Onderzoek naar de toepasbaarheid van de ITD-massaspectrometer voor het onderzoek naar anabolica

(1)

Rapport 88.43 Juni 1988

ONDERZOEK NAAR DE TOEPASBAARHEID VAN DE ITD-HASSASPECTROMETER VOOR HET ONDERZOEK NAAR ANABOLICA

w.A. Traag en L.G.M.Th. Tuinstra

Afdeling: Organische Contaminanten

Goedgekeurd door: dr F.A. Huf

Rijks-K\valiteitsonderzoek voor land- en tuinbowvprodukten (RIKILT) Bornsesteeg 45, 6708 PO Wageningen

Postbus 230, 6700 AE Wageningen Telefoon 08370-19110

Telex 75180 RIKIL Telefax 08370-17717

(2)

sectorhoofden projectleider

afdeling Organische Contaminanten (2x)

Overname van de inhoud is toegestaan, mits met duidelijke bronvermel-ding.

(3)

INHOUD blz 1 INLEIDING 1 2 MATERIAAL 1 3 METINGEN 2 4 RESULTATEN 2 5 DISCUSSIES 3 6 CONCLUSIE 4

(4)

1 INLEIDING

Finnigan introduceerde enkele jaren geleden de Ion Trap detector, een

compact apparaat dat met redelijke gevoeligheid in staat was volledige

massaspectra te produceren. Dit jaar werd type 800 gelntroduceerd, dat

ah1eek van zijn voorgangers doordat een "automatische gain control" (AGC) ervoor zorgde dat de meettijd aangepast werd aan het aantal

ge-produceerde ionen in de bron, hetgeen in de praktijk betekent dat het dynamisch bereik van de trap aanzienlijk vergroot wordt, zodat uiteen

-lopende concentraties aan componenten binnen êên monster toch resul

-teert in bruikbare, reproduceerbare massa spectra.

Een andere belangrijke eigenschap van de ITD is gelegen in het feit dat slechts kleine hoeveelheden materiaal (200 pg) aangeboden behoeven

te worden om een volledig spectrum te kunnen produceren, terwijl het

meten van slechts enkele fragmenten uit het spectrum hooguit een

ge-voeligheidswinst van 2 i 3 opleveren in tegenstelling tot de

gebruike-lijke apparaten waar bij de overgang van volledige scan naar MlD een

winst van 10-100 makkelijk bereikt wordt.

Kortom ten opzichte van: de Finnigan 4500 en de HP-}1SD zou venolacht

kunnen worden dat de ITD 800 in de volledige scan mode een

vergelijk-bare gevoeligheid heeft als de andere twee apparaten in de MlD mode. En dat zou interessant zijn, gezien de regelmatig terugkerende vraag,

in hoeverre het mogelijk is om in monsterextracten van diverse, (maar bekende) oorsprong algemeen te kunnen screenen op ongewenste

componen-ten. Dit kan niet wanneer in de MlD mode gewerkt wordt (immers hier

zoekt men naar van te voren gedefinieerde componenten) maar wel in de

volledige scan mode. Het verkregen spectrum kan of via een library

search of via een analyse van het spectrum leiden tot de identificatie

van een onbekende aanwezige component.

2 MATERIAAL

Testmengsel: TNS derivaten van hexestrol, diethylstilbestrol, diene-strol, estraandiol, estradial (a,~), nortestosteron (a,~), testosteron

(a,~), estron, trenbolon (a,~) zearalanone, zeranol, zearalenone en PCB 138(= 2,3,4 - 2,4,5 hexachlorobiphenyl).

(5)

Oplosmiddel: iso-octaan/decaan (4/1 v.v.)

Concentraties 200, 500, 1000, 1500, 2000 pg/~1. allen bevatte 2 ng PCB 138/~1.

Experimentele omstandigheden GC Carlo Erba 5300 Mega Injectie: on column 1 ~1

Kolom lengte lOm x 0,25mm, CP Sil 19-CB fused silica kolom, film dikte 0,2 ~ Chrompack the Netherlands.

Draaggas He; 1 ml/min

Temperaturen 50° (1 min) 0 0 kolom 40 /min ~115 interface 270°C opensplit 245°C exitnozle 275°C manifold 220°C

ITD scan mode: Full scan 60 tot 550 scans/sec.

