Bepaling van furazolidon in eieren

1 •

Afdeling Diergeneesmiddelen 1984-05-21 RAPPORT 84.49 Pr.nr. 404.0600

Onderwerp: Bepaling van furazolidon in eieren.

Bijlagen: 10.

Verzendlijst: direkteur, direktie VKA, sektorhoofd, afdeling Dierge -neesmiddelen (3x), projektbeheer, projektleider.

Afdeling Diergeneesmiddelen 1984-05-21

RAPPORT 84.49 Pr.nr. 404.0600

Projekt: Onderzoek naar het voorkomen, gehalte en stapeling van diverse diergeneesmiddelen in landbouw- en visserijprodukten.

Onderwerp: Bepaling van furazolidon in eieren.

Bijlagen: 10.

Doel:

Het doel van het onderzoek is tweeledig; namelijk door eenmalige dose-ring van furazolidon aan leghennen het testen van het opgestelde ana-lysevoorschrift van furazolidon in eieren op praktijkmonsters, alsook een indruk te verkrijgen van residuen ervan in eieren.

Samenvatting:

De eieren werden geanalyseerd met behulp van een intern analysevoor-schrift en de positieve monsters werden ook geanalyseerd met behulp van een "diode array" detektor.

Conclusie:

De analysemethode bleek goed te voldoen.

Furazolidon is na de eenmalige toediening snel uit de eieren verdwenen, na vijf dagen beneden de detektiegrens.

Tot op een niveau van 15 ppb was identifikatie met behulp van diode array detektie mogelijk.

Verantwoordelijk: drs M.M.L. Aerts

bt..

Samenstellers drs M.Z..f.L. Aerts, \<l.H.J. Beek

~

'

V.

IJ.

Projektleider H.I>t.J. Beek

_tv.

_IJ.

1. Inleiding

Furazolidon (5-nitro-2-furfurylidene-3-amino-2-oxazolidone) is een an

-timicrobieel middel dat in Nederland voorlopig is toegestaan in stan -daard gemedicineerde voeders (niet voor leghennen).

Toepassing in de pluimveehouderij als speciaalvoeder kan mogelijk aan

-leiding geven tot residuen in eieren.

Om een opgestelde analysemethode in eieren te testen op praktijkmon -sters en om een indruk te verkrijgen van de residuproblematiek werd

aan drie afzonderlijke leghennen eenmalig furazolidon toegediend en

daarna vijf dagen lang de eieren verzameld. De eieren werden geanaly-seerd met behulp van een HPLC methode en confirmatie vond plaats met

een "diode array" detektor.

2. Proefopzet

Aan drie leghennen werd bij het Spelderholt een capsule toegediend, welke ca. 0,25 g woog en een gehalte van 11,8% aan furazolidon bleek

te bevatten, hetgeen overeenkomt met 30 mg furazolidon.

De eieren van deze leghennen werden na de dosering vijf dagen lang verzameld, beginnend met de eerste dag na de dosering.

3. Analyses

3.1 Kwantitatief

De kwantitatieve analysemethode verloopt als volgt:

Furazolidon wordt met behulp van ethylacetaat uit het monster ge~xtra­

heerd. Het extrakt wordt ingedampt en gezuiverd met behulp van vloei-stof-vloeistof extrakties.

Het eindresidu wordt opgelost in eluens voor HPLC en geanalyseerd met

behulp van !socratische "reversed phase"

hogedrukvloeistofchromatogra-fie met UV-detektie bij 365 nm.

3.2 ~o~f!r~a!i!/!d!n!ifi~a!i!

Met een diode array detektor (HP 1040 A) werden de absorptiespectra

van standaardfurazolidon en van pieken in het monster met dezelfde re-tentietijd opgenomen zodat bekende en onbekende met elkaar konden wor-den vergeleken. Met driedimensionale plots kan verdere identifikatie

plaatvinden en kunnen ook storende bestanddelen worden opgespoord.

l 0

- 2

-4. Bespreking

4.1 ~n~l_lS!_

Met de opgestelde methode bleek dat sommige monsters een "vals" posi-tief piekje gaven wat ook te bewijzen viel met de diode array detektor (bijlage 10).

