Bepaling van natriumchloride, zwaveldioxide en glutaminezuur in de opgiet van verduurzaamde champignons m.b.v. de Auto-Analyzer

""'! f ' f ..

Afdeling Algmene Chemie RAPPORT 84.12

1984-01-13 Pr.nr. 505.5000

Onderwerp: Bepaling van natriumchloride, zwaveldioxide en glutaminezuur in de op-giet van verduurzaamde champignons, m.b.v. de Auto-Analyzer.

Verzendlijst: direkteur, direktie VKA, sektorhoofd~n, afdeling Algemene Chemie (6x), afdeling Normalisatie (Humme), Projektbeheer, projektleider, P. Halberstadt (Conex), sektormappen PK en PV.

Afdeling Algemene Chemie Datum: 1984-01-13

RAPPORT 84.12 Pr.nr. 505.5000

Projekt: Ont~~ikkeling en verbetering van onderzoekmethoden voor tuin-bouwprodukten.

Onderwerp: Bepaling van natriumchloride, zwaveldioxide en glutamine-zuur in de opgiet van verduurzaamde champignons, m.b.v. de auto-analyzer.

Bijlagen: 3.

Doel:

Nagaan van mogelijkheden om de bepaling van keukenzout, zwaveldioxide en glutaminezuur in de opgiet van verduurzaamde champignons uit te voeren m.b.v. een auto-analyzersysteem.

Samenvatting:

Voor het onderzoek werden een drietal voorschriften betreffende de be-paling van natriumchloride, L-glutaminezuur en zwaveldioxide m.b.v. een auto-analyzersysteem opgesteld en uitvoerig getest m.b.v. stan-daardmonsters.

Het onderzoek werd afgerond met een drietal vergelijkingsonderzoeken ~~aarvan de resultaten verkregen met de auto-analyzermethoden zijn ver-geleken met die van de referentiemethoden.

Conclusie

De controle zoals vermeld in de Verordening PGF 1981 voor verduurzaam-de champignons kan voor wat betreft de bepaling van keukenzout en mo-nonatriumglutaminaat in opgiet van verduurzaamde champignons simultaan, betrouwbaar en effici~nt uitgevoerd worden m.b.v. een auto-analyzersy-steem. Zwaveldioxide is in de opgiet m.b.v. een auto-analyzersysteem goed te bepalen, maar in het totale produkt is dit niet het geval.

Verantwoordelijk: drs N.G. van der Veen ~ Samensteller: R. Frankhuizen

)J

Medewerkers: P. Halberstadt (Conex), J.J.M. Driessen, R. Frankhuizen Statistische medewerkster: mw G.A. Werdmuller

Projektleider: drs N.G. van der Veen~

1. Inleiding

In het kader van Verordening PGF 1981 Verduurzaamde Groenten worden door de AID aangeboden monsters verduurzaamde champignons onderzocht op de gehalten aan keukenzout, mononatriumglutaminaat, z'~aveldioxide en de uiterlijke kwaliteitsaspekten.

Voor de toegestane toevoegingen aan verduurzaamde champignons gelden bepaalde maximum gehalten (2,1), welke in een verpakkingseenheid

aan-'~ezig mogen zijn. Aangezien bij iedere verpakkingseenheid tevens de champignons beoordeeld dienen te worden op uiterlijke k'~aliteitsaspek­ ten, waarbij oxidatie kan optreden van het aam~ezige zwaveldioxide, wordt de bepaling van keukenzout, mononatriumglutaminaat en zwavel-dioxide tot nu toe uitgevoerd in de opgiet [1].

Bij onderzoek naar het gehalte aan keukenzout werd een gering en voor mononatriumglutaminaat werd geen systematisch verschil aangetoond tus

-sen opgiet en champignons. Voor z'~aveldioxide werd echter een aanmer-kelijk concentratieverschil aangetoond tussen opgiet en champignons

[ 2] •

Hoewel de uitvoering van de methoden van onderzoek zoals genoemd in punt 2 geen problemen oplevert, is nagegaan of de bepalingen m.b.v.

een auto-analyzersysteern effici~nter kunnen geschieden.

2. Chemische onderzoekmethoden

Bij de controle worden de volgende methoden toegepast:

Keukenzout - methode AOAC 24008 bij gehalten tot 0,9% NaCl - methode NEN 3762 bij gehalten groter dan of

gelijk aan 0,9% NaCl.

~o~o~a~r!u~g!u~a~i~a~t~ - enzymatische methode volgens Boehringer

(methodenummer 1080, 385.24; 1980).

- methode ISO 5521, kwalitatief tot L, rog S02/kg -methode ISO 5522, kwantitatief.

2.1 Hax!m~m_g~h~l!_e~

- Keukenzout (NaCl) tot ten hoogste 1 gewichtsprocent van het netto

-ge,~icht.

- Mononatriumglutaminaat ten hoogste 0,25 gewichtsprocenten van het nettogewicht uitgedrukt in glutaminezuur.

- Zwaveldioxide en de zouten ervan ten hoogste 10 mg/kg nettogewicht uitgedrukt in mg zwaveldioxide.

2

-3. Vergelijkend onderzoek referentiemethoden- auto-analyzermethoden

3.1 Vergelijkend onderzoek naar de natriumchloridegehalten in 24

mon-sters champignonopgiet m.b.v. de NEN-methode en de

auto-analyzermetho-de.

NaCl in champignonopgiet januari 1984

Zout AA2 in % Zout NEN in % Verschil AA2 NEN

0,49 0,48 0,01 0,51 0,54 -0,03 0,51 0,50 0,01 0,51 0,50 0,01 0,52 0,49 0,03 0,52 0,50 0,02 0,52 0,52 0,00 0,53 0,52 0,01 0,50 0,51 -0,01 0,50 0,52 -0,02 0,50 0,51 -0,01 0,50 0,50 0,00 0,72 0 '71 0,01 0,70 0,69 0,01 0,83 0,82 0,01 0,85 0,83 0,02 0,63 0,63 0,00 0,64 0,63 0,01 : 0,74

o

,

74 0,00 0 '73 0,74 -0,01 . 0,78 0,78 0,00 0,79 0,77 0,02 0,73 0,73 0,00 0, 70 0,72 -0,02

x

0,62292 0,62000 0,00292 ~ 0,125Lf72 0,123535 0,014289

n

24 24 24 Conclusie:

Er is geen systematisch verschil aangetoond tussen beide methoden.

