionen (tabel 6 en 10) is een nadere se

-lectie gemaakt op basis van intensiteit en stabiliteit met de volgende lijst als resultaat:

Component EI Cl lso proterenol 355.2 428 338 272 Clenbuterol 86.05 262.10 349 351 Cimaterol-1THS 72.10 219.10 292 202 Terbutaline 86.05 356.20 255 281 Salbutamol 369.25 86.05 456 366 Cimaterol-2THS 72.10 291.05 364 274 Clenbuterol hexyl 112.15 262.10 375 377 Fenoterol 236.20;322.20;356.30;412.30

Over de geselecteerde ionen is overleg gevoerd met het RIVH.

De herhaalbaarheid (n=7; 1 ng/~1) van beide ionisatievormen blijkt

zodanig te zijn, dat voldaan kan worden aan de confirmatieeisen, die aan de verschillende modes gesteld zijn.

De lineairiteit in de El-mode blijkt slecht te zijn onder een niveau

van 2 ng/ul. In de Cl-mode is de lineairiteit acceptabel over het

ge-hele concentratiebereik van 10-0,1 ng/ul.

Uit cimaterol ontstaat bij de derivatisering een 1-THS en 2-THS deri-vaat in een wisselende verhouding. Dit gaat ten nadele van zowel de

detectielimiet als de quantificering van de component. Indien dit in

monsters een probleem gaat vormen zal gezocht moeten worden naar een andere derivatisering.

Het onderzoek is uitgevoerd met zes B-agonisten.

Indien andere componenten (o.a. carbuterol, pitbuterol) op basis van

beschikbaarheid en/of toepasbaarheid in aanmerking komen voor nader

onderzoek zullen deze op een identiek wijze onderzocht worden.

LITERATUUR

RIKILT standaard voorschrift (RSV) nr. A 546.

EEG: Official Journal of the European Communities

NoL 223, 11-08-1987, blz 26.

W.G. de Ruig, R.W. Stephany en G. Dijkstra

Quality criteria for the determination of analytes in test samples.

Joint report; RIKILT report 87.27, RIVtol report 368301001, 20-08-1987,

blz 20.

Cl) CJ c rd

4

.0[6

3.0[6

~ 2. 0E6 73 I a: Cl.\ (.J c rd

1.

0[6

100

200

300

400

Ma.ss/ Charge

Figuur 1: EI-spectrum iso-proterenol

Sc

an

7

91 (2!

.

210 min

)

of DATA:BAGOA01R.D

l. 6[6 6 1. 4 E6 1. 2[6 l . 0[6 8.0ES 6.0[5 4. 0E5

2.0[5

348

/

100

200

300

400

500

Ma.ss/Charge

Q,) C.) c

""

"0 c :J .s:J a: Q.) (J c n;1 -a c :J ..:J a: 2. 0E6 \ I 2 I. 8E6 I. SE6 1. 4 [6

I.

2

E6

I . 0[6

8

.

0

[

5

6.0E5

4. 8[5 2.

0[:.

0

A

2

19

116

I

.~k~-~,,.J

.

.

..

T,.

100

200

300

Mass/Charge

Figuur 3: EI-spectrum cimaterol 1-TMS

356

I

400

Scan

804

(21.481

mln)

of DATR

:

BRGOR0

1R.D

2. 5 E6

86

'\.. 2 . 0[6 '"\.. 1. 5 Et. 1. 0[6

5.0ES

₁₄

₇

"'

~ -- J

...l

19

3

I ~

..

....

I\

'56

492

/

500

426

I

l

.

100 200 300

400

Mass/Charge Figuur 4: EI -spectrum terbut al ine

(L\ u c (fj -u c ::J _a a: <U u c (fj -u c ::J _a a:

5

.

0[6

4.

0[6

3.0[6

88

2.0[6

""

1.

0E5

0

JJJ

14 7

"'

_"'

- • J. lil

.l

100

207

""'

265

313

_1

.1

'

-

-

\.

Jt _l (_

~

200

300

Mass/Charge

Figuur 5: EI-spectrum salbutamol

I\

89

400

Scan 8 7 I (22.895 min) of DRTR:BRGOA01R.D

9.0E5

IÎ

29 I

8.0[5

7

.

0[5

6.0[5

5

.

0[5

4

.