Door wijziging van HPLC eluens en de flow (acetaatbuffer pH 5,0 - ace-tonitril 70-30 1,0 ml/min werd acetaatbuffer pH 5,0 - acetonitril 75-25 1,2 m1/min) werd dit piekje gescheiden van de furazolidonpiek. Aanpassing van het eluens bleek dus noodzakelijk voor scheiding van mogelijke storende pieken.

4.2 !e~o.!e.!.y_e,!P!,r.!,m!_n.!_e~

Met de gewijzigde analyse-omstandigheden (eluensverandering) werden recovery experimenten uitgevoerd op niveau's welke bij de analyses van de monstereieren ook werden gevonden.

De resultaten staan hieronder vermeld. De gemiddelde recovery bedroeg 87%.

Toevoeginganiveau Recovery (ppb) (%) Blanco ei Blanco ei

+

34,9 80 Blanco ei

+

136,8 94 Blanco ei

+

181,4 86 Blanco ei

+

351,4 91 Blanco ei

+

668,1 86 4.3 .Q_e_!o~d!_n_g!.h~l.!_e~

In de drie eieren werden de navolgende gehalten gevonden (niet gecori-rigeerd van recovery!).

Kip 1 Kip 2 Kip 3

Dag J..lg ).lg/kg ).lg ).lg/kg ).lg J..lg/kg 1 2 12 J 71 266 8,45 174

*

*

3 1,64 35 0,99 21,2 4 J 11 84,8 4 0,76 15,1 0,58 12,8 0,40 8,77 5 0,46 9,3 0,44 9,1 0,14 3,05

*

Niet gelegd 8449.2 3

-' '

' '

- 3

-Bij dag 1, dus eerste dag na toediening, kon nog geen furazolidon wor-den aangetoond.

Het blijkt dat het furazolidongehalte in eieren snel afneemt. Het ge-heel is grafisch weergegeven (bijlage 2).

Na ongeveer 5 dagen ligt het gehalte beneden de bepaalbaarheidsgrens van de analysemethode.

4.4 Confirmatie

Met behulp van de diode array detektor (HP 1040 A) werden van monsters absorptiespectra alsook driedimensionale plots gemaakt. Op grond hier-van konden de monsters als positief worden aangemerkt.

Wanneer een piek met een afwijkend UV-spectrum wordt gevonden betekent dit dat het ofwel een andere verbinding is, ofwel een mengsel van fu-razolidon en een andere component. Variatie van de chromatografische condities is dan de volgende stap in de bevestiging.

Tot op een niveau van 15 ppb konden monsters met behulp van de diode array detektor geidentificeerd worden.

Dit komt overeen met een absolute detektie van ca. 10 ng.

Bij lagere concentraties kan geen goede UV-scan meer gemaakt worden. Met behulp van deze techniek kunnen "echt" positieve monsters beves

-tigd worden en vals positieve nader gescreend.

In de bijlagen 3 t/m 8 zijn de mogelijkheden van de diode array detek-tor zichtbáar gemaakt. Bijlage 3 toont het normale chromatogram bij 365 nm. Dat het monster niet zo schoon is als hier lijkt is te zien in bijlagen 4 en 7/8 waar resp. bij 5 golflengten en driedimensionaal over het gehele UV-gebied het elutiepatroon weergegeven is. In bijlage 8 is het kleine storende piekje, dat onder de HPLC omstandigheden

juist achter de furazolidonpiek ligt, te zien. De furazolidonconcen-tratie in dit monster is 174 ppb. In bijlage 9 is een monster met een lage concentratie furazolidon weergegeven.

s.

Conclusie

De analysemethode bleek goed te voldoen. Furazolidon is, na de eenma-lige toediening snel uit de eieren verdwenen, na vijf dagen beneden de bepaalbaarheidsgrens.

Tot op een niveau van 15 ppb was identifikatie met behulp van diode array detektie mogelijk.

--

4

-Bijlagen

1. Analysevoorschrift.

2. Grafische weergave analyseresultaten. 3. Chromatogram monster, niveau

174

ppb.

4.

Chromatogrammen monster bij diverse golflengten. 5. Absorptiespectrum.

6. Isoabsorbance lijnen.

7. 3-Dimensionale plot (links). 8. 3-Dimensionale plot (rechts).

9. 3-Dimensionale plot van een monster (kip 1, dag 4).

10. 3-Dimensionale plot van vals positief monster (kip 1, dag 1).

8449.4

Be/YL

'

.- ., _.. •' i :

:

\

·

,

J

•'

I " ~~

.