3 METINGEN

3.1 Met bovengenoemde concentratie reeks werd een linearitelts test gedraaid van lage naar hoge concentratie.

3.2 Aan de hand van de injecties van de standaard met 1 ng/~1 werd per component van de 4 belangrijkste fragmenten de reprodoeeerbaarheid van het "MlD" spectrum bepaald.

3.3 Aan de hand van de standaard injectie van 10 ng/~1 werden een aan-tal spectra vergeleken met spectra van dezelfde componenten zoals ver-kregen met de Finnigan 4500.

4 RESULTATEN

Figuur 1 is het RIC chromatagram van het 1000 pg/~1 mengsel. Het is duidelijk dat sommige componenten niet of nauwelijks gescheiden zijn. Dit was ook niet te verwachten gezien de lengte van de kolom en

omdat er geen poging gedaan is door middel van temperatuur programme-ring een en ander te optimaliseren.

(6)

Tengevolge van deze slechte scheiding konden een aantal componenten niet êênduidig terug gevonden worden op het lage niveau.

De spectra van de in figuur 1 aangegeven componenten waren redelijk

goed, ter illustratie zie figuur 2 en 3. Respectievelijk Diethyl

stil-bestrol en Estron.

In tabel I zijn de resultaten voor het linearitelts experiment gegeven van vier componenten.

In tabel II is, gecorrigeerd voor de interne standaard (PCB 138), de

respons van de diverse THS derivaten weergegeven als functie van de geinjeeteerde hoeveelheid.

In tabel III zijn dezelfde data gebruikt. Echter nu is de verkregen respons gedeeld door de erbij behorende geinjeeteerde hoeveelheid alweer gecorrigeerd voor de interne standaard (PCB 138). In figuur 4 A

t/m 0 zijn een aantal linearitelts grafieken weergegeven, zoals door

de computer van de ITD 800 gegenereerd. Uitgezet is het oppervlak van

de piek tegen de geinjeeteerde hoeveelheid.

Voor de reproduceerbaarheld van het spectrum zijn per component drie

massa's genomen die in de MlD mode gebruikt worden (ontleend aan in

-ternvoorschrift A 437).

In tabel IV worden die massa's gegeven tezamen met de verkregen v

aria-tie coëfficiënt aan de hand van 6 injecties van een mengsel van 1000

pg/)ll.

In figuur 2 is het spectrum gegeven van diethylstilbestrol-THS: ter

vergelijk zie figuur 5 het spectrum zoals verkregen met de Finnigan

4500.

In figuur 3 is het spectrum gegeven van estradial verkregen met de ITD

en in figuur 6 het spectrum zoals verkregen met de Finnigan 4500.

5 DISCUSSIE

De gevoeligheid van de Finnigan ITD 800 is zeer goed. Voor de

steroï-den (TMS derivaat) kon een redelijk spectrum 1o~orden verkregen, in full

scan mode, vanaf 200 pg per component.

Bij de Finnigan 4500 en bij de HP-HSD is hiervoor minimaal 1-5 ng per

component nodig.

Bij quadrupaal machines, zoals de Finnigan 4500 en de HP-HSO, kan de

gevoeligheid verhoogd worden door slecltts enkele massa fragmenten te

meten, waardoor de gevoeligheid van dezelfde ordegrootte wordt, als

(7)

Bij de ITD is het niet zinvol om slechts enkele massa fragmenten te meten daar dit geen winst qua gevoeligheid oplevert.

De herhaalbaarheid van de spectra (Tabel IV) is ronduit slecht.

In Tabel IV zijn de resultaten van twee componenten uitgewerkt . De overige anabolica vertoonden een zelfde slechte herhaalbaarheid. Bij de Finnigan 4500 worden van dezelfde componenten en voor dezelfde massa fragmenten waarde gevonden, voor wat betreft de variatie

coëfficiënt, van maximaal 5%.

De lineariteit wijkt over het gehele gebied nogal af: vanaf 1 ng tot

2 ng wordt wel een redelijk lineair verband gevonden. Ook de spectra

die van de anabolica (TMS derivaat) verkregen worden wijken af ten opzichte van de spectra zoals die verkregen worden met de Finnigan 4500, de HP-HSD en spectra vermeld in de literatuur.