Het 95% betrom•lbaarheidsinterval van

v

is -0,003 tot +0 ,009.

v

is het gemiddelde van de verschillen tussen AA2 - NEN.

De resultaten zijn weergegeven in grafiek 1.

-- 3

-3.2 Vergelijkend onderzoek naar de gehalten aan glutaminezuur in 20

monsters champignonopgiet m.b.v. de enzymatische Boehringermethode en

de auto-analyzermethode.

Glutaminezuur in champignonopgiet januari 1984

AA2 % Enzymatisch % Verschil AA2/Enzymatisch

0,047 0,046 0,001 1,022 0,013 0,006 0,007 2,167 0,014 0,007 0,007 2,000 0,028 0,025 0,003 1,120 0,035 0,035 0,000 1,000 0,065 0,058 0,007 1,121 0,028 0,025 0,003 1,120 0,028 0,018 0,010 1,556 0,013 0,024 -0,011 0,542 0,021 0,018 0,003 1,167 0,064 0,058 0,006 1,103 0,039 0,032 0,007 1,219 0,044 0,039 0,005 1,128 0,042 0,034 0,008 1,235 0,039 0,030 0,009 1,300 0,010 0,003 0,007 3,333 0,042 0,033 0,009 1,273 0,020 0,015 0,005 1,333 0,032 0,028 0,004 1,143 0,029 0,022 0,007 1,318

-x

0,0327 0,0278 0,0049 1,3600

-'6

0,01561 0,01515 0,00459 0,57729

n

20 20 20 20 Conclusie:

Er is een systematisch verschil tussen beide methoden aangetoond.

Het verschil ligt met een betrouwbaarheid van 95% tussen +0,003 en

+0,007.

De resultaten zijn \o1eergegeven in grafiek 2.

4

-3.3 Vergelijkend onderzoek naar de totaal sulfietgehalten in 20 mon-sters champignonopgiet m.b.v de ISO-methode en de auto-analyzermethode.

Sulfiet in champignonopgiet januari 1984

AA2 mg/kg ISO mg/kg Verschil mg/kg AA2/ISO

1,7 2,8 -1,1 0,607 2,3 3,0 -0,7 0,767 0,1 0,2 -0,1 0,500 0,1 0,1 0,0 1,000 2,8 2,6 0,2 1,077 3,4 4,2 -0,8 0,810 4,5 5,0 -0,5 0,900 4,7 4,8 -0,1 0,979 0,3 0,4 -0,1 0,750 0,4 0,4 0,0 1,000 4,4 4,4 0,0 1,000 3,6 4,0 -0,4 0,900 24,0 26,4 -2,4 0,909 27,8 31,1 -3,3 0,894 11,4 11

,o

0 ,1• 1,036 12,3 10,0 2,3 1,230 14,3 15,9 -1,6 0,899 14,3 16,4 -2,1 0,872 0,3 0,3 0,0 1,000 1,2 1,6 -0,4 0, 750

x

6, 70 7,23 -0,54 0,8940 ~ 8,100 8,853 1,177 0,16575

n

20 20 20 20 Conclusie:

Volgens de tekentoets is er geen normaalverdeling (het verschil tussen AA2 en ISO is 3 maal positief tegenover 13 maal negatief),

De auto-analyzermethode geeft systematisch lagere waarden dan de ISO-methode.

De resultaten zijn weergegeven in grafiek 3.

-- 5

-4. Discussie

Hoelolel de bepaling van keukenzout. in opgiet van champignons goed

uit-gevoerd kan worden levert de controle enige praktische bezwaren op.

Door het meetbereik van de teststrips (methode AOAC 24008) komen in de

praktijk een groot aantal monsters in aanmerking voor heronderzoek, omdat de gehalten de norm van 1% benaderen. Dit heronderzoek wordt

uitgevoerd volgens NEN 3762.

Daar er geen systematisch verschil is aangetoond bij het vergelijkend

onderzoek (3.1) kan de methode m.b.v. een auto-analyzersysteem uitge-voerd worden (bijlage 1).

Hoewel bij het vergelijkend onderzoek naar de gehalten aan

L-glutami-nezuur (3.2) een gering systematisch verschil tussen beide methoden

werd aangetoond is vervanging van de enzymatische Boehringermethode

door de auto-analyzermethode (bijlage 2) acceptabel (het verschil ligt

met een betrouwbaarheid van 95% tussen +0,003% en +0,007%).

Tot slot werd bij vergelijkend onderzoek naar de gehalten aan

zwavel-dioxide een systematisch verschil tussen beide methoden aangetoond,

terwijl de tekentoets een niet-normale verdeling opleverde.

Het een en ander is waarschijnlijk veroorzaakt doordat in alle

geval-len verpakkingseenheden werden onderzocht lolelke enige tijd voor

injek-tie in het auto-analyzersysteem open gemaakt waren.

Vast is komen te staan dat het gehalte aan zwaveldioxide - met name in

monsters lolaar veel "vrij" zwaveldioxide in aanwezig is - in geopende

verpakkingseenheden kan ontwijken of door oxidatie vrij snel kan terug

lopen (10 tot 70% in ca. 3 uur). De tijd tussen het open maken van

verpakkingseenheden en injektie dient derhalve niet langer dan 30 min

te zijn (bijlage 3).

Bij onderzoek naar de verdeling van zwaveldioxide over de opgiet en de

champignons werden concentratieverschillen aangetoond [2] .