.

[

'

·

I : J ' ' _' : ' .• .' ' : " '

.

·' . ;

-

..

;_,, ., _{. J ·~}

·.

~ .. _{. ...} ! , ~ ,, '··· -·1· ' ; _' ' I ·\ . I • ~· • . :

·'

...

INTERN ANALYSEVOORSCHRIFT NR. DGM 35

le oplage (1984-02-03)

EIEREN

-

BEPALING VAN FURAZOLIDON DOOR MIDDEL VAN HPLC

bijloge

1

Verzendlijst: sektorhoofd, afdeling Normalisatie (Humme), afdeling

Diergeneesmiddelen, Bibliotheek (5x), afd. Toxicologie (Sx)

~

..

.

•'· f~ ... . •L I _' .-:. ·.' _" ' <"

.

.

., '· .• .

,

;... ., _{:j ,.} (' .' ~ ~:

.

• 'Jo ..

.

.

,•" : l l . l .• t) .'!J :.. ! .,;r \.• ; :.'C. .. ,.., '·· • :-11 :

.

J': : ) ~I I • · ' I ... ·'· ·· ·.

..

; '·: .' ·: f, ( ' .. }),,, .::· J:. ,, ~. • ' I l . •; ( .• , . . • ~

·

.. ::; ~ _:, . . .

-

,.,

..

.

'•.r.r: . ! :·. _{,'· .. rf ··~.!.} • •' .' ~·t'• ·' / ' ] :,:_:,·:: r._:,_ • ; "!' ' i ' _(K•O r

·,-

,

_i;

..

.

:

c

!\

\ 1 ·~

.

.

. , ;. ·1 :•

..

• f

"

.. .~: ,[: ''.\ .·.·!: ) ~.· . . .• !) :'

.

'

.

' ·.· '

(

.,

·J ·'

,,

l'. ... r .~ i .. : ~:-.; .. · . r ' • '

_..

_.

~. ,.J .ï '•.>: f! r

..

.. ..

_-

_{. :} ,_ '• j .·. ·.{ : ' ~:· ) t ). ' : () .. · . •.' L >

-'

c

INTERN ANALYSEVOORSCHRIFT NR. DGM 35

le oplage (1984-02-03)

Eieren - Bepaling van furazolidon door middel van HPLC

1o

Doel en toepassingsgebied

De methode is geschikt voor de bepaling van furazolidonresiduen in

eieren. De onderste grens van aantoonbaarheid bedraagt. 5 ~g/kg. De recovery bedraagt meer dan 85%. Het toepassingsgebied ligt tussen 10

~g/kg en l mg/kg (10 ppb - 1 ppm).

2.

Principe

Furazolidon wordt met ethylacetaat uit het monster geextraheerd. Het

extrakt wordt gezuiverd door vloeistof-vloeistofextrakties. Het

eindresidu wordt opgelost in eluens voor HPLC en geanalyseerd met

behulp van !socratische "reversed phase" hogedrukvloeistofchromato ...

grafie met UV-detectie bij 365 nm.

3. Reagentia

Alle reagentia dienen van "pro analyse" kwaliteit te zijn of van een

hogere kwaliteit indien vermeld.

3.1 Millipore ... water.

3.2

Hethanoi (b.v. Herck art. 6009).

3.3 IJsazijn (b.v. BDH art. 10001).

3.4

Ethylacetaat (b.v. Merck art. 9623).

3.5

Acetonitril (b.v. Merck art.

3).

3.6 Acetonitril, Lichrosorb kwaliteit (b.v. Merck art. 30).

3.7

Isooctaan (b.v. Merck art.

4727).

-·: -- 2

-3.8 n-Hexaan (b.v. Merck art. 4367). ·.t:..·:·: ~ l.)(,('!/1. l J

... -~·--· ... _j_. __

3. 9 Natriumsulfaat (watervrij) (b. V • J.1~;·ç!<.. ar·!=~ é.6.~19)~~, ~i.!:· . :; ·.,1 , .: J.. .:.

(' ·' ·- . . . 0

3.12 Dichloormethaan (b.v. Merclç:. at::t· ... :,.P-Q.59h:,~~ ''1· ' ::.. . : 'I .. :'\ , . : ~: ~:-. \. '.: _.\ _{... ,}

.

.