0[5

3.0[5

72 I

2

.

0[5

I

. 0E5

348

I

432

~

478

I

0

100

200

300

400

500

Mas s /C

h

arge

Figuur 6: EI-spectrum cimaterol 2-TMS

44

0

I l

57

6

CU f.J

2

.

2

E

6

11

2

2

.

0E8

I. BES

I.

8E6

I. 4 EG ~ I. 2EG CU u c: ~ -o c: :J .0 a:

1

.

0E8

8.0E5

6

.

0E5

4

.

0E5

73

I

100

200

300

400

500

Mass/Charge

Figuur 7: EI-spectrum clenbuterol hexyl verbinding

Sca

n 1026

(26

.1

0

4

min) of

DATR:BRGOR01A.D

3.

0E6

_~

22

2.0E6

356 236

/

I

1

.

0E6

73 I 179

""

486

576

1.

Lu

11. .L .. 1. ..:...

\

~

0

100

200

300

400

500

Mass/Charge

IOO.e :se.e 11/Z 100.1 :58.8 188.8 M.l

C!HlS.I 98<3)98(38>178<12)278<2> 1600 Eli loot BRal

ElfwaD <S l:s& 2H en

IH3 .6 I~ IOOC BRal POS ltn:

2 2

378 3S5 392

Figuur 9: Cl-spectrum isoproterenol

1\'lSS SPECIM

87~ 9:28:00 • 7:11

SiH't.E 1 S !lH!, ClDI EH 10'1\ClDI 18ffi/l.l.

tallS.: 98<3>98<38>178<12>278<2> 1600 Eli 1eec BRal

ElfwaD <S 158 211 en

ClEIIlUTERQ oe tH3 IOOC BRal 8.6 T~ I<»>IZER

2 5

OATA: Q.E!KX 1431

Cf'LI: Pl<l007 13

349

Figuur 10: Cl-spectrum clenbuterol

347 9ASE 11/ZI 161 RIC: ~. 2112. 428/BASE -9.3321 2112. 26n. 349/1!ASI: •8.6728

100.0 :>e.o 100.0 :>0.0 11/Z 100.0 ';1).0 187

SUf'I.E1 2\Jli.UE ST CJMTR<t. Tt!S ll'tlCFI.l

COIJS.I 91H3>90<38>178U2>278<2> 1600 Elt IOOC BR{AI

EtfW«:m !S I~ 211 OT> 137 129 152 13! 11f. lö'4 I :ie

Figuur 11: Cl-spectrum cimaterol 1-THS

I 3

I~SS Sf1:CTRLIII !)HAl TEllOOT Al IIE 1434

87t29/89 14:21100 + 7:14 CfLI: PK1007 13

SUf'I.E: SI TER9UTAliiE ll'tlCFI.l

rullS.: 90<3>90<38>178(12>278<2> IE.OO Elt IOOC ~U oma:o <s 1~ 211 on 161 I~ 1 6 2 5 289 223 243 2:>0

TEF1liJTAliiE 4etk: FQS Cl 1113 IOOC Brol .6 TffiR FP

Hl

BASE IVZ: 161

RIC: 61888.

370 3'39 476 494 :;es 522 549 561 573 584 682

600

Figuur 12: Cl-spectrum terbutaline

~.

7129.

tee.8 :se.8 IVZ tee.8 :se.8 tee.8 :54!.8 IVZ 188.8 :se.8 CQ()S.s 98<3>98<38>178<12)278(2) 1688 D1 188C BRal EliwaD <S 158 2H 81l 1~ Sft.llUI ~ 410; POS C I 444 468 479 489

Figuur 13: Cl-spectrum salbutamol

*

achtergrondionen

MSS SI'ECIRI.tl OAIAo Cltt'llln 1477 87mM 13s28o88 + 7s~7 Cf4..Jo f>l(l887 13 SIWI.Eo SI CIMIERa. I!H;IU.

CQ()S.s 98<3>98<38>178<12>278<2> 1688 D1 188C BRal

EliWaD <S 158 2H 81l

I 7

2;4

318 327 337 ~

Figuur 14: Cl-spectrum cimaterol 2-TMS

8ASE IVls 364 RIC: 81792. 13664. 13664. 12648. 12648.

189.0 :58.8 16.7 ·9.3

••••

~

..