Nagegaan is of de bepaling van zwaveldioxide in het gehele produkt

m.b.v. een auto-analyzersysteem uitgevoerd kan worden. Doordat

ener-zijds door verdunning de concentratie aan zwaveldioxide in de oplos-sing van veel monsters erg laag wordt

(<

0,2 mg/kg) en anderzijds door

de intensieve bewerking van mixen zwaveldioxide ontwijkt of oxideert

is het niet mogelijk zwaveldioxide in het gehele produkt m.b.v. een

auto-analyzersysteem te bepalen.

-- 6

-5. Conclusie

De controle zoals vermeld in de Verordening PGF 1981 voor verduurzaam

-de champignons op -de gehalte aan keukenzout en mononatriumglutaminaat

kan betrouwbaar en effici~nt uitgevoerd worden m.b.v. een

auto-analy-zersysteem. Extra voordeel hierbij is dat beide bepalingen simultaan

uitgevoerd kunnen worden.

De bepaling van het gehalte aan zwaveldioxide in de opgiet m.b.v. een

auto-analyzersysteem is goed mogelijk in tegenstelling tot de bepaling

van Z\mveldioxide in het gehele produkt.

Literatuur

1. H.H.t•L van de Horp: RIKILT rapport 83.60.

Onderzoek van verduurzaamde champignons op basis van Verordening

PGF 1981 Verduurzaamde Groenten, t .b.v. het evaluatiegesprek tussen

AID, PGF, Conex en RIKILT.

2. J,J.M, Driessen: RIKILT rapport 84.5

Onderzoek naar het voorkomen van concentratieverschillen tussen op

-giet en champignons voor wat betreft zwaveldioxide, keukenzout en

mononatriumglutaminaat bij monsters verduurzaamde champignons.

Na Cl

IN

CHAMPIGNONOPGIET JAN

1984 _{GRAFIEK 1.}

***

LINEAR

REGRESSION

***

***

Y==AtB*X

***

ZOUT

AA2

IN

ï. >:,1

VARIABLES:

9.20

_X=

_{ZOUT NEN IN}

_ï.

Y==

ZOUT AA2

IN

ï.

a.so

*

8.40

*

'

•

a.oo

*

t

7.60

t

t

*

7.20

* '

*

I

*

6.80

* .

t

6.00 N anal~sed: 24 H ~issiM: 0 KEAN X AN[t Y: .62 ,622917 5.60 SHI, DEV,: .1~3535 .125412

i • REGRESSION COEFFICIENTS: ST~. ERRORS: 1-VALUES: 5.20

*

$1

*

*

t A -,00273575 & 1.00912 .0245832 ,0155288 -.176173 41.0491 tffit

*

I RES, ST .ERR,: .0145644 CORR, COEFF: ,993535 ~. f.: 22 4180 4.40

+--

-

----t

-

---t--

-

--

--+---

-t---t---t---t---t---t----

---

t--

---t-

-

-

----+

4.40 5.20 6.00 6.80 7160 8140 .. 9120

ZOUT NEN IN

%

x

.1

NaCl IN CHAMPIGNONOPGIET JAN

198

4

AA2

ï. :-:. 01 9.00 8.25 7.50 6.00 4.50 3.75 3.00 2.25

GLUTAMINEZUUR IN

CHAMPIGNONOPGIET JAN

1984

/

***

LINEAR

REGRESSION

***

***

Y

=

A+B*X

***

VARIABLES:

X=

ENZYMATISC

H

ï.

Y

=

AA2

ï.

l

*

*

~

*

't

**

*

l

*

*

N a r.a 1 ';lsed: N n. i ss i r,g: MEAN x AN[t S T[t, DEV,: y: 20 0 '0278 . .03265 .0151539

GRAFIEK 2.

REGRESSJON COEFFICIENTSl ST 1"1, ERI\ORS: T -VI'\LUES:

A ,00526797 1.50 B .98496~ RES. ST.ERR.: ,00471147 CORR. COEff l .955902

*

~.f.: 18 0.75 .002~4~39 .0"11~27 2.34613 13.0091 0 •00 _-0.

t---t---t---t---

_{75 0.75}

-

_2.25

+

---

----t---

_3.75

t---t---+----

_5.25

-

-

-

t

---+---t--

_6.75

·

---t

_8.25

ENZYMATISCH

ï.

x

.01

GLUTAMINEZUUR

IN CHAMPIGNONOPGIET

JAN 1984

S

ULFIET I

N

CHAMP

I

GNONOP

G

I

E

T JAN 1984

GRAFIEK

3.

AA2 MG

/

KG

44.00 40.00 36.00 32.00 28.00 24.00 20.00 16.00 12.00

a.oo

4.00

o.oo

***

LIN

E

AR RE

G

RE

SS

ION

***

***

Y

=

A+B*

X

***

V

A

RI

A

BLES:

X=

I

S

O MG

/K

G

Y=

AA2 M

G/

KG

*

*

N anal~sed: 20 11 n.is~1ns: 0 HEAN i AND Y: 7.23 STL•. [oi':V,: o.o:iJO:>

REGRESSIOII COEFFICIEIITS:

A ,117575 B .909741 f.:ES. ST.ERR,: ,888001 CORR. COEFF: .994291 [o. F. : 18 6.695 8. 100 I 'I

STro, ERf.:ORS: T-VALU[S: .2~9051 .453869

.0~30115 39.5341

-4•00 _-4

·~---+---

_,00

~-

-

-

_4.

t-

₀

-

₀

----

-

t-

-

--

---

₁₂

t

_.0

-

----

₀

--t-

-

-

-

--

_20.00

-t-

-

-

-

-

--

+---

_28.

-+-

₀

-

₀

----

-+---

-

---t----

_36.00

-

--t

-

---t

_{. 44.00}

ISO MGn\

G

SULFIET IN CHAMPIGNONOPGIET JAN 1984

Bijlage 1 bij rapport 84.12 d.d. 1984-01-13

De bepaling van natriumchloride in opgiet van verduurzaamde champig-nons m.b.v. een auto-analyzer II systeem.

1. Principe

Chloride reageert met kwik(II)thiocyanaat onder vorming van een onge-dissocieerd kwik(II)thiocyanatachloride; een aan het chloride

equiva-lente hoeveelheid thiocyanaat komt vrij.