,I

3.13 Stikstof. ' ( t..-: r ·. / \ :' ,:., : '· '!: , . ,. , :

3.14 Azijnzuuroplossing; 0,01 mol/l~.t~r •. ~T::;,;·,s.;::~~~ ... J .... -•. ~ ·l'l;._. :: ,.,

Los·0,6 ml ijsazijn op in 1 liter water.

.. '

;"1 I ~I

3.15 Bufferoplossing 0,01 M natriumacetaat pH 5,0.

Los 0, 82 g natriumacetaat op in 800 ml millipore water e.r.1·~~~l:

Jk

J~H

····-"-...

_

. ." ·• ..

en meng.

3.16 HPLC-eluens

3.17 Furazolidon referentie standaard (Orphahell B.V~)~

: l ' ') f', I ; ·.'. ,.

3.17 .1 Furazolidon stan,oploss:f.ngQ .. : ::.·: ::~ ·' :o• .:~·;. '-..:~~ ; c·!'::::~, ·Hri

Weeg ca. 20 mg furazolidon nauwke~n;i~';: t;J.f .· in:.een,.:l9Q n~._.,J!,laa~~o~. f "~ Los

op in acetonitril (3.5), vul aan.mr:.m~IJ.".• , .. _ .. ,.;; ._₄ :i :: '.1 ,.. 0 . :· 11, :~::-~~)'·.'

:; :· :... tj . ;

3.17.2 Standaardoplossing. \, • • •ooi

' .

-

.. .. . ): · . • :J ..

Breng 10,0 ml stamoplossing, in. een .~.00.,m1. :~aa~l$,ol.f,. Yl;l,l .~n ·~ef₁₁ ac:eto-·

nitril (3.5) en meng. Breng 5,0 ml van deze oplossing in een _'·~OO_· :JDl

...

maatkolf, vul aan met acetonitr:ll

q

.5). ~n w.~n8.•!. ~~p~tt~er _, va11 fie~ç

oplossing resp. 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 en 20,Q,m~::J.n~·~f.~o9~~r.lij~~ , .,.-;.

cultuurhuizen.

Damp de inhoud droog op een wa~erbad bij 40°C met stikstof en los het

residu op in 2,0 ml HPLC eluens (3.16). De verkregen standaardopl

os-singen hebben een concentratie van 0,5; 1,0; 2,5; 5 en 10 ~g/ml.

-. ~ .-3

-4. Apparatuur

.

( \ ,• ·.

.

.

4.2 Rotatieverdamper (badCt:erllpera-t·üur,.,"ca. 40°C).

4. 3 Centrifuge ( Coolspin oMS~J~Fèmp1.-.•10!>c:c-~ 4500 rpm).

4.4 Hogedrukvloeistofch~m~~rà~isdhe ·apparatuur met UV-detectie.

4.5 pH meter (digitaal).

4.6 Haterbad, bad temperatuur-

-

ca

·

:

~35C?c .• · ~- ·

4.6 Normaal laboratoriumglaswerk.

:5.~eJ~vf\jtiè' :aj~:;;.; 9'lO:j.(.U~ül .tr, o·~·. ,J J_

:vámieg@::td§üfu,f1bed

(-$á

tl

)dä"~l:fefit:.::ép?.ftrl'àzolidon dient alles te geschieden onder uitsluiting hiervan.

5.1 Voorbewerking

Weeg i~'::e~ti ~él(~igialJ'·vaá'C46ó[ml!-.>fiet·:struif.van een ei af (ca. 50 g). Breng hierbij 200,0 ml ethylacetaat met behulp van·een pipet •

• (.V .g J ,r.!i:!.ndq'l· In r.-;: -,JJ".

:.-5.2 Extractie

Meng het geheel gedurende 3 minuten~mef· e~i Ultra-Turrax en spoel

''hferrtÁ0dè;:.§taá.f ~~:mët05fmll~af~t~~ ,·:.~.c:. _'1 ·-:

Voeg nu ineens 150 g natriuà§àlfä:at 'toe1

e·n homogeniseer het geheel

gedurende 2 minuten met een roerstaaf.