SIW\.E 1 S 1 tEX'Y\. Cl08Jli:Ra. I etiXA.

CUilS.I 99(3)99(36)178<12>279<2> 1689 Eli IOOC BRal

ElfWIC[I) < S 158 211 Oll

1 2 r 6.ex

320 329 1~ I 349 362 369 1~9 360

Figuur 15: Cl-spectrum clenbuterol hexyl verbinding

MSS Sf[ClR\.11 ~lAl fOOTIJ!(l. t749

97/28/89 16127189 • 12129 Cf11.11 Pl<1897 13

SIWlE 1 ST FOO!ER<l. !liS I etiXA. ltl3 I OOC , 6 T~ POS Cl

CUilS.1 99<3>99<36>178<12>278<2> 1680 Eli IOOC BRQI

ElfWIC[I) (5 158 2H 91)

Figuur 16: Cl-spectrum fenoterol

*

achtergrondionen BASE tvZI 224 RIC1 ~1456. 19776. 3296. 3332 • 833.

U) u c

'"

"0 c =' .a a: 9. !!lES 8.0[6 7. ~l[b TERBUTALl NE

&.D

E6l

\

5.GEG

_{CIMATER~·1TMI}

""'"""'

\

4. 0[6

3.8[6

2.0Ef> ISOPROTERENOL I. tlE6 0 18 20 Time Figuur 17: EI -chromatogram 0.9 0.8 FENOTEIIOl / SALBUTAMOl

\

CLENBUTER~ HEXYL VERBINOING •

\

PCI 133

\

CIMATER~·2TMS 11. A/ l

22

(min. )

24

26

TERBUTALl NE "5 ~ 0.7 .; .!

..

•

..

..

_i ~ u ...

..

0

..

~

..

.; 0.6 0.5 0 .• O.J CLENBUTER~ 0.2 0.1 _{CIMATE~·ITNS} 0 0 2 4 6 8 10 concentratte In natul

Figuur 18: Lineairiteit EI-meting bij een ijkreeks van 0,1-10 ng/~1

De intensiteit is gecorrigeerd voor variaties in het injectievolume door middel van de intensiteit van PCB 138.

100.9 RIC SALBUT AHOI. 0.7 0.6 -; _.... !!' c: 0.5 !

..

•

0.4

..

..

i ~ u .... 0.3 CLENBUTEROl

..

..

HEXYL VERiiNOING

..

= 0.2

..

.!: 0.1 Cl MA TE ROl· 2TMS 0 0 2 4 6 a 10 concentratie In ng/ul

Figuur 19: Lineairiteit EI-meting bij een ijkreeks van 0,1-10 ng/~1 De intensiteit is gecorrigeerd voor variaties in het injectievolume

door middel van de intensiteit van PCB 138.

"la!IC DATA1 8AC03 11 5CJ'tlS 300 TO 1200

00/31/89 14a50a00 C"'-11 PK3100 13

SA'f'I.E 1 ST AGO 1 etCIU.

CCWS.1 99<3>90<30>179<12)270(2) !909 EH IOOC llllrn POS Cl 9 ACOOISTEH maa G 1.1298 V«l.: H 0. 4,0 ~~~ A 9, 1.0 J 0 BASE; U 20. 3 591 . TERBUTALl NE

--CLENBUTEROl

----ISOPROTEREIIOl

-416 499 CIMATEROl·1TMS

~

SAL BUT AHOI.

CLENBUTEROl HEXYL VERBINDING

\893

CIMATEROl·2T~S

I

\. ~ 679 PCI 138 \ l \.i ₉₃₈ FENOTEROl

102/

l

1092 1298 SC~ 14100 Til€

20 _{CIMATEitOl·1TMI} 19 18 17 16 "5 ₁₅ ... !!' _1<4 c 13

"

., 12

•

... ₁₁ ., ~ ₁₀ ~ ₉ u ... ., 8 ·~ 7

i

6 ClENBUTEROl ., c ₅

•

3 2 0 2

•

6 8 10 conc.ntretle In ng/ul

Figuur 21:Lineairiteit Cl-meting bij een ijkreeks van 0,1-10 ng/~1

De intensiteit is gecorrigeerd voor variaties in het injectievolume

door middel van de intensiteit van PCB 138.