Door toevoeging van ijzer(III) ontstaat het rood gekleurde ijzer(III) thiocyanaat.

De reaktie verloopt als volgt:

Hg(SCN) 2

+

2CC- > _HgC12

+

2(SCN)-3(SCN)-

+

Fe3

+

---+

_{Fe(SCN) 3}

De extinctie van het gevormde complex (Fe(SCN)3) \~ordt gemeten bij 480

nm in een doorstroomcuvet met een weglengte van 15 mm en is evenredig

met de oorspronkelijke chloride concentratie.

2. Monstervoorbereiding

Indien blijkt dat de monsteroplossing deeltjes bevat \~elke kunnen

lei-den tot verstopping van het systeem dient een filtratie (vouwfilter b.v. S en S 595 1/2

0

150 mm) uitgevoerd te worden.

3. Reagentia

Alle reagentia dienen van p.a. 'kwaliteit te zijn.

Gebruik water dat 2 maal gedestilleerd is of water van overeenkomstige

kwaliteit (b.v. millipore).

3.1 !'"!k.E_h,!o~y!!_n!!a.E_ (voorraad oplossing). Kwikthiocyanaat [Hg(SCN) 2 ] 4,17 g

Methanol 1000 rul.

Bereiding:

Los 4,17 g kwikthiocyanaat op in 500 ml methanol in een ~~n liter

maatkolf. Vul aan met methanol, meng en filtreer door een matig snel

filtrerend filter.

3.2 .!_J!_e.!:n.!_tEa.!t.l. ~O.l.2!· IJzernitraat _{[Fe(N03 )}3.9H20] Salpeterzuur (HN03) geconcentreerd Bereiding: 202 g 31,5 ml.

Weeg 202 g ijzernitraat af in een ~ên liter maatkolf en voeg ca. 500 ml

water toe. Voeg 31,5 ml geconcentreerd salpeterzuur toe en schud

tot-dat alle ijzernitraat is opgelost. Vul aan met water. Filtreer zonodig.

Bewaar de oplossing in een goed gesloten bruine fles.

3.3 Chl2_r.!_d~ ~l~u2: 2:e.!g~n2_. Kwikthiocyanaat (voorraadoplossing) IJzernitraat, 20,2% 150 Brij-35, 30% oplossing Bereiding: lSO ml lSO ml 0,5 ml.

Breng 150 ml kwikthiocyanaat (3.1) over in een êén liter maatkolf.

Voeg hierbij 150 ml ijzernitraat (3.2) en 0,5 ml Brij-35, 30%

oplos-sing en meng. Vul aan met water en meng nogmaals.

3.4 Salge.!_e.!:z~u.!:,_O.l.21 !i_· Salpeterzuur (HN03) geconcentreerd Brij-35, 30% oplossing Bereiding: 1S,8 ml 1,0 ml.

Breng ca. SOO ml gedestilleerd water over in een êên liter maatkolf.

Voeg hierbij 1S,8 ml geconcentreerd salpeterzuur en meng. Voeg 1,0 ml

Brij-3S, 30% oplossing toe, vul aan met water en meng nogmaals.

4. Apparatuur

Analyse-automaat zoals b.v. een Auto-Analyzer II Systeem (Technicon)

bestaande uit:

a. een monsternemer,

b. een pomp,

c. een menggedeelte (analytica! cartridge),

d. een colorimeter,

e. registratie-apparatuur (recorder),

f . microcomputer voor de sturing van het systeem en de berekeningen

van de analysegegevens.

5. Standaarden

5 .1 ~S.!_o~k~ ~t~nia~ri .!_OQ .~/.!.·

Natriumchloride (NaCl), p.a. Bereiding:

10.000 g.

Droog natriumchloride (p.a.) gedurende 1 uur bij 300°C. Los 10.000 g gedroogde natriumchloride op in ca. 80 ml water. Vul aan tot 100 ml en meng. 5.2 Werkstandaarden

_----

_-

_--

_-

. HL "Stock" standaard mg/1 2 2.000 4 4.000 6 6.000 8 8.000 10 10.000 12 12.000 14 14.000 Bereiding:

Pipetteer de aangegeven hoeveelheden stockoplossing (5.1) in maatkol-ven van 100 rol. Vul aan met water en meng.

6. Opmerkingen

6.1 De colorimeter moet in de "Damp 1" stand staan.

6.2 Omdat de ijklijn niet lineair* is l~ordt m.b.v. de AAII computer d.m.v. quadratische curve fitting de best bijpassende regressie coëf

-ficiënten van de ijklijn berekend tzie ijklijn 1).

6.3 Voordat het systeem uitgezet wordt moet er minstens gedurende één uur gespoeld worden met gedestilleerd water.

6.4 Het effluent van de colorimeter wordt opgevangen in een aparte fles en geleegd in een speciaal daarvoor bestemde opslageenheid. Met behulp van thiocetamide lWrdt het kwikchloride omgezet in h1iksulfide. Na filtratie l~ordt het residu verzameld en afgevoerd.

..

Literatuur

1. Zali, O.M., Fisher, D., Garner, M.O.: Anal. Chem. 28 (1956) 1665.

2. Teehoicon industrial method no. 229-72 A/B.

Sodiumchloride in meat extracts.

3. Methode NEN 3104 Cl-.4. Fotometrische bepaling van chloride.

"""": ~ 0 H <I; <I; :::!:: ::_) :/)

î

96.00 88.00 80.00 n~oo 64100 56.00 48.00 40.00 32.00 24.00 i.~ .. ( .j 8,(•0 (l, 00 I

I

I

*

***

LEAST

***

*

*

I

SQUARE FIT

Y=A*X~B

GEOMETRIC

*

I I

*

VARIA~LESI l • l T •T INPUT DATA I 'ub1. 1 Ob!it 1 X• • 2 IUblt 1 Oblt 2 X•

..