Centrifugeer de substantie gedurende 5 minuten bij·tû°C en 4500 rpm. -o::nrèng···too;o m·FvattLn~t-"tsupéi'nÇf~knt· met een- pipet in een indampkolf van

5 {~ LJ

i

'

q 1' ·, ' r • ~ 0 "" • '• ) · ~• o \-. ~· • 1

2· O·m ... 0 ~~. c."' ... , }.'"' ····'

éàmp

ae ·etnylácétäat~as:ê a~ e~'~en rotatieverdamper tot er een

olie-achtî~t ~~~tdU~b~~r~li~ft~-r~ n~ ~.'

DGM35.3

('

-....

-5.3 Zuivering

Neem het residu op in ca~ 50-. ml ~.c~t!J~~t.rf~ ·.q~ 5): e~: ~repJ~_ .. bé~,)<H~\~_ti­

tatief met 150 ml iso-octaan in e_~n_r.?..?<?.:,_~~:;·~~h~!~'~!:.~cJt~~r,_?,,:.< :::) : .d ~ .:

Schud de afgesloten scheitre~h~~ g_ecture»d~,k I)lf:npu,!f,-~·~ ... ;J.:,i~f A~.· •)~f.)S~~n

minstens 5 minuten scheiden.

Laat de onderstaande acetoni, .. ~rilfa:sJ~

&

_.i:

\Ln. ~-~r;·~5p,_,._llll_ J_~~af.l:?~~\\-.-,~J~-,₁

spoel na met 2 ml acetonitril. ·' __

•J ·.:. .• "'t' , :' ~~·:: ·...:.·,: .... ::;;_?~. _:;:u)j:. 'liY.' .. {~-;'~:j·)~i{,fl~i

Herhaal de extractie van de octaanfase nogmaals met 25 ml a~~:~,o"~~_tt:;U•

Laat de fasen scheiden en laat de onderstaande fase af' ln de indampkolf.

Spoel na met 2 ml acetoni tril. Verwe:r~' de iso-octa}~Jl.f,a,Seo .... D.~m.p,~de

ver-• • I. .l o - t"~ o o 4-o •.•, • •' 9 o,,_"l

... -... ... --.-...

-

__ ...

zamelde ac.etonitrilfasen a:f tot droog op een rotatieverdamper met een

badtemperatuur van ca. 40°C (pas op kookvertraging)o

Los het residu op in 4 ml acetonitJ;,i~, :Yo.c;_?_ toe, 4Q_.:m:t,

0

.

,9

h)

i

'áz':l-.1~:~· . . - ... • . . - J. \ -~.. ... . .. ... ' ...

zuuroplossing en 5 g natr~t~chl~ri~e.Q, ;-.-;:·.₁ ., .l

Breng het met 120 ml hexaat: -k~anq_tat;j:~f .:~~"?:~

...

~c?eitrechte:~.:)'~!:l-:))

;-250 ml.

scheiden.

2 ml azijnzuuroplossing.

Schud de hexaanfase nogmaals met 10 ml 0 ., 01 H,,azi ·jnzuurpplos~.ing (J..~i'f \1 .. ~-.~; ; t.:· .. J.'!~.t:.~.: ,.,.-,.

gedurende 1 minuut er. laat de fasen scheideno ·

Verzamel de waterige fasen en verwet·p de hexaanfase. Herhaal. de,

.it1 ... ··":;::\: ·; .. 1

• ~ •,

hexaanextractie nog twe~~. maal, eerG.~ met 12()_ .~~~ e:nl da~!nf.l ... f'

.

·

,

.

-

'TO;tgens ' ,. .. '· 1.- ,(.:1 11!,,1 ;)~ ([:.·/ 1l; 1. -·~ • bovengenoemde procedure (g~~.~ zout ~~~r:~•Z,\~~.n,~~~~: ;_\';; ," ·r·.>'l ,, ,

.-:

p!

-

·

:

:

'

..

