Vegetatieve vermeerdering van Asparagus plumosis met behulp van van in vitro culturen van "doornknoppen"

(1)

Proefstation voor de Groenten- en Fruitteelt onder Glas3 Naaldwijk

Vegetatieve vermeerdeiring van Asparagus 'plumosis

met behulp van in vitro culturen v a n " d o o r n k n o p p e n "

door :

ing

I/

2

.

van Ravestijn

Naaldwijkt oktober 1975

(2)

Inleiding Proefopzet Resultaten Verontreinigingen Spruitvorming Samenvatting Bijlagen

(3)

Project C-4 Proef III.

Tijd april 1974 - januari 1975. Uitplanten : 22 mei - SI juli

Plaats Orchideeën-thermostaat Plantenziektenkas.

I n l e i d i n g

Uit oriënterende proeven bleek, dat uit.doornknoppen van Asparagus plumosis spruiten kunnen ontstaan. In deze proef werd de invloed van I.A.A. en kinetine op de spruitvorming nagegaan.

P r o e f o p z e t

Uitgegaan werd van stukjes stengels met doornknoppen. Deze werden ontsmet met 1% Na-hypochloriet (10 vol.% van een 10%-ige handels

oplossing + 0,1% Teepol) gedurende 10 minuten. Na het ontsmetten werden de stukjes 3 x met steriel demi-water schoongespoeld.

De stukjes werden rechtop geplant, met de "doorn" naar beneden in een hodem volgens Linsmaier en Skoog (bijlage 1).

Aan dit basis-medium (= behandeling 1) werden diverse concentraties I.A.A. en kinetine toegevoegd. Bij beide stoffen werden 5 concentraties vergeleken. Hierdoor ontstonden de volgende 35 behandelingen .

I.A.A. in mg/liter 0 0,001 0,01 0,1 1,0 10 Kinetine in mg/liter 0 1 2 3 4 5 6 Kinetine in mg/liter 0,001 7 8 9 10 11 12 Kinetine in mg/liter 0,01 13 14 15 16 17 18 Kinetine in mg/liter 0,1 19 20 21 22 23 24 Kinetine in mg/liter 1,0 25 26 27 28 29 30 Kinetine in mg/liter 10 31 32 33 34 35 36

(4)

buizen per behandeling. De buizen stonden in de orchideeën-thermostaat (zie bijlage 2 "Gemiddelde temperatuur in °C per decade") bij

16 uur licht en 8 uur donker. De helft van de buizen werd — behalve met watten — ook nog met parafilm afgesloten.

R e s u l t a t e n

Verontreinigingen traden over de gehele proef berekend voor 12,7% op. De verdeling over de behandelingen was niet gelijkmatig (zie bijlage 3). Over alle behandelingen berekend, werd bij de buizen met extra parafilm 12,5% verontreinigingen gevonden, zónder parafilm

13,0%, zodat het extra afdekken met parafilm nauwelijks van invloed was op de verontreinigingen.

De meeste verontreinigingen bestonden uit schimmelgroei (behandelingen 1 tot/met 28). De hogere behandelingsnummers hadden meer last van bacterie-verontreinigingen. Dit kan aan de tijd van het uitplanten hebben gelegen of aan de samenstelling van de bodem. Wellicht onderdrukten de hoge kine-tineconcentraties de schimmelgroei.

Gemiddeld traden de verontreinigingen na 15,4 dagen op. Het vroegst zag men dit 5 en het laatst 110 dagen nâ het uitplanten optreden.

Rekent men het aantal verontreinigde explantaten niet mee, dan was elke behandeling gemiddeld 19,7 buizen groot. Behandeling 35 had het minste aantal buizen (10); behandeling 23 en 24 de meeste buizen (24).

Spruitvomring trad over de gehele proef berekend voor 32,3% op.

Per explantaat werden dan één of meerdere spruitjes gevormd. Met para film afgedekt gaf gemiddeld 36,0% uitgroei, zónder parafilm 28,5%. De volgende percentages werden gevonden.

(5)

-5-o) a) •a oi rH (d ₀₎ +j KS FI KS <U •H ü I S Ü ft a -H _c eu x _eu

M

*

u eu •p •r) f-ï

M

&

cr> S fi •»Hl < ₉

<

H <U •H -P _ed U •P c eu O

C

8

Id I M CU -M fi

_{C -H}

g* c a* O -H U -P o o o o M eu •p 00 CD en m 10 * 00 un VO <3* V£> «çj* 00 CN co «rl CN H ro ro co _{rH H}a> in O os CN co CN 00 rH O 1 o r-1 rH H rH rH H I """V _OS, o *\ rH ""s» CN ""N* rH \ LO 1 1 N, G\ (N 00 CN r* » CN CN CO CN ro 00 r- 00 00 1 rH * ^ 1 \ 00 -çf CM O 00 00 1 O 00 CN ro r- y ro CN 00 00 O LO rH * % w rH rH in _HO o m CN O 1 N V ro CN VO 00 1 O rH o r- o 00 <£) r- 1 r-i rH <% w H 1 _\ tn _u-> *£> _rH un (Q in ro 1 00 es CN CN m 1 <j\ 00 CN O 1 rH iD •» % I \ CN O ro o 00 un 1 O LO 00 CN rH 10 1 ro 00 O 00 LO 00 rH r* 00 1 rH «=r w <* 1 N ro rH V0 rH rH rH 1 in 00 CN CN CN C0 1 00 r-o ro CO VÛ ro r- t _V rH co * 1 N vo o 00 rH CN 1 «H CN rH 00 CN 1 ro n a) rH ti O rH 1—t o O rH O a) •» V rH 'O O o O O rH o _H nJ _<d _-HKS •P a _O _a» H o m n fi _<d > M (U CD 5) O»

C

O

-P

$ •O

•P

Ai •n •H I—I

XI

•n -M Vi 4J _as •O Vl ai •a

_M

©

>

co •H •a <D i—I H rd >

£

c _<U T) fi O 3 U 0) > <#> LO 00 o* c •H o s •H 3 a _co I—t a) a)

M

a)

%

_•H s r-1 .S ai "O M 0) CU S H* o c <U m c

M

eu

•P

•H a> .H •ri \ •P Cn • (0 a •o V4 _fi_4J rH <D fi Ai o o (1) o M fi Ai o fi co o • a» 01 M <u (1) •a H rH "O fi ai o _{•H S m}fi a> 'Ö o a a _fifi •—t a) M 1 a) o •n ₀₎