\U b i t 1 Oblo J X• .6 IUb'l, obs. X• .a subs. obs. X• 1 subs. Oblt X• I, 2 subt.. obs. X• I •• H ~nllvs•d 1 H ••lstni 0 K(AH OF x AHO Yl .a

SlO OEVIAI IOHS : .4320<9

REGRESSION CO€fF!CIEHISI A • 74.9ll6 8 • • J~l:t8l IABLE OF ~ES!OUALSI x y .2 21.~ • • ]8. 1 .6 ~2.8 .8 6<. 7 1 75.~ 1. 2 a• .1 I,. 9] SUK Of ERRORS-2 20.7917 EXPL, PARI Of S.S,: .9901] 61. 5~71 25.600] TICALl 22.3527 37.634 51.0<19 bJ.J62 7< .9316 85.936~ 96.49~3 IJKLIJN 1.

***

***

Y• 21.~ T• ]8,7 Y• 52.8 T• , •• 7 Y• 75,5 Y• a•.7 Y• YJ ( ( ! ) -.85274<4 1.0660. 1.7590~ l,J3H7 .56839< • 1. :!36~4 -1.49~:!~

+

.

~---+---~+---+---t---t---t---t---t---+---t---+---t

o.oo !J,40 o.ao 1.20 1.60 2.oo 2.4o

-~,..~

%

NATRIUH CHLORIDE }(

Flow-schema voor de natrium chloride bepaling in verduurzaamde champignons.

SODIUM CHLORIDE IN PRESERVATED MUSHROOMS

RANGE: 0.2

% -

1.4% SAMPLER IV

50/HR

6:1

To Waste To Sampler IV QGRN/GRN (2.00) WATER

Wash Receptacle .._ .... : - -"""(· . 20 Turns 157·0248 20 Turns To'Waste. 5 Turns UPPER 177·8005-01170-0103 3" DIAL YZER LOWER 177·8006·01

•••

YELlVEL (1.20) H'20 + 1 mi BRIJ-35 8LK/8LK (0.32) AIR

GRY/GRY (1.00) CO LOR REAGENT ... To Waste ... - - - < Q YELlVEL (1.20) FROM F/C

COLORIMETER 480 nm 15 mm F/C x 1.5 mnf'ID 199·8018-01

*

.015 POL YETHYLENE •• SILICONE ••• .030 POL YETHYLENE

I

I !

I

Bijlage 2 bij rapport 84.12 d.d. 1984-01-13

De bepaling van glutaminezuur in opgiet van verduurzaamde champignons m.b.v. een auto-analyzer II systeem.

1. Principe

Onder invloed van het specifieke enzym 1-glutamine decarboxylase wordt de carboxylgroep van het aminozuur gesplitst en omgezet tot koolstof-dioxide

(co

_{2 ).}

De decarboxylatie verloopt k\-lantitatief onder toevoeging van pyridoxal-fosfaat '"elke de akti vi te i t van de enzymoplossing verhoogt.

Het gevormde

co

_{2 wordt} via een gasdialysemembraan opgenomen in een ge-bufferde phenolphtaleine-oplossing.

De afname van absorptie van de phenolphtaleine-oplossing wordt bij 550

nm gemeten en is evenredig met de gevormde hoeveelheid

co

₂ en met de

aanwezige hoeveelheid glutaminezuur.

Aan het systeem is een verdunningstrap toegevoegd waarin het monster behandeld wordt met 0,1 N zoutzuur om de oplossingen

co

_{2 vrij te maken.}

2. Monstervoorbereiding

Indien blijkt dat de monsteroplossing deeltjes bevat welke kunnen

lei-den tot verstopping van het systeem dient een filtratie (vouwfilter b.v. S en S 595 1/2

0

150 mm) uitgevoerd te worden.

3. Reagentia

Alle reagentia dienen van p.a. kwaliteit te zijn.

Gebruik \o1ater dat 2 maal gedestilleerd is of water van overeenkomstige

kwaliteit (b.v. millipore). 3.1 ~o~t~u~r.l.Q,,l!!· Zoutzuur (HCl) geconcentreerd (37%) 8,5 ml Natriumchloride (NaCl) 50 g Brij-35, 30% oplossing 0,5 ml. Bereiding:

Voeg 8,5 ml geconcentreerd zoutzuur en 50 g natriumchloride toe aan

800 ml water. Los op en vul aan tot 1 1. Voeg 0,5 ml Brij-35 toe en meng.

3.2 !ali~mii~a!eEs!o!f~s!a~t~ l~· Kaliumdiwaterstoffosfaat (KH 2Po4)

Bereiding:

136,0 g.

Los 136 g kaliumdiwaterstoffosfaat op in 800 ml water. Vul aan tot 1 1

en meng.

3.3 ii:,K~l_!u~w~t!_r~t~f!o~f~a!,_1_I-t..:_ di-Kaliumwaterstoffosfaat (K2HP04) Bereiding:

174 g.

Los 174 g di-kaliumwaterstoffosfaat op in 800 ml ~Y'ater. Vul aan tot 1

1 en meng. 3.4 !_o~f~a!b~f!eE,_P~ l,~. Kaliumdiwaterstoffosfaat, 1 M di-kaliumwaterstoffosfaat, 1 H Bereiding: 926 ml 74 ml.

Voeg 926 H kaliumdiwaterstoffosfaat (3 .2) en 74 ml

di-kaliumwaterstof-fosfaat (3.3) bij elkaar en meng.

3.5 !YEiio~a.!,l-!o~f~a!·

Pyridoxal 5-fosfaat, (codecarboxylase,

c

_8H10N06P)

Bereiding:

0,250 g.

Los 0,250 g pyridoxal 5-fosfaat op in 800 ml water. Vul aan tot 1 1 en

meng. 3.6 !n~y!!!_o_p_l~s~iE_g~ L-glutaminedecarboxylase 100 mg pyridoxal 5-fosfaatoplossing 8 ml Antifaam B 1 ml Fosfaatbuffer, pH 5,2 200 ml Brij-35, 30% oplossing 0,1 ml. Bereiding:

Heeg 100 mg L-glutaminedecarboxylase af in een bekerglas van 100 ml.