6 5.5 5 SAlBUTAMOI. <4.5 "5 ~

_•

.s

.! _., 3.5

•

... ., i 3 ~ u .... ., 2.5

u

2 .,

i

ClENBUTEROl ., 1.5 HEXYL VERIINOING

.s

0.5~----~----T---r----.r----.---.---r---r----,---1 0 2

•

6 8 10 concentretle In ngJul

Figuur 22: Lineairiteit Cl-meting bij een ijkreeks van 0,1-10 ng/~1

De intensiteit is gecorrigeerd voor variaties in het injectievolume

Figuur 23: Isoproterenol-TMS (M\~=427) EI TMSO

I

TMSO Cl TMSO TMSO

l

TMSO

I

272

355172

CH CH

CH-NH-~H

3

I

2 \ OTMS CH 3 H +

+

NH 4 CH

I

3 NH-CH

\

CH 3 Massa's 355 427-72 Massa's 428 (M+H )+ 338 [(M+H)-90]+ 300 zie struc-272 turen TMSO CH-CH

I

3 H

+

+NH 4 300

Figuur 24: Clenbuterol-TMS (MW=348) EI 262 86 CH eH

I

CH-NH-b -3 cH

I

t

2

I

3 OTMS CH 3 Cl Hassa's 262 348-86 86 1 348-262 Massa's 349 (H+H )+ 351 CL-isotoop CH van 349

I

3 CH-CH- NH-C- CH

I

2

I

3 OTMS CH 3 Figuur 25: Cimaterol 1 -THS (MW=2 91 ) EI Massa's 219 2 91-72

219 t72

CH

72 1 291-219 CH CH- NH-L 3

I

2 \ OTMS CH 3

I

CN Cl Massa's 292

I

(M+H)+ 202

I

(M+H-90)+

1

cH3 CH-CH- NH-CH

~

\

_CH 3

I

s

0 CN

Figuur 26: Terbutaline-TMS (MH=44l) EI Cl TMSO I TMSO TMSO I TMSO TMSO I TMSO 255 356 CH

I

0 TMS 355 H

+

+ H 85 H CH

I

3 CH-NH-C-CH 86 2

I

3 CH 3 CH

I

3 NH-C-CH

I

3 CH 3 TMSO I TMSO 281 Massa's 356 441-85 86 1 441-355 Massa's 442 (M+H)+ 281 zie struc-255 turen

+

+

H

Figuur 27: Salbutamol-TMS (~~=455) EI TMSO 369

+

86 CH CH

CH-NH-t~CH

I

2

I

3 OTMS CH 3 CI TMSO Figuur 28: Cimaterol 2-TMS (MH=363) EI TMS-NH 291172 CH CH CH-NH-& 3

I

2 \ OTMS CH

I

3 CN Cl

nl

TMStNH Massa's 369 455-86 86 1 455-369 Massa's 456

I

(M+H)+ 366

I

(M+H-90) + Massa's 291 363-72

n

1 363-2 91 Massa's 364 (M+H)+ 292 (M+H-72) + 274 (M+H-90)+

Figuur 29: Clenbuterol hexyl TMS (MW=374) EI Cl Cl

'~---Cl \ 262

t

112 CH CH -NH

I

2 OTMS CH- CH·-NH

/''---.-)

~

Cl -90 Massa's 262 M-112 112

I

M-262 Massa's 3 77 CL-isotoop (M+H/ 375 (M+H/ 285 (M+H-90) +

Figuur 30: Fenoterol-TMS (MW=591) EI Cl 355 236 412 J179 CH

'\

I

3 CH CH-NH-CH CH 2

~

-90 356 235

I

3

l

CH CH- CH NH-CH-CH 2 TMSO

0:

TMSO + H 255 CH

I

3 NH- CH-CH 2 2 224 OTMS OTMS TMSO Hassa's 412 M-179 356 M-235 322 236 M-1 79-90 M-355 Massa's 281 zie struc-255 turen 224

OCH~:~

TMSO + H 281 OTMS + + H ~ I

Tabel 1: In eerste instantie geselecteerde ionen van de onderzochte verbindingen (EI)

Component Ionen (in m/ z)

Isoprot erenol 267 322 355 412 Cl en but erol 86 243 262 277 Cimaterol-1 TMS 72 143 203 219 Terbut al ine 86 147 356 426 Salbutamol 86 14 7 207 369 Cimaterol-2TMS 72 158 219 291