_•P

•H T-t _O _> H •n a) o 01 •rl 13 m x> eu •H > •H w D> K} -p eu 4J •H id eu

»

•Q +J -P C •P • -P fi *w •H eu id o> -P eu o 3 r-i u X4 c _{C -P •H eu vi •H}fi X) eu eu ft M 0 fi a u •P •0 co (U o eu H C _ft _{o 0 o} > id M fi a) ft eu C > o eu •P id Öl ö> •P O +j tp fi > •H a co o •H • C eu S fi o> p < •H O S a) o Q eu S • U fi o rH 0 5> ft C eu o r—1 c ed co • o> Ü o eu _{-p eu eu} 1—t _eu H o> fi eu id *rH •a eu •0 eu eu •P a) •p -p Q •O eu co •p _fiid id n o» 0 co id u fi • O C fi ₀o» +J rH _id _{ft fi fi}

•P

_eufi O id eu 0 > > a A id X eu 'à) •P a H CU u _fi><1) "H -P •a Ol eu

?

eu eu O <D o ft P •H o eu c

_Q)

T) _{Di 1}o 0 ft

_CO

Ä 1—i M _Ü >

AI

•

TJ

•H eu «p

CO

fi Vl i—1 c ₀₎ _{•H •H}fi O -p eu -H C eu eu eu •P

2

eu 4J eu S

Q)

a •H

•O

>-l eu C S Vl •a o H

•H

•p C •H C eu 1—1 c \ S C

•H -P

eu KS eu eu Qi aj O M eu

•P

C

T)

o> a & U _{eu eu •H}fi

_•P

id •H ts o> a •H t—1 <0 > •M fi a a id

T)

_{-p rfi}0

_C

_{r—1 eu t»}id c eu id o

_JQ

•P

0)

\Q)

a M O -p •H -H eu »eu

_D

_fi

_>0

_{U eu S}X id eu 1—i 0

_Q

O

+J

(6)

Deze cijfers slaan op de gehele proef. Door allerlei interacties kan het gemiddelde beeld zijn vertroebeld. Wél zijn deze uitkomsten uit een groter aantal waarnemingen verkregen, dan die van de afzonderlijke be handelingen.

Alleen "kinetine (eerste kolom) geeft een duidelijke invloed van vooral de hoogste concenrtatie te zien. Uit deze cijfers lijkt het niet uitge sloten, dat zelfs een nog hogere concentratie dan 10 mg/liter nog ef fectiever zou kunnen zijn ten aanzien van de spruitvorming.

Werd uitsluitend I.A.A. toegediend, dan gaf zelfs een geringe concen tratie al een verhoging van het percentage spruitvorming. Het op timum lijkt in de buurt van 0,01 en 0,1 mg per liter te liggen. Door combinatie van beide stoffen werd soms éen nog hoger percentage spruitvorming gevonden. Het meest gunstig leken de combinaties van 10 mg/liter kinetine met 0,001 of 0,1 mg/liter I.A.A.

Aangezien in deze reeks geen duidelijke lijn valt te onderscheiden, zal vermoedelijk bij deze hoge kinetine-concentratie enig toevoegen van I.A.A. wel gunstig zijn, maar lijkt de I.A.A.-concentratie hierbij ondergeschikt.

Het gemiddeld aantal dagen, dat verliep tussen het uitplanten en het uitlopen van de scheuten geeft onderstaande tabel.

(7)

-7

Q) ©

•O Ö> _{rH (O} 0) -P 2 c •O QJ •H O a _{Q) 0)}

M

O O» H1

•H

_C

(U

M _a>

M

A)

N

M

•2

•H

Ol

8

0

"H

< < M

V

•H

_•P

Id

M

•P

G

A)

a G o u

I

n) I m a» •p G c -H A) X o

G (U

O -H

U -P

o o u a)

-P

•H

gf 00 CM _•h. 00 «H o> O o en 00 m Is- i CM CO ro CM H H 1 m i CM M 00 r- o m m H O 1 TH _CM _rH «•w 00 t V 1 CM v.. ^s, H ro *—i a> CM 00 t > 1 o O 0% 00 O 1 O VO vo in «H CM 1 _{rt 1 in}vo H ro m ro * N 00 O r^ ro VO 1 CM rH 1 LO VO m ro H 1 _cr»VO ro I r-ro _* in H H 1 CM r~ i 1 •« % « 1 \ ^ i CO _CM ro tn CM VO 1 CM _{ro m CM «H 1 CM} VO 1 CM 1 r^ H ro r- C0 1 LO tH i * ^ 1 N i H G0 r» G\ rH I o vo i CM CM ro «H H 1 CM T—t 1 <T> ro _«* m i ro H 1 ^ i S « 1 <3* un ro m i vo Ol 1 ro H ro ro H 1 00 CM 1 VO ro en VO G* 1 ^* T 1 ^ 1 N ^ 1 o o> 00 O r- r* i O *H 1 ro ro *H 1 LO _ro ro I o\ r* CM «H 1 CM _<* CM 1 ^ 1 N « 1 es (T\ CM 00 VO 1 ro I <3- *-4 r^ vo 1 vo _o\ ro 1 W O H •a 1 o O rH o i—t 1 * * _a> _i O o o O H O _rH i—i >o 1 (d •a i (d •H 1 •P ₀ a _{a) i}i O M d>

<?

Xi a _a> a>

•P

(Ö T3 ö> a

•H

_•p

•H

₃ •p 5

M

G

•H

_N

0}

Ö»

•H

_G a> x _<0

•H

IH m

M

0»

C

< H U _d)

•P

Oi s "ni »

-H

₀₎

O

V)

0>

•p

"H

₃ «

A)

G en -p id

S

E

<U

<D

•P

0)

A

•p (0 +J -H •P G •O 0) 3 01 a •X •H m a «5 G D> •p d) S 0) (U a> G tj> rH J3 •H G G •P +) -H 3 +> _{a) C}<D _•AM i—1 m ₀₎ a •H _{3 "2 a>} a _M n c o> G Xi «j 0) S M Î3 •P A > U] •H _H •0 _{<0 G} +j \ _{S? r—1} <0 rH 0<

»

i—1 U n) a 0) U > _oa G _<0 _•P _• •P IT) 'S I

•P

•H

•A

G

_<T>

G _ai tj c

O

>

a)