CONCLUSIE

Uit de éénrnalig uitgevoerde experimenten kunnen een aantal conclusies

getrokken worden waarbij bedacht dient te worden dat de resultaten

po-sitief cq negatief heinvloed worden door de ingestelde parameters.

- De gevoeligheid van de ITD is zeer goed - de gevoeligheid in Full

scan komt ongeveer overeen met de gevoeligheid van Finnigan 4500 en

de HP-NSD in "multiple ion detection"

-De herhaalbaarheid van de spectra is zeer slecht. Mogelijk kan dit verbeterd worden door de acquisitie uit te voeren bij een hogere

scan snelheid

- De lineariteit is in het lage gebied (500-lOOOpg) slecht, daarboven is de lineariteit redelijk

- De verkregen spectra wijken af ten opzichte van de spectra zoals

verkregen bij de Finnigan 4500 de HP-NSD en zoals vermeld in de li-teratuur waardoor library searches niet goed uitgevoerd zullen wor-den.

De eind conclusie is dan ook dat de ITD niet geschikt is voor

confir-matie doeleinden noch voor identificatie van onbekenden door middel via een library search, tenzij deze bibliotheek zelf is opgebouwd.

(8)

Tabel I: Resultaten lineariteit van vier componenten. Interne stan-daard PCB 138 waarvan telkens 2000pg is geinjecteerd

Geinjeeteerde Oppervlakte PCB 138

hoeveelheid(pg) Diënestrol Diethyl- Estradiel Estron (2000pg)

stilbestrol 200 668 969 1114 2934 500 1443 2480 3317 1861 3410 1000 4524 6803 8826 5431 2761 1500 8559 11993 17081 96902 3633 2000 10985 14989 21773 12552 3381

x

3225 VC% 11,3

Tabel II: Resultaten lineariteit van vier componenten waarbij de

respons is gecorrigeerd voor de interne standaard

Geinjeeteerde Oppervlakte

hoeveelheid(pg) Diënestrol Diethyl- Estradial Estren

stilbestrol 200 734 1065 1257 500 1364 2345 3137 1760 1000 5284 7946 10309 6344 1500 7585 10629 15138 8589 2000 10478 14297 20774 11973

(9)

Tabel lil: Resultaten lineariteit van vier componenten. Vermeld is

het quotient van de gecorrigeerde respons en de

geinjee-teerde hoeveelheid

Geinjeeteerde Gecorrigeerde repons/geinjecteerde hoeveelheid

hoeveelheid(pg) Dilánostrol Diethyl- Estradial Estron

stilbestrol 200 3,67 56,33 6,29 500 2,73 4,69 6,27 3,52 1000 5,28 7,95 10,31 6,34 1500 5,06 7, 09 10,09 5,73 2000 5 29 7,14 10,39 5,99

Tabel IV: Herhaalbaarheid van massa spectra van anabolica Component Relatieve int %

H/Z 1 2 3 4 5 6 x Nortestosteron 215 61,1 23,1 43,8 34,8 4'•, 4 38,3 4'•, 3 256 100 100 100 100 100 100 331 44,4 35,9 37,5 47,8 33,3 45,8 40,8 346 55,6 35,9 75,0 34,8 72,2 33,3 51,1 Estraandiol 201 51,3 45,6 45,5 30,3 23,2 37,7 38,9 242 100 100 100 100 100 100 332 44,7 26,7 24,8 33,3 42,6 24,0 34,4 407 18,4 10,0 15,7 15,2 11,1 15,1 14,3 r8843 Tu/IL VC% 32,2 14,6 37,6 27,2 22,5 22,0

(10)

Cl~l~•"

_._d₁_.._\JIFiC'L1/t .") 1_(.• n. _tr

r~v\

_·.;_•_'·_·::'

·~. ~:~~

_L_'!'!

•':"; .t. : · · ~.., .,.

P!

""

rr

...

,

..

'll"'j

A

.

l ,.

l

'G

· nl·n

t,,, ~ ~. [• l

."

j' .·;

~~(;·fi'~~ ~ ~·~i.1:~ : f1l~J·U··) ·."I i.jl 1; .1

~q ~~.},l,.u. ~ .. r1t~~"~J.. [· ... ~ .. ~~·. :i~ ·"··p< l

·i ~1

·l

i

r,.