Clenbuterol hexyl verbinding 112 212 262 359

Fenoterol 236 322 356 412

Tabel 2: In eerste instantie geselecteerde ionen van de onderzochte verbindingen (Cl)

Component lso pro terenol

Cl en but erol Cimaterol-1TMS

Terbut al ine

Sal butamol

Cimaterol-2Tl-1S

Clenbuterol hexyl verbinding

Fenoterol Ionen (in m/z) 272 300 349 351 202 292 255 281 366 456 274 292 285 375 224 255 338 428 442 364 377 281 592

TABEL 3 Herhaalbaarheid van de retentietijd van de onderzochte componenten (THS • derivaten) en de interne standaard PCB 138.

Heetresultaten El

RETENTIETIJD IN MINUTEN PER IJAARNEHING

COMPONENT 2 3 4 5 6 7 GEH. s.o.

v.c

(%)

*************************************************************************************************************** ISOPROTERENOL 20.618 20.606 20.603 20.599 20.597 20.593 20.589 CLENBUTEROL 21.192 21.179 21.176 21.171 21.170 21.168 21.161 CIHATEROL·1THS 21 .305 21.290 21.292 21.283 21.280 21.279 21.275 TERBUTALl NE 21.476 21.465 21.463 21.458 21.454 21.457 21.449 SALBUTAHOL 22.669 22.660 22.658 22.655 22.654 22.655 22.649 CIHATEROL·2THS 22.904 22.896 22.894 22.892 22.892 22.891 22.889 CLENBUTEROL 24.722 24.720 24.717 24.714 24.714 24.716 24.712 HEXYL VERBINDING FENOTEROL 26.150 26.148 26.185 26.143 26.184 26.185 26.142 PCB 138 24.446 24.443 24.440 24.437 24.437 24.439 24.435

Tabel 4: Herhaalbaarheid van de absolute intensiteit van de onderzochte verbindingen en de interne standaard PCB Heetresultaten El Ca.IPONENT ION 2 3 OPPERVLAK BASEPEAK PER IJAARNEHING 4 5 6 7 20.601 0.0095 0.05 21.174 0.0099 0.05 21.286 0.0102 0.05 21.460 0.0088 0.04 22.657 0.0063 0.03 22.894 0.0049 0.02 24.716 0.0036 0.01 26.162 0.0210 0.08 24.440 0.0038 0.01

GEH. S.O. V.CO!)

*************************************************************************************************************** ISOPROTERENOL 355.20 5131271 5433226 5426059 5171388 5818583 3699818 4101231 4968797 772155 15.5 CLENBUTEROL 86.05 2805884 2977082 3025245 2826118 3171260 2227243 2466998 2785690 331198 11.9 CIHATEROL·1THS 72.10 4073246 3874321 3969327 2977054 3301740 2525993 2784036 3357960 622072 18.5 TERBUTAll NE 356.20 9285803 9629897 10057191 10229600 11295762 7760976 7945300 9457790 1262215 13.3 SALBUTAHOL 369.25 12647224 13768954 14056067 13586358 15095437 12804483 13736523 13670721 816223 6.0 CIHATEROL·2THS 291.15 5909421 8957633 8908457 10683644 12382455 12072728 12748238 10237511 2470102 24.1 CLENBUTEROL 112.15 6445619 7974726 7915840 8310542 9445540 9630964 10431811 8593577 1336491 15.6 HEXYL VERBINDING FENOTEROL 322.20 6890558 9049585 8967340 9801077 11368349 12868324 14310183 10465059 2544316 24.3 PCB 138 359.90 22590940 23191472 23366735 21589831 23349974 23842843 25699132 23375847 1255416 5.4

Heetresultaten EI.

RELATIEVE

INTENSITEIT (X) PER METING

COMPONENT ION 2 3 4 5 6 7 GEM.

s.o.