Ü>

c •H g

O

N

O*

G

•H

O

a

•H

Oi

(0

C

(U

G

<D

-P

8

_m <D

•D

•H

_(U

XI G <0 > G

<4>

vu CO •p

•G

_o ai

•O

A

o as > G id

"O

en <v

•W

_•P

n) G

•H

1 _U • o >

_A>

O>

G _a>

•A

_>O

N»

xi G

_A>

•P

eu en G

_A>

S* X _Q

(0 •P

_{en •H} ₍₀c •n

_•H

₀₎ •d 0

_(U

G 3 1—1 A

•0

00 ft

VI

(U

a ft ft id G

•H

(3 co G id d) c N w 0)

»

8 Q) * - _d) _ta 8 G X & en

•P

G G o (0 3 C X "H (U o -p •p (D

•N

•a _M

_-H

c _d) _G t7> _C

•H

_X n) (1) Ü d) •H d) M id O M

ÖV

• •H n d) S M d) IÖ rH (U

•P

O» a "Ö id •a •

•H

0) •p a > c a rH •a

•H

 \ H 3 _a> _M

•P

10 o> Xi a Ol en

•P

d) «u a "d a O» G

•P

43 G a •a tn O id d>

O

•rl O id d) <0 H a d) xi •a •p 's—» m o> (U <u en 10

_•P

-P -P

T3 M

VI

a) d) 10

4H

0 id C (U _{G Xi} Oi rH 0 id •H 'O (1) c (U > ? •P o •a •H N a) •n M _'ri _d)

•P

_X rH G eu

(U

d) 0

(U

•H PQ _{a s}

01

_Xi _{o S}

(8)

fi •O _M

§

S

•p 3 _a) xi _o d> >o

S

iS 01 H •S s. <D •H N co 04 •n 0 _fl M _•Ha M •P 0 id O M •P fi fi (U d) "0 o _{fi fi} 0 o M 0 ₁ •k 1 d) •P _{3 •.H}fi d) •P Ä CD _{a C} 10 •H •a •M i« o d) o Ol Ä O

_.fi

C d) d) O) X) d> i-i > •H •H X) n) Ä •O (U C m o _•p • •H •g 3

>

>—1 3 ca O •P Si •H o 3 _co d) iH A S _S C _{d) •H}-ri tJ M _U

_£

o _» _•a •d d> •H _•p •P o id

£

0) M a> g •P c a CO G © (0 § o s <a rs; o 03 **•» isj O > <1) & (D _en (d C <0 co •p •C _o 0) M H ₁₀ •P

%

(d •ö _r-\ Â •u •A g 0> fi d) c d> •P c _<d H eu <0 fi c 0) g» 10 •o >0 •p fi id <d d> O» id •P fi (U o u ~

&

Oi fi • 1 1 o fi 1 1 > 0) 1 1 d> •p -P 1 (U Oi 3 3 1 c id d) d> 1 •H r—j _{Xi Xi} 1 M •n _iH o _co U _m Vl ₀₎₁ -1—1 •n -P 1 •rl -H •HI • M N N _{HI <} Q \l • 0 il < • fi • H d) _« 1 1 W H • H H 1 O H H _>o«u z »H _d) H fi co d) 3 O* •9 •9 Xi C Vû I I I I I in I I I I •P _d) a c I -o* _d) •P _id •P C •d iH (U 0)

£

•p c 0) _u M d) 04 3 0) r-i Xi _{id u} •P C0 fi T-> fi Id -H (U «! N -P <d C •P d) fi o> •d id < "O fi id •P > _d) S d> •P C Xi -P QJ U 3 •P -H (D _{ld N}_jC • P A O fi O M id r-l fi -P ft û) QJ X -p S (U fi c tu d) d) Cr> -P -P id 3 "d •P dJ -P C _{d) u id}A C u 10 H M n ft d) -ri X h H 11 I I I c 1 d) l+J I 3 I (U l-0 I o I W l-n l-rl I N I I I I I I I I I fi d) fi •rl

$

CO m o CN o o ci m u? vo o o CN -r-l CM Ol O O CN CN O m o o co co r-co vo M KO. ro co ro ro ro ro ro *-« r-m es ^ in o o CN m m o m o m to ro LO ro _«i _* H C» ro ro CN CN in _* CN ro *k ro c (U •p 3 d) S ₀ 10 o o •ri -H N C d) 0) 01 «-H _{O -ri} CM • + fO C C (U d> •p +) 3 3 0) d) Xi _o xi _o 01 •r-t co

•N

•o -rH

T

H N M fi fi d) d) d) eu O»

01

r» CM -P m co CM O ro +> a* CN ro O O CN ro O O O O O <rH o o ro ^ ro oo ro ro in

(9)

Zijscheutvorming vond voornamelijk plaats als 10 mg/liter kinetine werd gebruikt. Zonder auxine (I.A.A.) zag men het hoogste percen tage met zijscheutvorming en ook het aantal zijscheuten per ex-plantaat lag bij deze behandeling vrij gunstig. De zijscheuten werden bij deze hoge kinetine concentratie ook vrij vroeg nä het uitplanten gevormd.

Opmerkelijk is verder, dat oorspronkelijk meer zijscheuten werden gevormd dan vegetatieve groeipunten gewoonlijk in deze knoppen werden gevonden.

Vermoedelijk worden door de kinetine nieuwe vegetatieve groeipunten aangelegd of krijgt men wellicht spruitvorming uit reeds vroeg uit groeiende spruitjes door wegvallen van de apicale dominantie. De gevormde scheutjes werden gemeten en overgeplant op verse media met diverse kinetine-, I.A.A.- en suikerconcentraties an wortelvorming te induceren. Helaas trad bij geen enkel explan-taat wortelvorming op (noch die bleven staan, noch die zijn overge plant) . Na verloop van tijd verdroogden alle spruiten en werden de meeste explantaten bruin (zie bijlage 8).

Callus trad in deze proef sporadisch op. Dit is niet zo verwonderlijk, aangezien de explantaten direkt in het licht werden geplaatst.

Callusvorming trad op bij behandeling 18 en 30. Beide behandelingen bevatten 10 mg/liter I.A.A. en verder respectievelijk 0,01 en

1,0 mg/liter kinetine. Behandeling 18 gaf bij 18,2% van de explantaten callusgroei; behandeling 30 9,5%. Het callus werd resp- gevormd gemiddeld na 115,5 en 122,5 dagen. Het callus zag er vrij donker en compact uit (bijlage 5, onderaan).