.,

t~<r

... 1J! ! ~r ,_. • rî 1:

\))MMe

fh

a

H

t

!1

i

~

.tH

. \JjN~~~·.('~,n .J·.

u

L.,

I

\

.i.. t

1

~

[ii

. ...~!.1 lt 1 O~i~ ~!(:•• fl' ~~·JjN 'if;lqjjp~(~ I llil.l h - l(l'C "· ~. ..I

/l'

.I.l

l'

r

''

₁

n

.

t ,., ... :i ;_r fr _r,i _h_.,

ij

n _•~_'I _'_·~F.ti _~_.._..'l _t.. . _• lb_,_·. _.;• _..:1 .-..

~

_n

• ~'

₍

~' ' .

_.

r.I Î:

_.

• 1":, i:. ••• "'.• ~ ,

9,

J

.

0

,U

..

• .;,..

,

.,..

'

T ~~~ ·~ ~L " · '11 rl , .; ~ ( !J. 1 t ·' 'I I

1 PI

'

.,

'

M i'l. -. ·' ~

r,!J!'

J, J )

'

• • ~"J r! • A " ~ ltj ~ n" I ' . 1 f 1 ~ I .,, 4.. . ... .;:. t I . . , .tr ..t • t, ' • • . (} • :1 ·~· d r. ~ , , . . ,

n

.

..

1. . ( ,J .. ,J. . • I ~. ••. . 1 .. ~.~ •..

L

..

.

~ I --,.. ! •. ,

n

.

l00Z

~ !

-

~} t,~!

..

'1 ';.i

jA

~~ •~I •I .• , • ">j' 1.! 1o ,(,!4 "'\I~,.,

j

~I

..

,X...,r.1, ..

\

·~'I' ". ., ,!'.JJ,t ,'"

!

.

.'

..

! .;;..:1 .,

h·.r1~

~

:, ...

?\'l

ETH''ï

~~1

,I

T

'nE~T~WI

t.t~

.VJ.

.

· ...

l.:..d·J , ,,.j.Q

•~~

~J

..

.

r.J

·

1 DI

-:~E'"T?){'I.

..

:~=

( .

.\:l.,n,

;!.

)

i

\l

l.

.t

4 _·

_~

-

L~ ~,\M

'''-1

~~

r

....

n

I

~~P~~~u 1

..

· -·

r

L.:.AM

Cr

'"

=

)

.J~!.J..

,\

'

u

..

r

J

u

~

"~

I

j

n:: IC'-

fJ,l

'

:IV

r.;

i , .,J

.J

~· .~ L~l: .,.,1

3:

1 .1.1

i

()~

:

P

J

EI~

6 l

··~

r

'

·

.~ "1

Ec

1

T

u.,

-1

..

.

w

j

1 ~'

r:

b

i

!

· .l.

f)

r :

:

~

,;

.

~(HD

~

~H;.

1!."11

· n

a

111

:I

[

I

1 f

~

j ..,

I . {I... l(t• '11

~~ ~.

n

·r

t

' ';

• )

t

..

.

~t

1 ·: 1 PI (t 1 . ,

".IJ~

•

r

:

,

1

~

.~.~

.'IJ~' J~hr \l.~

~r.

~

.: ,'f~

!

l

q

! :

q..,

.

nJ

~,~J

q

11 1t

I

! J.

~

,., ,..

r ,

...

;~

J' I

i

I

~

1

I . - )

~

~~

' i I ! "

,I

I

.

.1.

~~

~·

l I

!.J~~

10 I \ \

~

~~

r

l

• i '

!i

1 i' I

j

1

1 J

-

FÇ~

}

1

PQjJ

, fl

j

'

ij

1 I '\ ' ' ' " -'1.1 "\ •

·~

I . I h i

I

'i • ·J "i . I ·"\ _, '1'\1' 'r,l1 ·'j . '1 I I I - .. ~~ 1>1 ..

I

!

I I ' I ,, I .

i

I .1. \,,

!

I

:

L-"... .

:

Lt~:~

L

.

l

• I

!

l

I

!

I

!

I

1:

l!

1

t<

I

i

:

i

<

I

.1.3:

T

P.ENBO

WN

• I

I

.

1 " i •

~

I I •

1 r

\1 IL

'

\..I...L'

;~

,.J

\it-

• .