Voeg 8 ml pyridoxal 5-fosfaatoplossing en 1 ml antifaam B toe. Roer

het geheel m.b.v. een magnetische roerder totdat het enzym volledig is

gemengd.

Verwijder de roervlo, voeg 20 ml fosfaatbuffer toe (3.4) en mix het

geheel gedurende 3 min m.b.v. een ~~aring Blender mixer.

Breng de oplossing over in een maatkolf van 200 ml. Breng opnieuw 20

ml fosfaatbuffer in het bekerglas en mix opnieuw enige tijd.

Herhaal bovengenoemde handeling totdat het bekerglas geheel schoon is. Voeg 0,1 ml Brij-35 toe, vul aan tot 200 ml en meng.

De oplossing is 24 uur houdbaar en is voldoende voor ca. 4 uur.

3. 7 !!a_!r_!_u~b_!c~rÈ_oE_a~t..!..

l!:!

·

Natriumbicarbonaat (NaHC03 ) Bereiding:

Los 84 g natriumbicarbonaat op in 800 ml \'later. Vul aan tot 1 1 en meng.

3.8 !!a_!r_!u~c~rÈ_OE_a~t..!..

l !:!

·

Natriumcarbonaat (Na 2co3) Bereiding:

106 g.

Los 106 g natriumcarbonaat op in 800 ml \'later. Vul aan tot 1 1 en meng.

3.9 Carbonaat-bicarbonaatbuffer. Natriumbicarbonaat, 1 M Natriumcarbonaat, 1 M Bereiding: 100 ml 50 ml.

Meng 100 ml 1 M natriumbicarbonaat (3.7) met 50 ml 1 M natriumcarbo-baat (3 .8). 3.10 !h~~l_Eh_!a_!e_!n~,_1_!. Phenolphtaleine Methanol (CH30H) Bereiding: 1,0 g 100 ml.

Los 1,0 g phenolphtaleine op in 100 ml methanol.

3.11 !h~n~l_Eh_!a_!e_!n~b~f_!.e.!.• Carbonaat- bicarbonaatbuffer Phenolphtaleine, 1% Brij-35, 30% oplossing 8412.13 1,0 ml 0,95 ml 0,5 ml.

Bereiding:

Pipetteer 1,0 ml carbonaat-bicarbonaatbuffer (3.9) en 0,95 ml 1%

phenolphtaleine-oplossing (3.10) in een maatkolf van 1 1.

Verdun tot 1 1 met water, voeg 0,5 ml Brij-35, 30% oplossing toe en

meng. Bewaar de oplossing in een goed gesloten bruin glazen fles.

4. Apparatuur

Analyse-automaat zoals b.v. een Auto-Analyzer II Systeem (Technicon)

bestaande uit:

a. een monsternemer, b. een pomp,

c. een menggedeelte (analytica! cartridge),

d. een colorimeter,

e. registratie-apparatuur (recorder),

f. microcomputer voor de sturing van het systeem en de berekeningen

van de analysegegevens. 5. Standaarden 5.1 ~S.!_o~k.::_ 2_t~n;!a~r;!,_1!· L-glutaminezuur [HOOC.CHNH2.(CH2)2COOH] Natriumhydroxide, 50% (NaOH). Zoutzuur, geconcentreerd (HCl). Bereiding: 5.000 g.

Weeg 5.000 g L-glutaminezuur af in een bekerglas van 500 ml. Voeg 400

ml water toe en breng de pH op 5,5 m.b.v. 50% natriumhydroxide. Los

het glutaminezuur op m.b.v. een magneetroerder em breng de pH m.b.v.

geconcentreerd zoutzuur terug op pH 5,0. Breng de oplossing

kwantita-tief over in een 500 ml maatkolf. Vul aan tot 500 ml en meng.

Bewaar de oplossing in de koelkast. Haak iedere 2 weken een verse

op-lossing.

5.2 _!ie_!k2_t~n;!_a~r;!_

Q.,..!_%..!.

Pipetteer 10 ml "Stock" standaard in een maatkolf van 100 ml. Vul aan

met water en meng.

6. Opmerkingen

6.1 De methode is lineair (zie ijklijn 2).

6.2 De colorimeter moet in de "Damp 1" stand staan en de versterking op ca. 75 bij 0,1% oplossing op volle schaal.

6.3 Recorderpapiersnelheid is 2"/min.

6.4 Na het be~indigen van de werkzaamheden dient het systeem gedurende 10 min met 1 N natriumhydroxide gespoeld te worden en vervolgens gedu-rende minimaal 30 min met water.

Literatuur

1. Teehoicon industrial method no. 210-72A: Honosodiumglutamate in foodproducts.

2. Seidman, Murry and Blisk. J , Agr. Food Chem. 5 (1957) 448.

SCHAALDELEN

xlOO

i

2.75 2.50 2.25 2.00 1.75 1.50 1.25 1.00 0.75 0.50

t

0.25

o.oo

GLUTAMINEZUUr-:

***

LINEAR REGRESSION THROUGH ORIGIN

***

***

i

VARlA~LES:

I• l GLUTAMINEZUUR

y.. SCH~~LI•[L[N I NI' UT I•~ lA: su~s. IOI•S. I I I I I _' I I 3 I I

•

I I I I b N ar,~) Y"E'Ij: 11 bJ SS) 11~: M(AN x MW y: Sl[t, (t[V,! ~: Sl. ERR. ~: T-VALUr: kES. Sl.HR.: x .01 .o~ .~. .o. .o~ , J 6 0 -~~JI.-667 , C":.t ofi98C•7 :!:!7('.0S 16.4::!:' \;\(L~J~ ~. ' " 131

TA~L[ Of RESI~UALS:

x y . 0) :'3 . 02 ' "~. t· , O< 67,3 • 06 13< , 08 Ull.; .1 :':.tO SUM ERR.-~: · 29.8 txrL. rARl: .r9ro79

***

* .

n 43.~ 8"'-3 IJ• I 81 • 7 230 ll6.~P3 e.o.,~.:-. '(CAL~ :-::. 7{\('~. "~. ~(109 90.~018 n•. ~o3 1 P J. f.(\4 :~:. ~0~·

IJKLIJN

2.