S a m e n v a t t i n g

In deze proef werden stengelstukjes met "doornen" op een bodem uit-geplant volgens Linsmaier en Skoog.

Hieraan werden diverse concentraties I.A.A. en/of kinetine toege voegd.

Uit de explantaten konden spruitjes worden gevormd, vooral als 10 mg/liter kinetine aan de bodem werd toegevoegd.

(10)

Door hieraan nog extra I.A.A. bij te mengen in concentraties van 0,001 of 1,0 mg/liter kon het percentage spruitvorming nog iets worden verbeterd.

In deze proef werd geen wortelvorming waargenomen. Globaal genomen gaven de hoge concentraties regulatoren

goede resultaten. Dit kan aan het xerophytische karakter van de snijgroenplant worden toegeschreven.

Met parafilm afdekken leek iets gunstiger te zijn, dan uitsluitend wattenproppen.

Bij de komende proeven zal vooral moeten worden' gezocht naar me thoden om wortelvorming te induceren. Ook het percentage scheut vorming lijkt voor verbetering vatbaar.

(11)

Bi jlage 1 SAMENSTELLING BODEM VOLGENS LINSMAIER EN SKOOG

(R.M. 1964) Per 10 liter gebruiksoplossing afwegen. Oplossing A

NH.NO.

_{4 3} 16.500 mg

KHO

3 19.000 mg CaCl^. 2

H

2

°

4.400 mg MgSO^. 7

H

2

°

3.700 mg

KM

2

PO

4 1.700 mg

H

3

BO

3 62 mg MNS0 .. 4 4

H

20 223 mg. ZnS04. 4 H2° 86 mg KJ 8,3 i Na2Mo04 _{1 •}2 H2° 2,5 r CuSO.. 4 5

V

0,25 CoCl2. 2

H

2

°

0,25 500 ml 500 ml 500 ml 500 ml Samen 2 liter Bewaren in koelkast in Pyrex-fles Oplossing B Glycine Nicotinezuur Thiamine HCL Pyridoxine HCL 50 mg 2r5 mg 2,5 mg 12,5 mg Bereiding 1 Zitev qebrwiks-oTgZossinQ

Oplossing A 200 ml

Vit. enz. Oplossing B 2 ml

Meso-inositol 100 mg

Caseîne-hydrolysaat 1.000 mg

Saccharose 25.000 mg

Fe Na Edta 5 ml

pH = 5,6

Agar (Difco Noble) 8.000 mg

Verdelen in porties 50 ml van 2,5 ml in kleine afsluitbare buisjes. Bewaren in diepvries Steriliseren 20 minuten op 1 atmosfeer overdruk.

(12)

GEMIDDELDE TEMPERATUUR IN °C PER DECADE

Maximum Minimum 9 uur 14 uur

3e decade mei 1974 24,9 18,7 19,8 Ie decade juni 1974 25,5 19,0 19,2 2e decade juni 1974 25,3 19,5 20,0 3e decade juni 1974 26,8 20,5 20,8 Ie decade juli 1974 28,6 22,1 23,2 2® decade juli 1974 27,5 21,6 22,2 3e decade juli 1974 27,8 21,4 22,6 27,5 Ie decade augustus 1974 27,9 21,4 22,0 26,5 2e decade augustus 1974 28,8 22,8 22,9 27,8 3e decade augustus 1974 29,1 22,6 23,2 27,7 Ie decade september 1974 24,6 21,0 23,9 23,5 2e decade september 1974 24,7 21,4 23,7 23,2 3e decade september 1974 23,7 20,9 22,3 22,3 Ie decade oktober 1974 23,9 20,6 22,9 22,3 2e decade oktober 1974 23,5 21,0 22,7 22,0 3e decade oktober 1974 26,8 23,6 25,7 25,4 I6 decade november 1974 23,5 20,6 20,9 22,7 2e decade november 1974 24,7 20,9 21,7 23,7 36 decade november 1974 23,9 20,8 22,7 22,2 Ie decade december 1974 23,4 20,2 22,3 21,0 2e decade december 1974 23,5 20,0 21,9 20,8 3e decade december 1974 23,6 20,4 22,3 22,0 Ie decade januari 1975 23,3 20,6 22,5 21,9

(13)

Bijlage 3 VERONTREINIGINGEN

Verontreinigd Waarvan_in % _Ti^d Aantal_da2en_

aantal ver- % veront- , . , aantal da- gemiddeld . .

. . . . . . s c h i m - b a c t e - , , , m i n i m a x i -ontreinigm- reinigin- , . gen:aantal aantal

da-,. . \ mei ne mum mum

gen/totaal gen explantatengen

1 4/20 20 100 - 38/4 9,5 5 14 2 1/24 4,2 100 - 34/1 34 34 34 3 6/23 26,1 83,3 16,7 140/6 23,2 6 110 4 4/24 16,7 100 - 76/4 19 19 19 5 _5/24 _20,8 ₁₀₀ - 75/5 15 15 15 6 5/23 21,7 100 - 75/5 15 5 69 7 4/19 21,1 100 - 102/4 25,5 5 69 8 1/23 4,3 100 - 7/1 7,0 7 7 9 3/23 13 100 - 45/3 15 15 15 10 5/23 21,7 80 20 66/5 13,2 8 15 11 2/23 8,7 100 - 18/2 9 9 9 12 0/23 0 - - - -13 3/19 15,8 100 - 33/3 11 5 14 14 0/23 0 - - - -15 2/23 8,7 100 - 16/2 8 8 8 16 3/23 13 * 66,7 33,3 24/3 8 8 8 17 0/23 0 - - - -18 0/23 O - - - - -19 1/20 5 100 - 14/1 14 14 14 20 0/23 0 - - - -21 1/22 4,5 100 - 36/1 36 36 36 22 4/23 17,4 100 - 32/4 8 8 8 23 0/24 0 - - - - - -24 1/25 4,0 100 - 35/1 35 35 35 25 4/23 17,4 75 25 126/4 31,5 5 93 26 1/24 4,2 - 100 8/1 8 8 8 27 2/24 8,3 100 - 16/2 8 8 8 28 5/23 21,7 - 100 65/5 12 12 12 29 6/22 27,3 33,3 66,7 72/6 12 12 12 30 3/24 12,5 - 100 39/3 13 13 13 31 2/23 8,7 50 50 46/2 23 !2 34 32 9/23 39,1 22,2 88,9 152/9 16,9 12 34 33 0/20 0 - - - -34 1/20 5,0 - 100 12/1. 12 12 12 35 10/20 50 - 100 120/10 12 12 12 36 4/19 21,1 - 100 48/4 12 12 12