V.C(X)

*************************************************************************************************************** 267.15 1.09 1.06 0.06 1.19 1.21 1.26 0.84 0.557 66.4 ISOPROT ERENOL 322.20 3.80 3.63 3.63 3.73 3.65 3.70 3.81 3.71 0.076 2.06 355.20 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 412.30 1.50 1.46 1.50 1.49 1.51 1.40 1.26 1.45 0.090 6.24 86.05 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 CLENBUTEROL 243.10 6.73 6.47 6.53 6.81 6.84 5.96 6.96 6.61 0.336 5.08 262.10 18.97 18.58 18.64 18.53 18.69 18.82 19.06 18.76 0.201 1.07 277.05 3.67 3.18 3.66 3.69 3.58 3.33 3.51 3.52 0.194 5.52 72.10 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 CIMATEROL·1TMS 143.10 2.85 3.08 3.25 2.48 2.99 3.19 2.58 2.92 0.296 10.2 203.15 3.35 3.40 3.44 3.38 3.02 3.43 3.42 3.35 0.148 4.42 219.10 16.55 15.21 16.39 16.80 15.30 15.96 15.90 16.02 0.608 3.80 86.05 36.17 35.77 36.31 35.94 35.94 35.22 35.58 35.85 0.367 1.02 TERBUTALl NE 147.10 1.91 2.00 2.00 1.99 2.02 2.06 2.04 2.00 0.048 2.39 356.20 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 426.30 4.84 5.00 5.11 5.03 5.07 5.00 5.14 5.03 0.098 1.95 86.05 32.98 33.73 33.67 33.72 34.12 32.95 33.78 33.56 0.435 1.30 SALBUTAMOL 147.10 4.11 4.00 4.13 4.21 4.15 4.01 4.14 4.11 0.076 1.86 207.15 6.01 6.16 6.28 6.37 6.52 6.21 6.37 6.27 0.166 2.65 369.25 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 72.10 67.47 68.65 67.71 69.51 70.33 70.13 70.49 69.18 1.253 1.81 CIMATEROL·2TMS 158.10 2.70 2.72 2.67 2.82 2.76 2.74 2.77 2.74 0.049 1.80 219.10 5.54 5.48 5.61 5.61 5.54 5.61 5.60 5.57 0.051 0.92 291.15 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 112.15 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 CLENBUTEROL 212.15 2.96 2.80 2.93 2.86 2.97 2.79 2.87 2.88 0.073 2.53 HEXYL VERBINDING 262.10 13.11 12.69 13.07 12.88 13.10 12.96 13.23 13.01 0.179 1.37 359.20 4.10 4.23 4.23 4.20 4.17 4.24 4.32 4.21 0.068 1.61 236.20 32.49 31.26 31.83 31.91 31.90 31.80 31.62 31.80 .369 1.16 FENOTEROL 322.20 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 356.30 35.60 35.75 36.40 36.85 36.94 36.92 36.75 36.46 0.566 1.55 412.30 48.52 48.17 48.19 48.39 48.42 48.99 48.80 48.50 0.304 0.63

Tabel 6: Diagnostische fragmentionen bij de EI-analyse Componenten Isoprot erenol Clenbuterol Cimaterol-1TMS Terbutaline Sal butamol Cimaterol-2TI1S Clenbuterol Hexyl Fenoterol Ionen 355.20 86. 05; 262. 10 72.10; 219.10 86.05; 356.20 369.25; 86.05 72.10; 291.15 112.15; 262.10 236.20; 322.20; 356.30; 412.30

Heetresultaten Cl.

RETENTIETIJD IN SCANS PER WAARNEMING

COMPONENT 2 3 4 5 6 7 GEH.

s.o.

V.C(%)

*************************************************************************************************************** ISOPROT ERENOL 570 571 571 569 566 569 568 569.143 1.m 0.31 CLENBUTEROL 597 598 597 596 593 596 594 595.857 1. 773 0.30 CIHATEROL·1THS 610 611 612 609 607 610 607 609.429 1.902 0.31 TERBUTALl NE 590 591 591 589 587 589 587 589.143 1.676 0.28 SALBUTAHOL 627 628 627 626 624 626 624 626.000 1.528 0.24 CIHATEROL·2THS 0 0 0 0 0 0 0 CLENBUTEROL 802 802 801 802 801 801 800 801.286 0.756 0.09 HEXYL VERBINDING FENOTEROL 1020 1020 1019 1020 1019 1019 1019 1019.429 0.535 0.05 PCB 138 781 781 780 781 n9 780 n9 780.143 0.900 0.12

Heetresultaten Cl

RELATIEVE

INTENSITEIT (X) PER METING

COMPONENT ION 2 3 4 5 6 7 GEH.

s

.

o.