UUGHl I (<11 . :'f'~5·'(l -J • e'='(IC> -:LS~IBJ .,.~~:":"1 • (IC(':'~\'\ ':!. \'f~·4f -0.25 o~öö---t---ö~2ö---t---ö~4ö---t---ö~6o---t---ö~sö---t---ï~öö---+---:--Ï~20 --~,..._ ï.

GLUTAMINEZUUr.:

:-~

,

1

GLUTAMINEZUUR

Flow-schema voor ~~ bepaling van L-Glutamine zuur iL ;erduurzaamde champignons

Wast~

L-Glutamic Acid in preservated mushrooms

range: 0 - 1000 mg/1 ~ pl!B !l.JH'ï _13. OQ

1

.

AIR

40 Turn~ ~ 90-005 "i· i 0 5 Turns

BtK/BLK

(

0.32) A

l

R

. 170-0103.01

Upper 177-S071 OREO/REO (O.SO) OECARBOXYLASE ..

6" DIAL't'ZER~ Lower 177·BOOS GAS OI AL VSIS

MEMBRANE

157-9129 116-0489-01 orn/ornÇO. 4-~ESAMPLE · ·

,

.

. . .

GRY /GRY. (1.0.Q.BUFFEP.~D

P.HENOLPHTHALEIN A2 SAMPLER. IV 25 /HR .6:1 Waste· Waste

)

~B~L~Kro~LK~(0~~~2l~A~I~R---~~~

_{' , K4} ToF/C

---~·---d

1

Pump . -Tube COLORIMETER 550 nm ..

50

mm F/C x 1,~:. mm 10 Waste

-E

Q alHT /WHT.(b,6:q)FROM F/C I

To

•

aRNiÇRN(?OOlPist.

Water

Sampler IV

wash

receptacle

co2

ABSORBÉR

Bijlage 3 bij rapport 84.12 d.d. 1984-01-13

De bepaling van totaal sulfiet in opgiet van verduurzaamde champignons

m.b.v. een auto-analyzer 11 systeem.

1. Principe

Het monster wordt aangezuurd met verdund zwavelzuur en verwarmd tot

95°C om gebonden zwaveldioxide

(so

_{2 ) vrij te maken. Deze procedure}

wordt ook gebruikt bij de wettelijke methode voor de bepaling van

sul-fietdioxide in voedingsmiddelen.

Het vrijgemaakte zwaveldioxide diffundeert door een dialyse membraan

en reageert met formaldehyde en p-rosaniline tot

p-rosaniline-methyl-sulfonzuur. Het gevormde gekleurde complex wordt gemeten bij 560 nm in

een doorstroomcuvet met een \\'eglengte van 50 nm en is evenredig met de

oorspronkelijke concentratie aan totaal zwaveldioxide.

Voor de bepaling van vrij zwaveldioxide hoeft alleen het

ven\'armings-bad afgekoppeld of uitgezet te worden.

2. Monstervoorbereiding

Indien blijkt dat de monsteroplossing deeltjes bevat welke kunnen

lei-den tot verstopping van het systeem dient een filtratie (vouwfilter

b.v. S en S 595 1/2

0

150 mm) uitgevoerd te worden.

3. Reagentia

Alle reagentia dienen van p.a. kwaliteit te zijn.

Gebruik water dat 2 maal gedestilleerd is of water van overeenkomstige

kwaliteit (b.v. millipore). 3.1 ~\o~~_v.!:_l,!u~r.J.. .!_ !:!_· Zwavelzuur _{(H 2}

so

_{4 )} geconcentreerd (s.g.1.84) N .\LA. Bereiding: 28 rol 1 ml.

Voeg voorzichtig 28 ml geconcentreerd Z\o~avelzuur toe aan ca. 500 ml

water. Koel af, voeg 1 rol N.W.A. toe, vul aan tot 1000 rol met water en

meng.

.

.

' 3.2 ~W~V!:,l~u~r..l.. .Q.,1,6_N~ Zwavelzuur (H₂

so

_{4 )} geconcentreerd (s.g.1.84) N.W.A. Bereiding: 10 ml 1 ml.

Voeg voorzichtig 10 ml geconcentreerd zwavelzuur toe aan ca. 200 ml

water. Koel af. Voeg 1 ml N.H.A. toe, vul aan tot 1000 ml met water en meng.

3.3 E_o_E.m~lË_e,!:!yie..:.

Formaldehyde (HCOH), 37%

Bereiding:

7,5 ml.

Verdun 7,5 ml formaldehyde tot 1000 ml met water. Bewaar de oplossing in een bruine fles. Bereid lolekenlijks een verde oplossing.

3.4 .E-!o~a~i.!i~e-"§_t~c~"-o.E.l~s~i~g..:. p-Rosanilinehydrochloride

(NH2

c

_{6H4 ) 2}

c

_6H4NH.HC1) Bereiding:

1 g.

Los 1 g p-rosanilinehydrochloride - of 0,9 g p-rosaniline vrij van base en 0,3 ml geconcentreerd zoutzuur - op in 500 ml water. Heng en filtreer de oplossing na 3 dagen. Bewaar de oplossing in een bruine

fles.

3. 5 ..P.-!o~a~i .!_i ~e_"~e_E.k_: ~p.!_o~s_!;_n,a. p-Rosaniline "Stock"

fosforzuur _{(H 3P04)} geconcentreerd Bereiding:

80 ml 125 ml.

voeg 125 ml geconcentreerd fosforzuur toe aan 80 ml p-rosaniline "stock" oplossing (3.4). Heng en laat de oplossing 15 min staan. Vul

aan met lolater tot 1000 ml. Bewaar de oplossing in een bruine fles.

4. Apparatuur

Auto-automaat zoals b.v. een Auto-Analyzer Il Systeem (Technicon) be

-staande uit:

a. een monsternemer,

b. een pomp,

' I

c. een menggedeelte (analytica! cartridge),

d. een colorimeter,

e. registratie-apparatuur (recorder),

f. microcomputer voor de sturing van het systeem en de berekeningen

van de analysegegevens.