:

Breng de waterige fase daarna in de ₁scheitrechter van 250 m1. met

... ·:': "r.·: ~c,.j .Y."·::.L . .:,:l,"..)J ... ~c)!Y1'..:...~.:: ·.-;·~~~.~·r:; •· .. ~: ... ) ·

behulp van 30 ml dichlo~:~:;'!le~~ç.a_n~r: Sf_ppd_ .?,~:)lf

1

r~es}.p_.t:~~l ;~c}1~f~fe9,h:~~t

gedurende 1 minuut en laat 5 minuten scheideno

Laat de onderstaande dichloormethaanfase af in een erlenmeyer van

100

ml via trechter en wattenprop met daarop 5-8 g .natri.umsul.fa.at ,en •:!· ... : .. ~ ~-~·~'7-H > \

spoel na met 2 ml dichloormethaan. Breng 15 ml dichloormèthà~ü-ln de

indampkolf en spoel daarna over in de scheitrechtex. ,

1_{f __ l: .... .. ·.}

J •• .J:'. ;, :~ ... _: \._··.7'·} ~ J •••

Schud de waterige fase nogmaals, 2;~a~·~~ bo.vens_~~?_I1d_~- e,n_. _yerz~~~l .d~ . .• - .. , ' 1 ... . ... · ... .. . . , . .J. .I ... '·' .. '.

dichloormethaanfasen.

Herhaal dit nogmaals met 15 ml .. 9.:t.~h~~_or)lle~;l)_Fan .• Spo~,l d_e .. na,tri,

~~~-r-' -· / . ' . . . . 0 ' · ~ . . • • ;

sulfaat na met 2 maal 5 ml dichloormethaan. Verdamp de dichloormethaan

op een waterbad bij 35°C met stikstof, to·tdat er een droog residu wordt verkregen.

__. ; _{' ,_._.,,.}, c 1.c ~_,., -.r! _....

-,

.

:..

-

5

-5. 4 Analy.seoplossing

. ~ iW'heP'resTiHi~ o'J>3 i~l·~~èci~s··.~~ro~

m:f'

_{HPLC eluens, pipetteer hierbij 4, 0}

ml iso-octa~in').-~'h:..'sëil~êi1lfet:·g~h~~l1130 seconden en centrif~geer het

11

_Yn~h~s'1i.

_:~ffd

_~u!l!fid~

_ur

_ti()

_Lïb

_i~ût:

_·

_ëri

_.

_'Yit':l!-Q~

_{·mi··bèntrifugebuizen. Verwerp de}

bovenstaande octaanfase en filtreer de on.derstaande analyseoplossing

vÓbjr:Îi~li~~

.f

1_{éfl/oiL"'e/-h;:MÏi.{pbrtf fii:ter (Au.rodisc -0,45 lJm).}

Injecteer van deze octaanvrije analyseoplossing 50 }..11 in het HPLC

L.<s·~s'iNrdif:',:; ~.:1 _{.:·.;; :Jd: ·. ·} <:o:.<.:iJ • .:-'1 ,,.:: .::.1.

,.· ~ ... c:!ç.-,~;:,:-;'· ::·b .1.:. ~~. ~ ··;.ö1 ~~:.S.·,j_:,·I~.0r.~. 9t I •'• · ' -• :·! ,J Kolommen

Ág~i}.fi~lc~~

'

~~ofó'm

P'~

cpTM

~"'hflr

'C1r.S (4; 6

x

250 <>Si' " ·,, ,.. • ( Chrompack àï't. 285 t2). · Voo1

tk

1

1ÓIÎ1

1 -l .--3" '1.:~-t-'f3oÖ·~·ap.~k

'

ClS

!'.

(:i;

9~x·

:

20

.

mm) (Waters art. 27248).

mm)

10

ll

37-50 ll

~Î~~~~'"

".

?.

s:J

9

j~:J.t~

È~ffe

F!:I

pR

'

i5J;o

'

1

-

.

Ac~Èonitril

700-300.

Eluenssnelheid :

1,0

ml/min.

··• !"'Q .. ", ., , :. •, .r f"•ull,...l ~o· ,·. "'·· "'' ... ·. .:•1.'

·oetectlé- '·'' .:.~•·' .. :w·uv~36.) nni~ ·'8 _{·" "" ·}

Injectievolume : 50 lll•

Ret~~ti~~t33"JUU.i:-:;l6~8l~ml~~(.) J.c: 0 '!_,,

7. uYtvf>~'i:-11sH • 9a<>=ili!..'l.x0:1 ~w q·'~ . ,,,, ·,:'J J?

<

n~

'' ~m

J~

11

_ll1n~~'tl

_'

cfe!')

v~

~

k~~~eitÓ!o~~·teroplossi~~

in het HPLC systeem en

vergelijk de

furazoliêi~ó!bl~l:j'fu1ft

.

d!'i;~

'äte met één van de

overeenko-meri'cf~

:

ii~~à~~rà'6l>il>~1

!

ing~{/

\1b-i-<a

{~~er

kregen;·

··

a~fi~e'h'

'h

~

·

b

:.Jz

g~fi~1l~

a~

l't

?)l

!{/kgj'fa~

2 _{f'ur'azÖiid'bn in het monster of aantal}

}..lg per eio !î·",'/ ~ '.'1_{(0·l'.t'!' f•;ri} . . j ~ I .. . . ·. ·; .. , ,r:J₈ S8.1 '' '" kl.il :t. "'· • Bespre ng , · :s :; . .i:!:' rf.') ·~ . · ·. 1: n . .• :·.;; · · .. :·11 ·. ('"' '1 , . 'J -;f ') ~ ) _; I .. ( : ·~ . . r.-, ;_, ( .>

8.1 Voor de bepaling vari ·ne't ferugvindingspercentage (recovery) dient

rii~n

f.fiff

::-

,;.r~~kö

'

m'~

.)

te~i

:i

a'kf

cieln 'tti:ra zolidon bevattend) een zodanige

hoeveelheid van de standaardoplossing toe te voegen dat een gehalte

t~