(14)

VERONTREINIGINGEN

INVLOED + PARAFILM (met parafilm) en - PARAFILM (zónder parafilm)

Behandeling Aantal % Behandeling Aantal %

1 + P 2/10 20 18 + P 1/12 8,3 1 - P 2/10 20 18 - P 0/11 0 1 4/20 20 18 1/23 4,3 2 + P 1/12 8,3 19 + P 1/10 10 2 - P 0/12 0 19 - P 0/10 0 2 1/24 4,2 19 1/20 5 3 + P 3/12

15,0

20 + P 0/12 0 3 - P 3/11 27,3 20 - P 0/11 0 3 6/23 26,1 20 0/23 0 4 + P 4/12 33 21 + P 0/11 0 4 - P 0/12 0 21 - P 1/11 9,1 4 4/24 16,7 21 1/22 4,5 5 + P 3/12 25 22 + P 2/12 16,7 5 - P 2/12 16,7 22 - P 2/tt 18,2 5 5/24 20,8 22 4/23 17,4 6 + P 2/12 16,7 23 + P 0/12 0 6 - P 3/11 27,3 23 - P 0/12 0 6 5/23 21,7 23 0/24 0 7 + P 0/10 0 24 + P 1/13 7,7 7 - P 4/9 44,4 24 - P 0/12 0 7 4/19 21,1 24 1/25 4,0 8 + P 1/12 8,3 25 + P 2/12 ' 16,7 8 - P 0/11 'o 25 - P 2/11 18,2 8 1/23 4,3 25 4/23 17,4 9 + P 2/12 16,7 26 + P 1/12 8,3 9 - P 1/11 9,1 26 - p 0/12 0 9 3/23 13 26 1/24 4,2 10 + P 3/12 25 27 + P 0/12 0 10 - P 2/11 18,2 27 - P 2/12 16,7 10 5/23 21,7 27 2/24 8,3 11 + P 2/12 16,7 28 + P 1/12 8,3 11 - P 0/11 0 28 - P 4/11 36,4 11 2/23 8,7 28 5/23 21,7 12 + P 0/12 0 29 + p: . 3/11 27,3 12 - P 0/11 0 29 - P 3/11 27,3 12 0/23 0 29 6/22 27,3 13 + P 2/10 20 30 + p. _ 1/12 8,3 13 - P 1/9 11,1 30 - P.. 2/12 16,7 13 3/19 15,8 30 3/24 12,5 14 + P 0/12 0 31 + P 0/12 0 14 - P 0/11 0 31 - P 2/11 18,2 14 0/23 0 31 2/23 8,7 15 + P 1/12 8,3 32 + P 6/12 50 15 - P 1/U 9/1 32 - P 3/11 27,3 15 2/23 8,7 32 • 9/23 39,1 16 + P 0/12 0 33 + P 0/10 0 16 - P 3/11 27,3 33 - P 0/10 0 16 3/23 13 33 0/20 0 17 + P 0/12 0 34 + P 1/10 10 17 - P 0/11 0 34 - P 0/10 0 17 . 0/23 0 34 1/20 5 35 + P 4/10 40 + P 52/415 _52/415 12,5 35 - P 6/10 60 13 36 10/20 50 - P 51/393 13 _{36 + P} _2/10 ₂₀ Totaal 103/808 12,7 36 - P 2/9 22,2 36 4/19 21,1

(15)

Bijlage 4„

\*a <d 1 tH et

0) •• f-i ©1

r-1*0 •H -Ml * »

ITJ C M •HI «ri «—• O GO in CM in

•H 0) _P1 CN en ri in *3» m m a D» .H Cl ri W 0) <0 rd CM IO T3 -M 031 1 1 <0 _c1 1 1 'OI'O (3 1 Cl •ni fd m 0)1 •r| rH •H 4JI H m ri in rH ro co ri EHI <d •• N •HI _l+J \ \ N \ \ SS S 31 co ri O GO co m C rH Ml CN «-• in m m m id 0) <3 CM ri _CM _CM ri fi i< en -M 0)1 ₁ 1 1 1 1 1 1 1 O O O O ro 1 1 dP 1 « 1 1 1 O O ri in O O O O O O O O O O O O O O O O O O O O 0 0 0 O O O en ro ri 14-M 1 •4 rH H ro CM CM •HI 1 1 31 1 •• 1 1 V-llft 1 1 CM-H c CI 1 «1 N o) H 0)1 O O O O VO ri ro l*nl . I H I To •P (0 4J 1 V-I a> CM co va ro r- VO co O ri ro VO m in r- in 10 m O in \o O in in «-4 r- ri H ri ri l*nl . I H I To •H 4J -HI s s s S s \ \ s \ s \ \ s

—

s s N s S s \ s s s sss s \ S S S N ItQl-P 3 c 31 O O ri m O O O O O O O O O O O O O O O O O O O O O O O r-• O O in ri CO co 1 1 _{1 1 <d}c M id ut 04 <d cut 1 K W (01 c I 0) I en I (0 I 'Ü I CO c* en CM 00