V.C(~) ********************************************************************************************************** ISOPROTERENOL 428.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 338.0 25.6 23.6 23.7 23.5 21.5 27.1 27.7 24.7 2.2 9.0 300.0 26.7 26.0 26.8 23.7 21.0 26.7 30.4 25.9 2.9 11.3 272.0 47.1 42.7 42.2 38.3 35.1 38.8 53.6 42.5 6.2 14.6 CLENBUTEROL 351.0 69.9 65.9 65.0 68.9 66.6 68.5 69.0 67.7 1.8 2.7 349.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 CIHATEROL-1THS 292.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 202.0 24.4 20.2 16.6 23.7 23.4 25.5 22.3 22.3 3.0 13.5 TERBUTALl NE 442.0 32.7 34.0 29.4 51.0 36.4 41.3 59.6 40.6 10.9 26.9 281.0 41.9 44.0 42.5 44.4 43.9 48.7 48.0 44.8 2.6 5.8 255.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 SALBUTAHOL 456.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 366.0 14.4 14.1 12.8 11.6 12.8 14.6 10.9 13.0 1.4 10.9 CIHATEROL-2THS 364.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 292.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 o.o 0.0 274.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 CLENBUTEROL 3n.o 66.9 70.9 68.6 66.2 66.5 72.9 74.8 69.5 3.4 4.9 HEXYL VERBINDING 375.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 285.0 15.7 18.7 12.1 16.1 23.5 21.0 13.7 17.3 4.0 23.4 FENOTEROL 592.0 6.6 7.6 7.6 7.0 7.9 14.2 8.0 8.4 2.6 30.9 281.0 57.7 57.9 63.6 60.6 61.7 65.1 67.8 62.1 3.7 6.0 255.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 224.0 81.5 80.4 89.2 82.3 95.3 96.5 94.4 88.5 7.1 8.0

Meetresultaten Cl.

INTENSITEIT BASEPEAK PER WAARNEMING

COMPONENT 2 3 4 5 6 7 GEH. s.o. V.C(%) ************************************************************************************************************** ISOPROT ERENOL 93824 166656 108672 134912 72960 176384 66688 117157 43570 37.2 CLENBUTEROL 146944 230144 139008 186624 95232 260352 139264 171081 57845 33.8 CIHATEROL-1TMS 432640 329728 155392 413696 268800 285696 330752 316672 93536 29.5 TERBUTALl NE 380416 485888 328704 361472 228864 443904 270848 357157 90714 25.4 SALBUTAMOL 126336 1n152 141056 166400 108032 202496 129920 150199 33081 22.0 CIHATEROL·2TMS 0 0 0 0 0 0 0 0 CLENBUTEROL 113920 70016 71808 97152 83328 81920 56128 82039 19005 23.2 HEXYL VERBINDING FENOTEROL 84864 70144 58304 74624 48640 42368 32640 58798 18781 31.9 PCB 138 64384 97920 66688 85248 50624 139008 129408 90469 33637 37.2

Tabel 10: Diagnostische fragmentionen voor de Cl-meting Component Cl lso proterenol 428; 338; 300; 272 Clenbuterol 349; 351 Cimaterol-1 TMS 292; 202 Terbutaline 255; 281; 442 Salbutamol 456; 366 Cimat erol-2TMS 364; 292; 274

Cl en but erol Hexyl 375; 377; 285

Parameter file: DATA:8AGO.A

Descri pt ion IDENTIFICATIE 8-AGONISTEN last modified 8y PK

Tune fi Je : ~ATUNE.U

Acquisiticn mode: SHI

In lel GC printOut des ti na ti on PRINTER:

T E H P E R A T U R E P R 0 G R A H

&

H E A T E D Z 0 N E S rUn I i me

MJfll

e(lu i I i brat i on ti me 0.50 Purge oH time 2.00

in i ti al in i ti al Ra te fin al Fin al te tal

level tEmp 1 80 2 3 4 5 6 7 8 Oven (Standby) lnj Port 8 Detector A actual 213 260 time 2.00 Setpt 81) 260 Off (" C/~li n) tEmp 5.0 180 30.0 300 limit 300 270 0 Jnj Port A Transfer L ine 1 N J E C T I 0 N P A R A H E T E R S tI me 0.00 9.00 actual 250 Setpt Off 250

numbeR of A washes 5 number Of 8 washes

Humber •>f sample Hashes : 0

Number of sample-Pumps : 3

Injector ~troke Jength : 5 Sample ~iscosity: 3

!njection mechanisll : Auto liquid sampler ti me 22.00 35,1)0 5 limit 0 300

Run Table Editor

Page 1

llaBI

Valves Splitlss OH

lO. 00 ~lass Sp On 18.00 Group I 21.00 Group 2 22.00 Group 3 23.50 Group 4 2~·. 50 Gtcup 5 30. 01) t1ass Sp Off 35.00 Stop Run