~~~ri

:

·

ro

p-Jl>

1

Efrt'

·

t

p'~in

~

'

w~rd

·

t

r

0

.Yet'ki~g

èn.

DGM35.5

- 6

- 6

-Men dient van de verdunde stand~ard (acetonitril~erdbnning))een.

bekende hoeveelheid in het bekerg~as te pipetteren). droogd~mpen met stikstof en het monstermateriaal toévoegen.

8.2 De analyse kan ook uitgevoerd· worden op een Hypersil' ODS

5

~

(4,6 x 250 mm) (Chrompack art. 28820) onder dezelfde: analyseomstandig-heden.

Verantwoordelijk: drs

F.G.

Buizer

~

Samensteller /medewerker: W.H.J • Beek

W.

Jb'

1

.

1~

1

/b

,

c t.;o

I

."

~' è. -.

[ J

I

I

I

rr~>.e

-

0W1"t'l

.

':t:

~~

b

::ri1

V

.

Utr:J):noJ~

:

>..:;)

_

;

~-:r.

.

'•!:' ;!,.:

l

t

I

I

I

I

I

I"""-"~"-~J"'"""'"~'· -~"' . ' ·r..-,_- .•... ", •

·

1

"

;

I

;

euo

b

JJ., '!,

•

l

qy

;

u

.

'

a•

q"

n

"

r .

.

,

.

dro;,. , I

'

<

0 "t 0 ... ll.

.r:

]

ootootootootootoot""~

lsa·~~!à~~

(jN I<IN ITI ~

.

.

.

.

.

,. ... N<TI""lllCOI"-CD

•

C) (\J

,.,

••

=>

QJ< E E •• •r-f L-J •• r-4 .. .. I - ~ 0 OI OI • C 0 C ... +> ·- ,

+>

L

en

·.-t OC+>OI ·.-1 I.J... 0,... < N U )

bijloge

3

o

·

m

o

·

6

o·a

o

·

l

1"""1

c

•.-I E '-' OI

o·g

E •.-I I

-o·s

o

·

v

I r 0 I • ~ File:

RAWDAT

Datg: 05/08/1984 Inj. Time: 13:39 E A 2, 8: 8 3, 8:

c

4, 8:

0 6. 8: E 7, 8: 25.0 ( 25.0 ( 25.0 ( 25. 0 ( 25.0 ( 12. 9) mAU 10~ 15. 5) mAU 104 15. 5) mAU 10% 20.6) mAU 104 7.8) mAU 10%

bijlaoe

·

4

hp 1o;foA Vavalgngtl1 1. 210. 4 2. 230. ~

a.

25-4, 4 4. 260, 4

s.

300. 4 6. 365, 4 7. 320, 4 B. SSO.SO

-

---~---

_____

)

A

\____

0

c

8

A

1'''''''''1''''''''

'

1'''''''''1''

'

''''''1'''''''''

1'

''''''''1'''''''''1'''''''''1'''''''''1'''''''''1

a

8

8

g

g

g

g

o

₀

o

o

o

• • • • 0 0 0

o

~ N

m

~

m

'

_ID

,

_~

•

_m

•

_m

•

_à

~ Time [min]

File:

Date:

Spectrll!