CM

co m

IA

in vû Tp m u> m co co ^r co CM *<j» ro m _m 1 0) 1 1 CM m V0 in r^ in G0 O O CO 00 <7t in CM O CO in ro co in ro CT» vO ro m ro 1 0> 1 B 1 TT O m _<ûin 00 *i ri vo O G0 m o VO o <n ro CM VO m ro CM CM CN 1 <d 1 fd •H 1 ri ri ri ri ITD 1 s X _{1 1} f—1 1 o 1 1 1 <13 1 3 » CM «r m m m in m G0 O O CN 00 00 00 co 00 CN en 00 CO CN oo m CM CM CN CN CN <N \V 1 •H _a 1 ro m ri ri ri ri m ri VO t ro ri ri CM ri ri ri ri 1 Ç 1 S •H 1 Z w 1 3 1 K 1 1 1 c C _{1 1} 1 (3 <d <d 1 O 0> o ri m r»* O vo O m r- ro in ro CM r- ri in ri 0^ in CO H 1 1 1 ₁ _IT3 (3 <d *0 1 ₁_{CM O -*•} _{co G0} _{en in ri O O o> 00 ro CO ro r* <N o r- in} _{CO r- in CT* CM ro vo f-} _ri M 1 l-H T3 rH 1 ro CM CM m ri ri CM VO t*» ro ro in ro ro m VO ro ro ri CM ro ri ri ri ri 1 1 e iH (d Cl O l ia) 0) 4J ₁ _{IÜ *0} 0)1 _tj* « 1 »H 1 1*01 1 «d 1 eu l-nJ id 4J ₁ l*H 1 0 C t w IEHI 1 l»H 4J îo 1 O a\ O O O VO ro ro en IEHI 1 l»H <d 1 ri ri GO ri vo m r- VO m ri ro ro ro ri CN ro ri m in in in ^ ri ri *H ri ri ri ri 1 1 <d *• 1 S S S S m s s N \ s S S S \ S S s \ s s S s ss N \ S S S S S w 1 I4J •H 1 CM CT» CM ri \ CM CN t^- O O O en O 00 r- ro CN o r- O ri r- m ri ri co ro <Ti ro t 1 C c id 1 O r- m in *3* ^3» en VO VO ro CN O vo r- T m 00 CN co ro <T» CM O m ro CO CN Q 1 1 rd 0) <d ₁ <3* CM CM GO m CO CN ri ri ri ri CN ro ri ^i CM CM CM CM ri CM Z I i< 1 1 • t CP 4J 1 1 1 < 1 1 1 1 <#> 1 m 1 1 1 CM in en O 00 m O co r- co GO ri CO *3* VO r* ro ro

R- CM

VO m ro r* ro r»» > 1 1 rH 1 l-HI _{0)1 1} _4J<d ₁₁ _<0m CM in m m O ri o vo O 00 VO ro m O CM ri ri o vo in O VO ri C0 in CM ro CN ri m ro _{m m ri n CM m m ri} _{ri CM CM CM ro CM ro}

_CM

_{CM CM} CN CN «-» in VO ro 00 vo r-H ₁₁Ol-U _{M l-H} _«B 1 W 1 tm 3 I-PI (d 1 1 O _{1D (d •H fd}1 -H 1 »H

TH

_{1 ri CM}1 KD m r- O en co m CM o CO ri m vo ro ri o ro CM en m ri CTi

_CM

_{ri ri ri CM}

_CM

_{ri CM CM ri <N CM CM CM CM ri CM CM ri CM CM ri (N CM ri ri CM CM ri CM ri}o>

M CM

co vo ri CM VO o o\ e« _{1 l G}1 I4J 0) id

₀

_•u 1 ₁S S _{ri O en ri m îo m}S \ S \ \ \ N _VO\

_N

\ _{O ri co vo m m}S S s \ \ \

**_R*»**

S S S "S. _{in vû m O m VO}\ \ \

_O

\ _{in m ^ O O r- vo ro ro}W S S s S S s S e> 1 1 (0 u o 1 ri ri ri ri ri ri ri ri H 1 l< 0* 4-> 1 1 ₁ H ! w _{1 1} _tr> 1 1 ₁

O

IG G ₁ 1 (U «H » 1 IÄ «H

0

1 ri CM m ^3* in VO 00 0> O ri CM ro in vo r- co en o M CN ro <3* m KO 00 en o ri CM ro 1 d) d)

2

1 ri rH ri ri ri ri ri ri ri ri CM CN CN CM CM CM CM CM CM CM ro ro

D

ro ro im *ö 1 %

(16)

INVLOED MET ( +) en ZONDER ( -) PARAFILM

Behande1ings

No. Aantal % _No.Behandelings Aantal %

1 + P 0/8 0 19 + P 4/9 44,4 1 - P 1/8 12,5 19 - P 2/10 20 1 1/16 6,3 19 6/19 31,6 2 + P 8/11 72,7 20 + P 2/12 16,7 2 - P 2/12 16,7 20 - P 3/11 27,3 2 10/23 43,5 20 5/23 21,7 3 + P 6/9 66,7 21 + P 0/11 0 3 - P 3/8 37,5 21 - P 0/10 0 3 9/17 52,9 21 0/21 0 4 + P 5/8 62,5 22 + P 2/10 20 4 - P 6/12 50 22 - P 3/9 33,3 4 11/20 55 22 5/19 26,3 5 + P 1/9 11,1 23 + P 5/12 41,7 5 - P 2/10 20 23 - P 1/12 8,3 5 3/19 15,8 23 6/24 25 6 + P 3/10 30 24 + P 0/12 0 6 - P 3/8 37,5 24 - P 0/12 0 6 6/18 33,3 24 0/24 0 7 + P 2/10 20 25 + P 4/10 40 7 - P 1/5 20 25 - P 1/9 11,1 7 3/15 20 25 5/19 26,3 8 + P 5/11 45,5 26 + P 3/11 27,3 8 - P 2/11 18,2 26 - P 2/12 16,7 8 7/22 31,8 26 5/23 21,7 9 + P 3/10 30 27 + P 3/12 25 9 - P 3/10 30 27 - P 1/10 10 9 6/20 30 27 4/22 18,2 10 + P 2/9 22,2 28 + P 5/U 45,5 10 - P 1/9 11,1 28 - P 5/7 71,4 10 3/18 16,7 28 10/18 55,6 11 + P 0/10 0 29 + P 7/8 87,5 11 - P 0/11 0 29 - P 3/8 37,5 11 0/21 0 29 10/16 62,5 12 + P 0/12 0 30 + P 4/11 36,4 12 - P 1/11 9,1 30 - P 3/10 30 12 1/23 _h₃ 30 7/21 33,3 13 + P 2/8 25 31 + P 9/12 75 13 - P 1/8 12,5 31 - P 7/10 70 13 3/16 18,8 31 16/22 72,7 14 + P 3/12 25 32 + P 7/7 100 14 - P 3/11 27,3 32 - P 6/9 66,7 14 6/23 26,1 32 13/16 81,3 15 + P 4/11 36,4 33 + P 6/10 60 15 - P 1/10 IQ 33 - P 7/10 70 15 5/12 23,8 33 15/16 65 16 + P 2/12 16,7 34 + P 8/9 88,9 16 - P 3/8 37,5 34 - P 6/10 60 16 5/20 25 34 14/19 73,7 17 + P 4/12 25 35 + P 5/6 83,3 17 - P 3/11 27,3 35 - P 3/4 75 17 7/23 30,4 35 8/10 80 18 + P 2/11 18,2 36 + P 5/8 62,5 18 - P 3/11 27,3 36 - P 6/7 85,7 Iß , 5/22 22,7 36 11/15 73,3 + P 131/364 36,0 _• - P 98/344 28,5 Totaal 229/708 32,3