'1'1

,

rr .!:1·1

· i

...

[r

P'I'~RtJl

r~()

"

l

j

t..u_,, r.-,:l:ti:l!ll:1'!· "..,,. r· •

J

hr~ l'!'l 5 • IJ '"'Ir . r ... !'. ".u .... J 2 ,,..,., •

r

,

..

I

·

I

!

·

~

j

~:;· ï:l~(n .; !'J

'

)

L'J

.. J

:~: lj~~nli !~~~- ~l, ~

I ' ..

r

-

--

·---:·---·-r--r·~, ~ -·r--·-r~·~·,.u~~= PIK~~

16

>'=~--~-wo"••-~~··

1

1JÀiC~1_Gi . '(, ~11!1 . / ' r,, : ;·1, 1'll ~ ···, t·l ~~ ···~

C

~,~RO)

1

203

.r~o

•

'~1 !f.r1~J I ~~r.

.

14

1 ~

'

J

;

"'i: ' ·) ' ~~~.,! ~ ~f!'"i'"

J..f

"

f.1e

.'!',( n ,.., ~ ~~~~~ ~ il~

(11)

100ï.

73 SMP

BMG.

FIB 2• Sllt-=:t:r..- Dt.t:hyl•t:ilb~rol vwrttr~ - ' t .de ITD

?!lij

IY! . i

412 I

I

· j

70

l

383

1 . .

)~:.!;+-r~~4

.

-+.r.,

J

,

~~~J.,~Jr~~~~

1 '

r

~-~~r---r.~t}c~·

\

Jj!\ !J~r,}

lQR

200

309 4Q0

5Q9

(12)

1

O~•r Fl8 31 gp.ct:rua Est:radiol v.rkr~llft

. . t

de ITD _f.J_Ja

73 S~1P

BJ{G

285

129 I

3 ~,

4.1

6 911151

2:~2

yQ

,

4~.ij.44~

ï.,-1

.,l,

.

t,-J-4~,--;~.l

~~9

547 lQQ

298 3~Q

4@0

590

'Ql.~('Cl· \ ~;r~

.

1;;

1 ,...

(13)

I

!

I i I I I j ; :"-, ") •:J 9 --·-- --- - - · · --- -·---- ·-·---·---- ··--·----r--·---·----·---~---·---·--- -1. '} .t '.I ;~ \ ~:10@ ~ r;;·~~~-:

·-'"', -:.~--=,.':1\Jil t=l,Jt ': Tn!- Std.s:- Fi.lena!~e: P.1X.ILT

~: !-{·~·~;-!"'~~C·T4 ,·:t1i~~>Ottnd: 2 of 15

l.-~~ of Sahple ·~~~a of Standa~d) ~s {RHount of

~

~::::

:::

~

j

l

t~o-r•:c·e l at

c

~d i .t .. ::'"•ê\ t S .:1 ;,~;i> l e I : 1 , _d:> c "'. ,.lo~~~-...,..--r--r--,.-,--r--r--r-,...-r-,--r-r--r·-r-.-.--.--.--.-·T-r-ï""~-r-.---.--.-.,.--.--r--""-.--.---,,----.-...,..-,-,--~-~ · ~.cio9 4.000 6 .~00 a.~ea L0.hQ~

Col."rel-:'l-.t·.io!s CJe:ff; ê.· ~·:')9

C i:'.Î i }_, 'f' a t i ü I I p 0 i 11 Î.: S : ·J

(14)

(

E

f

'

j

i i.~>i·.:t~·iun ~:Jot •:_r:·; ...

'·7"'.' !:" ;~'-:\ ._r üf

s

ai'-~}.:·l e / ~! ~-·'2 .:\ & . Wl0 s:.~Js:: Ii lc:nctM~: J~!J~1I~T ~8M~ounct; 5 of 15 01 S t;:;_n .. li:t:c·._-D tJ s ( ?"t "~o un t of ':;üL"":f·e 1 ._-t 7 (~ ct 1 i J:> ·r· .;l t: S ct ~"~:P 1 e In ,_je;:;

Plot <Int S tds) Fil enar,;e: RIH1LT Co:c-:r~e 1 at

<:al i J~:c.~-a t Sal'l'l;ple lnjee CoHpound: 6 of 15 of Standard) vs ( AMount of Oi;

c

u 2 f ? : 'il ' '? '} 9 on 1-:,\Jln t~: 3 ·~ d ) ( 1. i n l L i n > ü r= ::· t} i.· f ~~ ; fJ . :J ~! G on Pü i:·; -t 5 ~ b e cl..' ( I..~ i It ! L i . ~ ~: ~.-.-.--~~~ ' ...--:---r---!J . ~Jt;!& .1. ~~" i~~tJ0

(15)

i r. l";, i; ~;;~'"'·-~

-i

l

! I ! l I .. l~.ti:l. _-,-_··- _-_--- _- _-;_- _·--_..·-.--,-··-.,-·r---r--r--r~-r---~-.-.--r-~-~r-.-· ---r-,---=-·--r-·~---. - - . -.- -,-~. -3.0~~ i ~üQ ~ . 009

u

~38

1w.0

0o

F' iJ fJfl?.i':'Je : RI EI CI :, : ü i-l ::J Co l.l n d : 8 L• .f 1 5 • .. d' i;~:;.nd·:\l:'cU ·.IS (ih.o:ount of · · .• i l .': '!.'

<

'

t: i c. 1 \ P 1 o t: ( I n t S t d s ) FilenaMe: HI~<lLT Co~pound: 9 of 15

o.f St.andctY'd) '..!-5 ~ç~..~ount c.f

.

·

~=-:

-

:J