5. Standaarden

5.1 ~S!_o~l(_ ~t~n~a~r~,_1Q.O _m~ ~0

_{2 /.!_.}

Natriummetabisulfiet (Na 2

s

2

o

5 )

Gedestilleerd t'later Bereiding:

0,1483 g

1000 ml.

Los 0,1483 g natriummetabisulfiet op in ca. 900 ml gedestilleerd

wa-ter. Vul aan in een maatkolf van één liter en meng.

Bereid dagelijks een verse oplossing. Bewaar de oplossing in een

koel-kast. 5.2 Werkstandaard.

---HL "Stock" standaard mg/1 2 2 4 4 6 6 8 8 10 10 12 12 14 14 Bereiding:

Pipetteer de aangegeven hoeveelheid stockoplossing (5.1) in maatkolven

van 100 ml. Vul aan met water en meng.

Bereid dagelijk verse oplossingen. Bewaar de oplossingen in een

koel-kast.

6. Opmerkingen

6.1 Voor de bepaling van vrij sulfiet hoeft alleen het ven1armingsbad

afgekoppeld of uitgezet te worden.

6.2 Het systeem moet 30 min voor dat er met monstername gestart wordt stabiel zijn.

6.3 Het verdient aanbeveling om met glazen monstercupjes te werken i.p.v. polystyreen.

6.4 De stand van de standaardcalibratiecontroleknop op de colorimeter bedraagt ca. 3,7 bij 10 mg

so

₂

11

op 60 schaaldelen.

6.5 Er is niet aangetoond dat het werken met stikstof i.p.v. lucht noodzakelijk is.

6.6 In een tijdsverloop van 0-6 uur is geen standaardverloop aange-toond (werkstandaarden!) . Tussen ca. 6 en 24 uur treedt een progres-sief verloop op van ca. 1% tot 5% relatief/uur.

Het is derhalve noodzakelijk dagelijks verse werkstandaardoplossingen te bereiden.

6.7 Afhankelijk van de hoeveelheid vrij sulfiet in de opgiet van ver-duurzaamde champignons treedt er bij geopende monsters verlies op door ontwijken en oxidatie. Derhalve moet de analyse zo spoedig mogelijk na het openen van de monsterverpakking uitgevoerd worden. Hierbij kan als maatstaf gehanteerd worden een maximale tijd tussen het openen van de monstereenheid en injektie in het systeem van 30 min.

6.8 Daar de methode niet lineair* is dient m.b.v. de AA II computer middels quadratische curvefitting de best bijpassende regressiecoëf-ficiënten berekend te worden (*zie ijklijn 3).

6.9 Voordat het systeem uitgezet wordt moet er minstens gedurende één uur gespoeld worden met water.

Literatuur

1. Teehoicon ioclustrial methad no. 156-81F.

Total and free sulfur dioxide in food products.

2. Teehoicon ioclustrial methad no. 3-F-/75.

Sulfur dioxide in wine (free).

3. Food Inspeetion Service Utrecht.

Methad free and total sulfite 01-80. 4. Methad ISO 5522.

t

2.20 2.00 1.80 -1.60 1.40 1.

20

1.00

o.so

0.60 0.40

.

.

_i •• t:.... ') '

o.oo

~· •.. ~>1<:-i:* LEAST **~~

*

~: SUUAF~E

FIT

Y=A*X~B

GEOMETRIC

***

***

*

*

t:

*** LEAST SOUA~E FIT - GEOMETRIC ***

••• Y=Aax-e *** ViolftiAEILES: l •X Y ~r IH~UT O"UI ,uo •. I obs, t.ub•• I Obt, sub5o obs. tubt., abt. tUbto obt.o 'Ubto Obtt iUOto obs, H ~n• bncd H •1t.•1n• I 2 I J 4 ~ 4 7 7 0 ~E~H Of X AHO Y: 8 X• 2 X• 4 X• 6 X• 8 X• 10 X• 12 X• 14

SlO OEYI"IIOHS : 4.320<9

kE~RESSION COEFFICIENIS: "' • l 7. 5 789 I • .YS4'144 IAbLE OF RESI~UALS: y JJ 48 6 100 8 129 10 157 12 191 14 211 SU~ Of Ekk0RS'2 : 77.5123 EXPL. fARI OF S.S.: .996,912• 127 44.6813 YC CAL> 34.0768 46. 0~81 97.29)4 128.054 158.464 188.604 218.515 Y• l l Y• 48 Y• 100 Y• 129 Y• 1~7 Y• 191 Y• ~u EClr ·1.076~4 1.94191 ~ t 70662 .9.61~~ ·1.46609 2.)9641 -7.~14~6 IJKLIJN ' -1---~---~---~---+---+---t---+---+---+---+---t---~-+

o

:o

o

·

4:oo

·

s.oo

1

2.00

1

6.oo

2o

.oo

l4

.

00

--~~~ MG TOTAAL SULFIET/L X

C- membrane

24"

DIALYZER

10

t

10

t

Al

O

190-00.51-03

Flow-schema voor de bepaling van totaal sulfiet in verduurzaaade cha.pignons

Total sulfurdioxide in preservated mushrooms

Range: 0 - 15 mgjl

\ DJ...r>..(DJ...[\ (

0

,32

LAIR

Fin cooler

167-8150-03

157

-B273-32

YEL/BLUE( 1 "40) Sulfurie acid 1 N

BLK/BLK (0.32)

sample

To

F.C. pumptub

116-0492-01

BLK/BLK

, XE' .rn~, ~ 1 _{1 ,Y 1} .;>Ulfuric acid

0.36

N

) UIIl'i/ VIIl'i \V r I V I /: Ormaldehyde:

) v .... , ... , v . , v, Pararosaniline

waste t? sampler • .

Q

GRN/GRN <?-OO) water

wash r~ceptade . ·

COLORIMETER

560 nm

waste .. ~

0

GRY/GRY ( 1.00) From flowcell

50mm

F.c

1.5 mm I·D·

SAMPLER IV

4ojhr