[mïnJ:

Reference

fminJ: Attn [mAUJ:

g

0

%

_

Absorbonce [mAUJ

c

[M]):

[mAUJ

0

RAWOAT

05/08/1984

8

.

7842

9.

4823

23

.

4

20

.

0 (362/

4) hp 1040A

-10

.

0

I

Wavel

e

n g t h [nmJ

c::::r

-·

-·

Q

-~ CD

(11

,.-, E c

....,

..c ~ en c (I' ... (I' > 0 3:

390

360

330

300

270

240

Fi lenamQ

Oat.Q of

file

Date

of

plot

z

RAWOAT

05/08/1984

05/08/1984

isoabsorbancg lings

Absorbance levels [mAUJ

10 - - 18 12 • • • • 2D - -14 - - -. 16 - - -· t.., 11UOA

Max

20

Min

1

V

j

I I I I I I I I I I I I I I I I I

5

.

1

5.4

5.7

6.0

6.3

6

.

6

6

.

9

7

.

2

7

.

5

7

.

8

8

.

1

8

.

4

8

.

7

9

.

0

9

.3

Time [min]

c:r

-·

-·

Q

-(,Q (D

0)

' I• •

FURAZOLIDDN

Absorbance [mAUJ 16. 8

240

2

7

0

300

360

Wcvelength [nm]

₃₉₀

4

2

0

1.3 2. 6 Fi lename: Date

of

fi

Ie: Date

of

plot: Angle:

\

~

\

~

!'

~

I !

.

I , \

' ' I.

;l

'~·

·

l

if;

\

I ' ' . ; · \ i f : : J ! 1\

'

!

:/

.

lf

;

it/'

,

I'·!'

~

·

\ I : I ' : . ·1 ' I

j

i\

I i l j I

I I

,' ' ' I i I ' , 1 / ;' \ I • I . ~ : : I i J I • . I I ·,, I 3. 9 5. 2 6. 5 7. 8 hp 10-«<A-85 RAWDAT

05/08/1984

05/08/1984

30

.

0

9. 1 Time (min]

c:::r

-·

-·

-

₌

CQ

'J

FURAZOLIOON

Fi

lename:

Absorbance [mAUJ Date of file:

hp 10-40A-85 RAWDAT

05/08/1984

05/08/1984

30

.

0

16. 8 Date of p 1 ot: Angle: ~

'

i\\

' I .' ~

~:

l

.

i!:<~\\

j::lj,ll

~

t/1

lil/~

'

\

',

\

/\\

I··

'I

.

~

I

!lil

.

I I \

·

~

• I I

I '

I ' ' \ ""'-; ' : '

J,

I

1

j \ ,

~

: ' . I 11

I

IJ i I I

I

~

~1.

l!

j!

~,1·

I

I)

~f/(

\i.

I

'

I

I

I '

i

! '' '

. •

I

/ ' .

'

:'

r

i I

i

I

I

I I

d

I

!

I

jl!

/

I

.

·

'

. : r 1 • :

'11

1

i

/jlllll

•

/

~

\

~~

."

-

· ·:

,_

:

I!Jilli'll

:

:

~

300 . '-;W..J I j ) l

I

I

I'

I

.

.

''\.

,

~~

i

I IJ I I • • 330

·

~

.

~

...

"""!

: ,

,

360 '~ Wavelength [nmJ a1 7. 8 ~s ~2 3.9 2. 6 1.3 Time [min]

er

-·

-·

-

Q

u:::a

CD

KIP

-

1,0AG4 PLOT

Fi lename:

Absorbance

[mAUJ

Date of file:

Date of p 1 ot:

s.

ol

Angle:

240

~

Wavelength [nmJ hp 104DA-BS

RAWDAT

05/09/1984

050984

30

.

0

Time [min]

er

-·

--·

Q

-C,Q CD .

(0

KIPl,

DAGl

Absorbonce

CmAUJ

5.

o

l

.~ .

\

I ' I \ ; I I . '1 ~".

{

\

h , J I ' Wavelength [nmJ

-

.

Fi

lenome:

Date

of file:

Date

of

p

1

ot:

Angle:

hp 1040A-85

RAWOAT

05/09/1984

050984

30

.

0

1. 3 ~-6 3. 9 5. 2 6. 5 7. 8 9. 1 Time [min]

er

-·

-

Q c.Q CD

~

0