(17)

INVLOED + P (mét parafilm) en - P (zonder parafilm)

Behandelings- Totaal aan" Gemiddelde

No tal/mm m en. • L E N G T E V A N D E S P R U I T E N 31 + P 481/8 6,01 3l - p _196/3 _6,53 31 677/11 6,15 32 + P 328/6 5,47 32 - P 314/5 6,28 32 642/11 5,84 33 + P 367/6 6,12 33 - P 381/6 6,35 33 _748/12 _6,23 34 + P 469/7 7,09 34 - P 222/4 5,55 34 691/11 6,28 35 + p 104/2 5,20 35 — p _152/3 _5,06 35 256/5 5,12 36 + P 296/5 5,92 36 - P 220/4 5,50 36 516/9 5,73 + P 2045/34 6,01 - P 1485/25 5,94 Totaal 3530/59 5,98

(18)

»

c :z? ï? a> » .o .o -p •H c 00 00 © P» •H ß C C n -P •H •H • •H ft © e E < -P ra ß fH f4 • <D •H O O < C C M > > • •H a! -p +» M M > C •H •H © • •H ß rQ © • _© P< P. O «c î» ra ta G C h • _© 0) a> 60 <e 00 © © îtf) •p • _© 00 00 ri _cti •H M 00 «d cd 3 _{ß M} 4-> -p _{ß C r—4 rH} O cd © © CÖ cd 60 > rH O o -P «P cd fH fH h C C •p TJ © © © 0 cd c © •Ö P< p. a) cd © O ß ₀ O r-t O _{I 1}• I M N I • • + i a> ß «H _{I 1}• « p* M a _{1 1}• _{• 1} c © oo tic ce aJ-ö +> ßiH © cd O-P M C 0> a) P. a} e»D E-O •-O O O O O O ON O 00 O t— vo O ir\ O O O O cv ß ß 1 « © © e -p -O ß •H • • _•H

**? *<**

© «Ü -P M • f—1 • _© P. •< |H < C to • a] • _•H M M M C ^ M cd ß © :s> > cd > JQ & • O •ri 00 00 © © -ö t) ß ß G O © ß •H •H • •H h O © B E -P 00 rH M M U • O +> > © O o •< C •H ß > > • •H ?J "H © •—s -p -p M M ?J "H _{,o ß •H •H} © © © 0 3 :s» W 60 «Ö _{«d r-t © ß P< P<}00 M h ,0 -P © ß "H 03 to ß C ß "Ö •H rH © 0) © "Ö -P © « © 00 O -H © »Ö 00 00 cd cd h S ß ß cd cd "Ö TJ © © •H cd -p -p CW 00 M J3 ß c r-t rH © © cd cd *9 u o -p -p U M ß c © © cd a) P. p< cd cd e 00 ₁( • _i C0 _{I 1}• _• 1 r-t I • • • S? _{I 1}• ₁ m 1 9 • 1 a \ a> © oo oo a H TS 4» ßr4 © cd o -p h c O Cd P<aJ 60 ff O _«t O O O O O O 0V O 00 VO O tO c\ O O N'A O CvJ

(19)

Bijlage 5.

Z I J S C H E U T E N

Behande-lings No.

Aantal zij scheuten in % Gemiddelde aantal _{scheuten per explantaat} Behande-lings No. 1 2 3 4 5 6 met hoofdscheut 1 + 2 geen z ijscheuten 3 100, 1,0 4 66,7 33,3 1,3 5 t/m 27 geen zijscheuten 28 100 2,0 29 + 30 geen zijscheuten 31 40 40 20 2,2 32 100 1,0 33 33,3 33,3 33,3 3,0 34 33,3 66,7 1,7 35 100 2,0 36 50 50 1,5 V E R D R 0 0 G D E ZI J S C H E U T E N

Behande- Aantal zijscheuten in % lings No. Bere kening % Bere kening Aantal Gemid. dagen Minimum Maximum

scheuten per explan taat met hoofd scheut 3 1/1 100 138/1 138 138 138 4 3/3 100 385/3 128,3 112 154 28 1/1 20 111/1 111 111 111 31 1/5 20 114/1 114 114 114 meeste overgeplant 32 overgeplant 33 overgeplant -34 overgeplant 35 overgeplant 36 overgeplant C a l 1 u s v o r m i n g 1 t/m 17 geen callus 18 4/22 18,2 462/4 115,5 105 133 19 t/m 29 geen callus 30 2/21 245/2 __122i5_ 119 __126_ 31 t/m 36 geen callus Gemiddelde aantal

(20)

N° Verdroogde spruitvorminrj Aantal dagen totaal/aantal

yerdr .spr. gemiddelde minimum maxium in %

1 93/1 93 93 93 1/1 100 2 1157/9 128,6 74 180 9/10 90 3 1136/9 126,2 74 194 9/9 100 4 713/9 79,2 66 105 9/11 81,8 5 293/3 99 66 147 3/3 100 6 567/5 113,4 84 154 5/6 83,8 7 246/3 82 82 82 3/3 100 8 631/5 126,2 86 174 5/7 . 71,4 9 326/5 65,2 55 84 5/6 83,3 10 206/3 68,7 59 77 3/3 100 11 3/3 12 85/1 85 85 85 1/1 100 13 222/2 111 104 118 2/3 66,7 14 335/6 55,8 48 84 6/6 100 15 323/5 64,6 48 98 5/5 100 16 295/5 59 95 95 5/5 100 17 459/7 65,6 59 105 7/7 100 18 264/4 66 48 98 4/5 80 19 558/6 93 93 93 6/6 100 20 343/5 68,6 60 92 5/5 100 21 22 295/5 59 59 59 5/5 100 23 400/6 66,7 48 105 6/6 100 24 25 246/2 123 93 153 2/5 40 26 284/5 56,8 48 70 5/5 100 27 225/4 56,3 48 59 4/4 100 28 594/8 74,3 55 104 8/10 80 29 816/10 81,6 62 118 10/10 100 30 497/6 82,8 63 119 6/7 85,7 31 277/6 46,2 23 55 6/16 37,5 32 364/7 52 48 55 7/11 63,6 33 96/2 48 48 48 2/13 15,4 34 330/6 55 48 76 6/14 42,9 35 236/5 47,2 23 55 5/8 62,5 36 151/3 30,2 48 55 3/15 20 Totaal 13067/168 — _77,8 1 t/m 6 3963/36 = _110,1 7 t/m 12 1494/17 = _87,9 13 t/m 18 1898/29 = _65,4 19 t/m 24 1596/22 = _72,5 25 t/m 30 2662/35 = _76,1 31 t/m 36 .1454/29 = _50,1 1 - 7 - 13 - • 19 - 25 - 31 1642/20 = _82,1 2 8 14 -20 - 26 - 32 3114/37 = _84,2 3 9 15 -21 - 27 - 33 2106/25 = _84,2 4 - 10 - 16 22 - 28 - 34 2433/36 = _67,6 5 - 11 - 17 23 - 29 - 35 2208/31 = _71,2 6 - 12 - 18 24 - 30 - 36 1564/19 82,3

(21)

Bijlage 7.