S I H A C

Q

U I S I T I 0 N

2 Oct 89 9:37

a•

OATA:BAGO.A

solvent delaV 10.00 et1vol ts 200 reiAtive resul ting vol lage 2200

Group

D

2 3 4 5 6 7 8 9 10

1t of I ons 3 6 4 3 4 20 20 20 20 20 start Ti~e 19.00 21.00 22.00 23.50 25.50 --- ---

---lew maes Resolution VES cycles per eecond 4.7

i~ • 1 2 3 m/Z 86.05 262.10 355.20 Dweil 50 50

E

Group

I

3 4 5 6 7 _a 9 te # of I ons 1 6 4 3 4 20 20 20 20 20 start Time 18.00 21.00 22.00 23.50 25.50 --- --- --- ---

---low mass Resolution YES cycles per second 2.6

j~ lt 1 2 3. 4 5 6 m/Z 72.10 86.05 92.10 219.10 262.10 356.30 Dwe 1 1

se

50

sa

50

E

59 Group 2

I

4 5 6 7 8 9 19 11 of I ons 1 6 4 3 4 20 20 20 20 29 start Time 18.00 21.00 22.00 23.50 25.50 --- --- --- --- --

---Jow m~s Resolution VES cycles per second 3.7

i~ 11 1 2 3 4 m/Z 72.19 86.05 291.10 369.25 Dwel I 50 50 50 50 Group

z

3

1

5

s

7

a

9 . 10 # of I ons 1 6 4 3 4 20 20 20 20 20 start Ti~e 18.00 21.00 22.00 23.50 25.50 --- --- --- ---

---Jow mass Resolution VES cycles per second 4.7

ion # 1 2 3 n{Z 112.15 262.10 359.90 Dwel I 5& 59 59 eroup

z

3 4

1

6 7

a

9 to I of lons 1 6 4 3 4 20 20 20 20 20 start Ti~e 18.09 21.00 22.00 23.50 25.50 --- --- --- ---

---low mass Resolution VES cycles per second 3.7

ion 11 1 2 3 4

•IZ 236.20 322.20 356,30 412.30

NAME SAGO FI

TAB HEAOER ,PRINTER:

TIC 17:27 OR 3. SCR WR ITELN 701 , # 1 2 CH 19.2:20.2,355.2 THR I 6, 19.2 INT OR 3 SCR CH 19.8:21 .0,86.05,219.10,356.20 THR 14, I 9. 8 INT OR 3 SCR WR ITELN 701 , # 1 2 CH 21 .3:22.6 ,369. 25 ,291. I 5 THR 18 ,21 . 3 INT OR 3 SCR CH 23.5:24.5,359.90 THR 18,23.5 INT OR 3 SCR WRITELN 701 ,#12 CH 23.9:24.8,112.15 THR 18,23.9 INT OR 3 SCR CH 25.3:26.5,322.20 THR 16,25.3

INT

OR 3 SCR WR ITELN 701 , # 1 2 STARTSET CH 19.1:20.2,355.20 THR 12, 19. 1 INT CH 19.6:20.6,86.05,262.10 THR 12, 19.6

INT

CH 19.8:20.8,72.10,219.10 THR 12 ,I 9. 8 INT CH 20.0:21.1 ,86.05,356.3 THR 12,20.0 INT CH 21 .2:22.2,86.05,369.25 THR I 2, 21 . 2

INT

CH 21.6:22.6,72.10,291.10 THR 12,21 . 6 INT CH 23.5:24.5,359.90 THR 12,23.5

INT

CH 23.8:24.8,112.15,262.10 THR 12,23.8 INT CH 25.2:26.2,236.20,322.20,356.30,412.30 THR 12,25.2

INT

ENDSET QUIT