~~~ed uf Sa~ple~AY'ea

•

r.::· ü .r' i: ... e L ct t i ,J 1: (: n \.? -:·· f . ~~ . ) c; ~J

::.;ai.!h:·.'ct~ion Po tnt~ : 1

~

S~~~l:='"ie in~jt:'Gted) (J,ln :Lin/

ü n C •..i e f f : B .. '3 ~~ U -,n Pr.in(s : -1

(16)

l L 1::, !;'·•.1!3 . ! ... :. .:..:..,-,. .r-. Vl. Vt&r1o .. "t I

I

l -~ I I · .. -, 1~~----2-·--r·-:·---. ---·--:---r---.--.-~---:·-.---,-.-,·-...--·--T-· .. - - . - - - -- , ---···----·---,.-·-....--.-·- -...---_-: . ~500 ·l . öta1J c ün~1 'J . -3;:;~) 1 ~ _ or;~l _ ._:., 1 ~-... ~-.ct i: j t.: n .f ~ t..'l .!.: ( .._ r. i.: ~ t ~t s :. F i 1 en a 1~ tt ~ ~ I J< 1 L I Cu Y .. l~ e l ct t ûil (:{_!-;_=:ff. l .;-)!,.:12; .- _ ~ .. ~;.< lt.; <:o~j)ûLlnt.t, l1 u.f 15 t:ctll b.{-·ü t

.... !··..:., •Jl. ::;._\,;,Fle/H.i.··.:a .:;_;:- :St.~1.n~l.=..:c·d) •;s ~Hl":Ount. uf S.:=u.;ple 1nJeL~ on

l~ 0 J. n t;:; : .;

e d ) i.. .L i 1 1 i J~ 1 r •. -·

6.!300

•..:.d.l.i,.x·dtiul• f'lo ~ C!n t Sh.ls) ?i!enaMe: RIXILT Correlat

;·.::.:i. {;'.JGLvl·f

\~red Gf SaM~ie/A~ea of Standa~CodM) povus nd(AM: oun12 ut of SaMf 15 pCctl e l iabrat nJ eC

(17)

. __ ) ' j.;\.~ ... ; ;:.;..~-'-

-

-·

_·_-·~ ·-- • ---.--·--"----·, --r-r-,-·-r-...--~---.--;-...-,..-,---~~--·--~ 1--:--r- - ; -,--·- . :-.-·-r--1 -.--- -,. · ~~! -~~! .-:t t t~tJf& (1 ~ !~(..:~:; ,_-; L• I J/"~1'IJ .. J ·t'..' -.. . . , . ~ -~ 1 d :~ ~ 1 u t ~-

r

1 ~ t _:;

~:

··; :,<•:.:

,;~-:

:~

_._.,t.;.d i: r

:L-

-2

c~

:; t.~1-=: -. .!· .1 , e~t-":" ... J~t:': J~l' 1<IL7 r:o:0:!'·t! l n ·::ü ..-~).1-U tti J -d: J. !J -.."1 f 15

<:ct

J i -~-.. ~o:--.. iuh .:~{,-2-f;·: i),'_199 .:. :J n }" o -~--:, ~..::: : 5

0 f [;!·~.:-:d . .Et~'d) :""s ( ;li'"'IGlliJ~: of ;;2 ... t':';~1~ In.!e ' t-d .:' i", L j i1 ~ L 1 z s ,'

1

·-..:.' I

I

'ï

l

·~·

ls:.;

): ...

