Analytische biochemie: Schriftelijk examen 2014-2015 – Prof.
Sebastiaan Eeltink
Vraag 1 (4 punten), geef de uitleg voor:
a) De elutievolgorde van de volgende componenten in ‘reversed-phase’ vloeistof chromatografie (RP-LC)
b) Joule heating in capillaire elektroforese en noem 2 manieren om dit tegen te gaan. c) Waarom het belangrijk is dat een HPLC kolom gepakt is met uniforme partikels ?
Vraag 2 (3 punten), multiple choice – kies juist 1 antwoord:
a) Op welke principes is een ion chromatographische (IEX) scheiding gebaseerd ? (1) Polariteit en lading
(2) Lading en grootte (3) Molmassa en polariteit
b) Bewering 1: De scheidingsefficiëntie in een gepakte kolom is beter dan in een gecoat capillair door een lagere eddy-diffusie term (A-term).
Bewering 2: De scheidingsefficiëntie in een elektrisch gedreven systeem
(gebruikmakend van EOF) is hoger dan de scheidingsefficiëntie in een druk gedreven systeem (gebruikmakend van een pomp).
(1) Bewering 1 en 2 zijn beiden juist
(2) Bewering 1 is juist, bewering 2 is onjuist (3) Bewering 1 en 2 zijn beiden onjuist (4) Bewering 1 is onjuist, bewering 2 is juist
(vanaf hier zijn de vragen niet meer letterlijk opgeschreven, hier kunnen elementen in de vraagstelling ontbreken)
Vraag 3, SEC:
a) Welke componenten scheiden (+ voorbeeld chromatogram + elutievolgorde) b) Bespreek de kolommen en mobiele fase die bij SEC toegepast worden. Leg uit. c) Calibratiecurve opstellen
d) Van Deemter curve voor SEC. Zijn A, B, C-term bijdrage groter voor grote molecules dan voor kleine molecules ? Leg uit.
Vraag 4:
a) Plaathoogte 𝐻 =𝜎𝑥2
𝑋 is een maat voor de piekverbreding. Deze is gebaseerd op 𝜎𝑥. Leg uit
hoe je via een meting van 𝜎𝑡 toch het plaatgetal N bepaalt.
b) Effecten van k’, N, α bij een stijging in temperatuur in RP-LC scheidingen
Vraag 5, proteomics onderzoek:
Complex mengsel van 20 eiwitten na digestie analyseren met HPLC-MS. Hoe pak je dit aan ? Bespreek o.a.:
a) Welke kolom en mobiele fase?
b) Interface om HPLC aan MS te koppelen + werking interface c) Informatie uit MS en hoe identificeer je peptiden ?