BRUIN EXPLANTAAT

Behande- Rekening % Berekenini cimiddSld MÏnïm^~~Maxiüm~" lings No. Druin" bruxn- optreden van aantal dagen

kleuring kleuring bruinkleuring Aantal dagen

1 if'" î°° 1626/16 ""ïöï'ë" 82 , 3488/23 151,7 85 229 3 13/17 76,5 1846/13 142 85 201 5 WmI !? 1811/17 106'5 55 182 5 18/19 94,7 1976/18 109.,8 55 203 n 100 2091/18 116,7 66 203 l 15/15 100 1581/15 105,4 82 167 22/22 100 2530/22 115 86 195 JJ 20/20 100 2110/20 1 0 5 , 5 ' 55 203 10 18/18 100 1580/18 87.8 59 126 " 21/21 100 1904/21 90

,1

6 162 îo ^y,23 100 1996/23 86,8 49 162 « 16/16 100 1648/16 103 82 167 " 23/23 95,7 1817/22 82,6 48 133 1« On/nn 100 2123/21 101,1 48 126 16 20/20 100 1468/20 59 59 n9 17 23/23 100 2018/23 87.7 48 133 18 22/22 100 2008/22 91,3 59 133 19 19/19 100 2050/19 107,9 82 167 20 20/23 87 1927/20 96,4 60 169 21 19/21 90,5 1634/19 86 60 197 22 19/19 100 1510/19 79,5 48 119 23 24/24 100 1995/24 83,1 48 112 24 23/24 95,8 1708/23 74,23 48 119 25 20/20 100 2164/20 108,2 82 153 26 23/23 100 1979/23 86,0 48 105 27 22/22 100 1631/22 74,1 48 119 28 8/11 61,1 1361/11 123,7 69 167 29 7/16 43,8 609/7 87 62 118 30 15/21 71,4 1463/15 97,5 24 147 31 11/21 52,4 1221/11 111 48 139 32 2/14 14,3 180/2 90 83 97 33 6/20 30 612/6 102 62 154 34 5/19 26,3 454/5 90,8 23 136 35 4/10 40 430/4 107,5 83 132 36 2/15 13,3 152/2 76 62 90

Behande-" Berekening % bruin- ëerekening optreden Gemiddeld lings No. % bruinkleuring kleuring- _ van_bruinkleuring aarita]L_GLa;gen._

1 t/m 6 105/113 92,9 18838/105 122,3 7 t/m 12 119/119 100 11701/119 98,3 13 t/m 18 124/125 99,2 11082/124 . 89,4 19 t/m 24 124/130 95,4 10824/124 87,3 25 t/m 30 98/120 81,7 9207/98 93,9 31 t/m 16 30/99 30,3 3049/30 101,6 1 - 7 enz. 97/109 90,7 . 10290/97 106,1 2 - 8 e n z . 1 1 2 / 1 2 8 8 7 , 5 1 1 9 2 1 / 1 1 2 1 0 6 , 4 3 - 9 e n z . 1 0 1 / 1 2 1 8 3 , 5 9 9 5 6 / 1 0 1 9 8 , 6 4 -10 enz. 90/114 78,9 8184/90 90,9 5 -11 enz. 97/113 85,8 8932/97 92,1 6 -12 enz. 103/123 83,7 9418/103 91,4 Totaal 600/706 85,1 58701/600 97,8

(22)

1 2

!

S e 11 <1> 1-rH g» I c £ •-* •a ia (0 I +j I § ! j Cn I c a h ai CP +4 o a <u u ai+J O flt)i _{w u c} «Il I i—l w Hi w O a, w > 2 W 2 O 2 H »-5 § 2 00 CQ W S PQ e> H w 2 EH o H 2 iJ W W W W O @ _{g Lf) O}t3 2 N > U p, w m o Q IU3 Iro I

si

_{I in} Iro &>l ß! •H i •—11 aji'tf tJIro ci mi •C1 a> I XI iro ico CI <01 >! ÜHCM •H ico •PI ₍₀₁

Si

XIH <wlro rtll I I I a> I ta I o I k I (d ix! I ü I o I (Ö IW I I I I I I I cw CI •HI r-ll »—41 0)1 +JI U)l CI a) J oil s_{a) I}! •öl oi mi I on Cl) M C <U •H +J •P -H <D i-H C \ -H OT « a m <u • -p < -H • »H < • OH H S I O) t (0 Ü* rC Ö _{(D -«-I} PQ rH C M C N C M V O C N C N ^ V O ^ O ^ * ro v o v o ^ D O v û v û r - v o k û v o CM CM r - c o c o o c N C o r ^ o c o t n *

H H

^

H H

co m co O O O C O O O O C O O O o o o c o o o o o o o o ro co 'r- IT) ^ h in co > co ^ ^ o i n v û i n i n ^ i D t n i ^ O O O O O 4 *—I H H H tH *—I n CM H H *H «H rH *H CN CM tn m i D L O L O i n i n i n c N O C N C M C M C N C M C M C M t - ^ TH o O O o o G O O O O O O O O O a) <-t •P

&

₀₎

s

-p * 0) vH •H •» _{G o o o m o o o o o} rH *-4 CM H H H H H > > H H H X X H H H > W H H

> £

£

<51 .5» _"Xj t-i J» 8. a _m 4J § H

&

_•H 3 <D •U & G <D a •H S s •3 c 0> c •H rH <D 13 C (Ö £1 _a> m Bijlage 8 O i û O < î N > * lll £ N O O ï O O V O C O ^ O ^ O O l O O ï O i D i n r O H N O n m ^ c o H H H > > H H H X X M H H > H M H H > H >