:-•

-,-- -

-

,-~---,

~---.---r---r--,-r-r-

-,.-,----.--,-

--,-

.--,---,---

.--~-.----r--r-r~

..--r

---.-·-~--:---r---,--

-

.

-a.d8Q

4.~0@ 6.~e~ a .éA9 19. Q~0

F i 1 en êl~e :

:

ru

1\1 LT r:o :..-·:c·e 1 "...!;

(oMpound: 15 of 15 Calibrdt

(18)

1ee.e

' I . -_i

se.e

!

11/E

200

FIB S: 9p.ctrum Diethylstilbestrol verkr~ . . t

FinniC)Ml 4500

SPECTRUM OIETHYLSTILBESTROL TMS

383

217

231

259

309 35B

397

409

412

450 50816

(19)

l..tl ._. .• f_) .:J: _e_n·-· •Y o:··J l_t,",;

·

• I ~· u:, ... I tJ "tl· 1-· ._,...

,_

.

:-. l-· ,_.., :::1 -::r: •··• 1-· - 1 ·:X <1: C) C•

.

o: lU 0 ....J '=' ·~ CJ <J:: IX ~- tn I. IJ o:t r

·-...

•S:• .J _, .. --:. • • I ... r-·1 rt: ,-· .. ('•I I- · -IJ) •S• + ··.:· _:2_: (St : .. --: Ç·-1 t.S:t ... ) •• f•.:: Ü~J , .. _ 1-li') 1:: ("·J lXI v-1 :-:• • • IJJ o: (Ti ,_,., .... 1---...· ( ., ,_, ... IÏJ-.;:1· 0 ü.. ('(I •• l.Ll lf t · .... l•J t".:,• -::-.. "~ . J :,;.""": , .. -, .... n. <:r: ,_.., ' ·~ :::c <)' i"'·l ·"T -.,.-'!:-: b Lf"Ï CU •.1 ... ;. (··~ I (t

fi

.,.

....

~

....

lL

•

'0

i

r

_L Jl.

f

....

0 'f'4

1

L +' 111 UJ

~

L +'

w

ft

" ..0 •_(":r_-.!-t _{- ·}

.,.

....

"'

Ç'·l •.'·1 • :~-~~~-====

.

-~~~ ~ r ··-·~) Ü) r··-·-·-·-· ~-· ... (l) li'l

--.

,_ •:•) . 1

..

.1)--- - -. I,S) - 1.1.• 1/') . tn· ~· r ··-'<1·-- --l.f) (•) ...

---·

--·~.) - ·<j·

-

· '

'

_:r-(··1

-l •

.::.:·

r··-

---tS.•

-

-...

_.

-· iS.• - - r!:.)

~

-

:

~

:

~

v-1 r----r--,----~---,--~--~----~--,----r--- ... IS

.

• ~I c:;:. ·~· w ·· .. r. ·.1· _.._. '· :

'

L ... ...J ... J _ _ • l----.l- ·---~ - .. J _ __ , l _____ ,!_ __ L----l ·~-....

.

~ r.:;• ("::.• l.ît

.

....

o;j· ·~· l.t"·

,

.

J

,·.-,,t ",) f •'·• 1--,' :~.

1:.

I

I :::-.:L. :}· -:~ i .:-:.11 1;,!, ... 1·, I

-I

.

,

-

....

r-

:,-;·

.

-

.

· .r

·~<·L ...;·

_

I

: .

.

r

~

;

_ . ., ___ ·; ·=·-·1 ..,_t I. [ I l,,.(t . (·~·~ ,..,., - (é· c~~ ç-·· (•') lf~· •:::.:· \•) ~·

· -=·

(':